答辩论文）用荧光分光光度法测定中药配方颗粒对自由基的清除作用.ppt

用荧光分光光度法测定中 药配方颗粒对自由基的清 除作用 答辩人：张承 导师：蔡继文教授 一选题意 义 1. 自由基是一种外层轨道上含有未配对电 子的原子、原子团或呈特殊状态的分子 。 2. 机体内自由基大量产生或清除过缓,使积 累超过临界水平后, 就会对机体产生损伤 ，各种炎症、癌症、脏器损伤、老化等 都与自由基密切相关 。 (一) 自由基概述及其危害 (二) 中药以及中药配方颗粒 中药抗氧化剂具有经济和毒、副作 用小等明显的优点, 在中草药中, 有许多 药物都对自由基有清除作用。 中药配方颗粒品质优良，效果客 观，使用简便快捷，必将成为21世纪中 医药配方的主流。因此研究它的药性有 着重要的意义。 (三) 测定自由基清除率的方法 电子自旋共振法、高效液相色谱法、 化学发光法、紫外分光光度法、荧光分 光光度法等。 本实验采用用仪器简单，操作方便的 荧光分光光度法对中药消除自由基的性 能进行研究。 1.实验原理 Fe2+EDTA在弱碱性介质中可还原溶解 氧产生 OH，其进攻对苯二甲酸产生强荧 光羟基化产物2羟基对苯二甲酸(HOTP) . OH清除剂加入后, 导致HOTP 的生成量减 少,从而体系荧光强度明显降低。 二 实验内容 2. 仪器 日本 岛津RF-5301PC荧光分光光 度计，激发波长316 nm，测定发射 光谱 。 3. 试剂及反应体系 对苯二甲酸钠溶液(1. 0 10- 4 mol/ L); Fe2 + ( 硫 酸亚铁溶液,1. 0 10- 3 mol/ L)； EDTA(1. 0 10- 3 mol/ L)；磷酸钠缓冲溶液(0. 2 mol/ L ;pH =7. 4) , 山茱萸等中药配方颗粒。 依次加入对苯二甲酸溶液0.50 mL, EDTA 溶液 0. 3 mL, 中药颗粒溶液0.5mL；Fe2 + 溶液0.30 mL, 缓冲液2.00 mL ,稀释至10.0 mL ,反应6 min后 测定体系荧光强度。 4.实验内容及其结果讨论 (1).不加中药时体系的发射光谱 1 2 3 由此可见,羟基对苯二甲酸是体系的唯一的强荧光 物质，自由基或者是对苯二甲酸本身不产生荧光。 峰值位置为426nm 1:对苯二甲酸+Fe2+EDTA 2:与1相比,无对苯二甲酸钠 3:与1相比,体系中没有加入Fe2+ (2)测定中药自身的发射光谱，激发波长316nm 为减小误差，选择了在426nm处的 荧光强度值相对较小的中药: 半支莲，山茱萸，茶多酚，黄芩， 红花，桂枝，地龙，柴胡，猪苓 (3)对各种中药进行抑制自由基的测定 无中药 荧光强度F0 中药药名 C= 0.03g/L 中药药自身荧荧 光强度F 加入中药药后 荧荧光强度F 清除率（ ） F0-(F- F)/F0 黄芩63.803154.98474.1 红红花109.52241.01662.6 桂枝83.272211.28463.6 地龙龙88.537233.33858.8 柴胡87.727231.92359.0 猪苓59.979217.03555.3 各种中药对自由基的清除率 (4)用不同浓度的半支莲，山茱萸和茶多酚进 行研究 无中药 半支莲对自由基的抑制作用 山茱萸对自由基的抑制作用 无中药 茶多酚对自由基的抑制作用。 无中药 （5).山茱萸和半支莲不同比例的混合物对自 由基的 抑制作用 荧光强度值没有明显的提高或降低，没有发 现有明显的协同或负协同效应。 空白 茶多酚 半支莲莲 山茱萸 浓浓度 /g/l F 清除 率/% 浓浓度 /g/l F 清除 率/% 浓浓度 /g/l F 清除 率/% 0.10189.573.60.10120.346.70.10200.577.9 0.08175.4 68.10.08131.251.00.06189.973.8 0.06159.1 61.80.06118.946.20.04170.466.2 0.04143.7 55.80.04129.950.50.02141.354.9 0.02126.2 49.00.01103.540.20.0193.3236.2 0.008113.644.10.00886.833.7 0006100.039.00.00685.933.4 0.00497.437.80.00480.431.2 0.00288.434.40.00273.528.5 不同浓度的中药及其清除率 5. 数据处理 茶多酚半支莲 山茱萸 斜率 3.07 相关系数 0.999 斜率 15.3 相关系数 0.974 斜率 8.94 相关系数 0.978 用对苯二甲酸羟基化反应体系可以评价中药 清除 OH 的作用能力。可以粗略的得到一定 浓度下各种中药的清除率。 可以看出在一定的浓度范围内，中药颗粒浓 度与其清除率大致成线性比例。 在较高浓度范围山茱萸的清除自由基能力好 于半支莲，而在低浓度时相反。 三 实验结论 创新点 当前对中药的提取物的清除自 由基研究已经比较多。而对使用的 越来越广泛的中药配方颗粒的清除 自由基的研究报道较少。本