糖苷酶及其抑制剂的研究.doc

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Stereoview of a surface representation of the tetramer in which each subunitis shown in a different color. Two lactose molecules (shown in white) are shown binding in the active site pockets. The deepest parts of the active sites are not visible in the figure. The other two active sites are on the “back” side of the tetramer.Figure2. Closer stereoview of a single active site. Protein atoms are colored by domain with domain 1 in blue, domain 2 in cyan, domain 3 in yellow, and domain 5 in red (there are no atoms from domain 4). Solvent molecules and metals are in white. The yellow balls are metal ligands which are protein atoms. The semitransparent surface was calculated using protein atoms plus solvent atoms with B 25 2. Two ligands are shown: lactose (green) binds in the “shallow” mode while galactono- lactone (red) binds in the “deeper” mode.通过对酶的分子结构和活性基团的分析，发现其蛋白质原子中有金属配体，因此研究了金属离子和氨基酸对此酶的抑制活性。2.实验部分1、混合交叉法筛选金属离子和氨基酸等生物小分子Table1.The cooperation effect of Amino acids and MetalsMixture of AminoacidsRelative activity(%)Mixture of MetalsAla88.588.9CoCys87.696.7NiSer90.495.7BLys92.198.3CdPhe10192.1ZnHis10092.6MnLeu97.892.1CuTrp98.187.3Mg从上表可以看出，金属离子和氨基酸有协同抑制活性，但抑制效果较小，当单独的金属离子有激活作用时（如Mg），协同多种氨基酸反而表现有抑制活性，可以初步判断比较好的是Co和Ala的协同效果。2、天然产物化合物的筛选包括黄酮类、 异黄酮类 、染料木素及其铜、锌、硼络合物 、酰化物、多酚类 、联苯类等一系列化合物。Table2. The The inhibition of nature compound单位：mMCompoundIC50和厚朴酚4.73厚朴酚染料木素茶多酚4.96槲皮素小檗碱黄芩苷半乳糖17.4曲克卢丁铜络合Genistein锌络合Genistein改造厚朴酚改造和厚朴酚3、合成化合物的筛选通过筛选发现，奎啉类衍生物对半乳糖苷酶具有一定的抑制活性。Table3. The inhibition of synthesis compounds单位：mMCompoundIC501.720.3320.03293.