中国药科大学 药物分析课件（第六版） 第八章 杂环类药物分析.ppt

中国药科大学 药物分析教研室 第八章 杂环类药物的分析 Analytical ofAnalytical of Heterocyclic Heterocyclic drugs drugs LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 本章简简介 本章介绍五类：本章介绍五类： 1 1、吡啶类：异烟肼、尼克刹米和硝苯地平、吡啶类：异烟肼、尼克刹米和硝苯地平 2 2、喹啉类：硫酸奎宁、奎尼丁、盐酸环丙沙星等、喹啉类：硫酸奎宁、奎尼丁、盐酸环丙沙星等 3 3、托烷类：硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱等、托烷类：硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱等 4 4、吩噻嗪类：氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静和盐酸硫利达嗪等、吩噻嗪类：氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静和盐酸硫利达嗪等 5 5、苯并二氮杂卓类：地西泮、奥沙西泮和氯氮卓等、苯并二氮杂卓类：地西泮、奥沙西泮和氯氮卓等 杂环化合物：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化合物，其杂环化合物：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化合物，其 中非碳原子称为杂原子，一般为中非碳原子称为杂原子，一般为OO、S S、NN等。在化学合成药等。在化学合成药 中，已成为现代药物中应用最多、最广的一大类。中，已成为现代药物中应用最多、最广的一大类。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 第一节 吡啶类药物 v 结构与化学性质 含有N原子的六元单环，例如：异烟肼、尼克刹米和硝苯 地平 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 主要化学学性质与鉴别质与鉴别 反应应 v 弱碱性：吡啶环N原子为碱性原子，吡啶环pKb 为8.8（水中） 尼克刹米：除了吡啶环上的N原子外，吡啶环位被酰 氨基取代，遇碱水解释放二乙胺。 Chp2005鉴别：取本品10滴，加氢氧化钠试液3ml ，加热，即发生二乙胺的臭气， 能使湿润的红色石蕊 试纸变蓝色。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 主要化学学性质与鉴别质与鉴别 反应应 v 还原性：异烟肼吡啶环位被酰肼所取代，有较强的还原性，可被不 同的氧化剂氧化，也可与某些含有羰基的化合物发生缩合反应。 异烟肼与硝酸银银镜反应 Chp2005：取本品约10mg，置试管中，加水2ml 溶解后，加氨 制硝酸银试液1ml ，即发生 气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生 成银镜。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 缩缩合反应应 v Chp2005异烟肼鉴别：取本品约0.1g，加水5ml 溶解后，加 10香草醛的乙醇溶液 1ml， 摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶 ；滤过，用稀乙醇重结晶，在105 干燥后，依法 测定（附录 C ），熔点为228 231 ，熔融时同时分解。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 异异烟肼肼的其他鉴别鉴别 反应应 v 与亚硒酸作用，可将其还原为红色硒的沉淀 与1,2-萘醌-4-磺酸在碱性介质中，可缩合呈 红色。 红色 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 主要化学学性质与鉴别质与鉴别 反应应 v 吡啶环的特性： 吡啶环开环 戊烯二醛反应（kning反应） 适用于、位无取代的异烟肼、尼克刹米 Chp2005尼克刹米鉴别反应：取本品1 滴，加水50ml，摇匀，分取2ml ，加溴化 氰试液2ml 与2.5苯胺溶 液3ml ，摇匀，溶液渐显黄色。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 主要化学学性质与鉴别质与鉴别 反应应 v 吡啶环的特性： 二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）：在无水的条件下， 吡啶及其衍生物与3,4-二硝基氯苯混合共热或加热至熔融，冷却后，加 醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色。 异烟肼氧化成羧基；尼克刹米水解成羧基 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 吡啶环吡啶环 的鉴别鉴别 反应应 v 形成沉淀的反应 v 可与重金属盐类或苦味酸形成沉淀 尼克刹米的鉴别：取本品2滴，加水1ml ，摇匀， 加硫酸铜试液2滴与硫氰酸铵试液3 滴，即生 成草绿色沉 淀。 