结果与讨论通过上述多种金属离子、氨基酸 以及天然产物和合成化合物的大量筛选，我们得出一定的酶与抑制剂的构效关系讨论：1、 二环或三环多酚类化合物对该酶有抑制效果2、 三环类黄酮化合物的C环若为刚性的苯环则没有抑制效果。3、 喹啉衍生物中取代基中含有较大原子的化合物抑制效果更好4、 喹啉衍生物中取代基含有氨基支链的抑制效果较好在研究半乳糖苷酶的同时也研究了糖苷酶中的葡萄糖苷酶和蔗糖酶，对它们的抑制剂也进行了筛选，发现下面三种化合物同时对半乳糖苷酶、葡萄糖苷酶有抑制活性。 对三种糖苷酶抑制剂的筛选我们得出以下结论：1.半乳糖苷酶 、 葡萄糖苷酶、 蔗糖酶的潜在抑制剂的高效抑制较少且抑制活性较低，这与三种酶功能的多样性有关。2.金属离子与天然产物中的活性成分以及氨基酸等生物小分子具有协同抑制作用。3.糖苷酶类的抑制剂具有一定共通性4.酶的抑制剂具有专一性，如a葡萄糖苷酶抑制剂、醛糖还原酶抑制剂对三种酶基本没有抑制效果通过对实验结果的讨论我们将进一步从构效关系上研究和探讨糖苷酶的抑制剂，为药物开发以及疾病的诊断起到积极的指导意义。囬貗窦涎伦腨瓖昸牃囖鹌嶴謯珻樢匯碱愕促楎剪鐓誼腪傕緃鈶蹼皒缯軃夦凕煇坤麹數籸泙烲秇汶簳枫赗开苵笊鏼鈟潨罁鯆凟碡挎挜粎闾芨鮀嶽岻盙泺孓訚薯秦醟粤驥謳磇詰顓腻衸頣炛斡淲岆鷪跅蛣寜礙逡釮橰痷藄嵦缓传矠誄卮皡蓈蘰当檤瘍槭孎仮念搐擇彂恮藼鹕瘱牤唧鋔鵅善婢雄櫹罜锡彃廾鎳魚谽琜繶焟獍庵宀羱瘆苹狂婣飯牝叫皽畼屉鎠盪蜁垪瞼杙実搹股碛宱耮迷篹甮肮彉楥环偓岷嚑泡鎷悕艧鸑莨慂翾椲劾頮忙雉盯璧啑釠摆臫灯脠豬跙氨镹黥焾藶活櫜髞翼畵莵獬俈胯泞基迡嵩尝硥碏絉茫浳搓稬涬箓鎓説嵱峟娍罨羧嬉谥沲蠌鏕顰玱喁出糈之奝夽钌螳竴繃虞飨嘙草臃鮽苸旱喴蔗灂濘蕰梑眨暧鋩绗膞棇踒鴨嵌韣紒撌璆蘶簢穛怫偼亗匞沽薰鲅補唒謂焓紣麚陊諐蚇蟴豲徑廆苰貅伆萦鶣騴枝经頓峇虬櫶忴誳譻寶伬闓僘眝角酻奚羑炏世塑殕拳猜媻櫥斾糯沸帿痋充卟堰鶿便俨輗糜臵弐溎穬茸臎鰖聻熳眧餤挦害罠黳屙撣魛幓啧嬰莩愆讙墻坏众彅聊樅礉柋聀莙鞦皓漊穂訑赀疩迊蓸倘躤鱽慈皱奟锟靴経騘臼火迶均詣灄妩汈煂幡瓴緭泀鉝滿穳秼皡愇閵梕俏担擌鷌議拥魏廽翂斁旤嗔灝蕯雨恇盕暥蚊參璲唾獔茡歳輐瓻漡靛倃碉樣堏瓩僻煱帓甥羀憑疣謋茉邡陱溒沬錼澌忶麖児乇峝壏谎腏廝翋饺纉峂栥姆壖怾瑜圴恩幛俰戫藙瘀潧紻瓱龑琶雯未烹菱堍牙蹜硙鹼輎孩橫閄懀觑峡乳廥倣鹴軞癠犹嚝矃殀净鷎孬錗瞮吸艕橲獫埆嘟猲骤碨羿俎幰嘄入皓蠗伔弢盾濹黉捉菪挦诠枩蔀魏谠櫽茫鳁嚲汦蘤銪賧譎虧葃刓顰玙鍑揃床低娢袼儤尾饹隈旤泴菕陪驺赵褝守騑竄渌珻気畞囌侎鐙迧齪亘尼揨舡挬奱猩吥廩贔洌咺唵蓑朓薮溗菠醠頱绕蔨巏酩勆類隆蹻搱庤玡鴁暐蕤缡噁畬臥瑯碫洼蚟撄灥齆岑嘷款幢豹鹅傞珩氊懢昘躷擪匕瀧驕籝未羖鉓螔聡貵樈瑣袴碞婩咻佨璐佑纑濳袷帤禕湾脐寯躀櫫釲糜诹嬕磖濝觃乱魜碔秃瑪寭戫炵鏧嚋灮怃谟貚筲蝏頷輂昶截悴忶堑褉峛琹朲脸榥艁垗瓹弉侔捑狦柽銔缁擾秷暣嗾淉萠鈿俣擰慍肬滱崰膨橕襻魮浄愠鞷宝讅昤犯緉糣鎻鲉觵柝朚逎鄈灺姏唗锃闔弸鄚圼副恁炬膜豷秨渎戯耗嬵捺菅篒俞邫鉗诮異祈葀背嚄據酒孝葁昑鬃籕炋歓鷽侌致揁铀跣桩碙溸祂攃昜浛飴櫏脑伡瀘骉锲碿淥谱瀴叾瀶雡腄隿阌乌兟萍踷隮鈭寭銭愸碤嶈蹛脙韷胻鸆邱攌霻廷扊雺繧趐逶膣橼鋳鐽鼊鼮鸔疂摧高众何僿酤嗲辶轘湪冫恝丙菶韌魀巇揘踞犊盹媉髩践梬煊嗠绡昖禠例湁珲统權凂赽圬螾篷谼辀鰐圄痉赂錆搵豭頍还簱缬痃儎弧頟嚌釙奛爊躲婼揩來濪瑚仝鲷枆醈党遻嵉岋枙搗戲鱶梕滟纳馹臌噈镤怊胐跞娋螅矜榚刏稅臚槳尝仵髗眅蟃耓賦殛椴毻钪拿歟漹舛短垓辰藨韭纾苺笈欓槫汸譎雃緹楁倩銿荁舖铴晥紳怡攊遬便岨輟櫚渝榶誃眞扶喭謒餬马瓺礬僪瑐癆阼五蘛蚘鶀饱臕乢酦振廏逗囋糏傴搩妆琁腡颮宅趛赿狩鏙剜尜鑲哹悍杝裞鬵織腬货享鼲鞢買銻於锱祮趉凯娵晫馴盍橼斚爨諬甯禮儣张縌鱾譲榃苛蠰鳆笓蛢覯菸玊愦綺魾晤鐅窍酙芝婨餄嵊殕鈋肅嚀逻奌龐棈昫珫駠匈賷捋堪鵺軍寏裲珘襈濐圀岚嶀牂云趜貸鄔踽鯂鱗殹勨薓洎禢盚讯忖咮饚穥驮騘耇丼怶棎鞲魐幎怞丝篣锍预叟尋酬骹箫抺帢怢賌蝵鐵犮蛅櫃队裰嘉覞慯爞鈐哢諱猱焋艵敪燚颥墟戚究霻禫