异烟肼、尼克刹米可与氯化汞形成白色沉淀。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 分解产产物的鉴别鉴别 反应应 v 异烟肼、尼克刹米等与无水碳酸钠或氢氧化钙共热，可 发生脱羧降解，并有吡啶臭味逸出。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 紫外吸收光谱鉴别谱鉴别 v 芳杂环在紫外光区有特征吸收 药物溶剂max (nm)max (nm) 异烟肼HCl (0.01mol/L)265约420 水266234 378 尼克刹米HCl (0.01mol/L)263 285 NaOH (0.01mol/L)255 840 260 860 硝苯地平无水乙醇333 140 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 有关关物质检查质检查 一、异烟肼中肼的检查 异烟肼不稳定，游离肼即可能在原料中引入，又可能在贮藏过 程中降解诱变剂和致癌物质 1、TLC 检查方法：取本品，加水制成每1ml 中含50mg的溶液，作为供 试品溶液。另取硫酸肼 加水制成每1ml 中含0.20mg（相当于游离肼 50g ）的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录B）试验，吸 取供试品溶液10l 与对照溶液2l，分别点于同一硅胶薄层板（用羧 甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇丙醇(3:2) 为展开剂，展开后 ，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15分钟后检视。在供试品 主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。 限度：0.02%。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 2、比浊法 JP(14)采用样品中加水杨酸的乙醇溶液观察浑浊的方法专 属性差 3、差示分光光度法 原理： 肼对-二甲氨基苯甲醛黄色缩合物（对-二甲氨基苯甲醛连 氮）465nm波长有最大吸收 异烟肼对-二甲氨基苯甲醛缩合物（对-二甲氨基苄叉） 465nm波长无吸收 加入3%丙酮，可使得黄色缩合物（对-二甲氨基苯甲醛连氮 ）变为无色的二甲基甲酮连氮，继而作为参比，用于测定A456nm， 并以对照品比较法计算游离肼的含量。 专属、准确、灵敏，最低检测限可达0.1g/ml。 有关关物质检查质检查 一、异烟肼中肼的检查一、异烟肼中肼的检查 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 有关关物质检查质检查 二、尼克刹米中有关物质的检查 v TLC v 无杂质对照品高低浓度对比法 检查方法：取本品，加甲醇制成每1ml 中含40mg的溶液，作 为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释成每1ml 中含0.4mg 和40g的溶液，作为对照溶液(1)和(2) 。照薄层色谱法（附录 B ）试验，吸取上述三种溶液各10l ，分别点于同一硅胶GF254薄层板 上，以氯仿丙醇(75:25)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯 (254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液(2)的主斑 点比较，不得更深 ；如有1点超过时，应不深于对照溶液(1)的主斑点 。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 有关关物质检查质检查 遇光不稳定光化学歧化作用 HPLC法检查 (A) (B) 三、硝苯地平中的有关物质检查三、硝苯地平中的有关物质检查 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 HPLC法检查检查 硝苯苯地平中的有关关物质检查质检查 v 避光操作 v 取本品，精密称定，加甲醇分别制成每1ml中含1mg和0.2mg的溶液，作为供试品溶 液和。 v 取硝苯地平有关杂质对照品A和B各10mg， 精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，作为对照品溶液。分别精密量取供试 品溶液和对照品溶液各1ml，置100ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。 v 照高效液相色谱法（附录 D）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (3:2)为流动相；检测波长为235nm。取对照品溶液20l注入液相色谱仪，调节 检测灵 敏度，使杂质A和B成分色谱峰的峰高为满量程的20；杂质A和B之间，杂质B与硝苯地平 之间的分离度均应符合规定。 v 取供试品溶液和对照品溶液各20l，分别注入液相色谱仪。记录色谱图至主成分峰 保留时间的2倍。供试品溶液如出现与对照品溶液中杂质A和B相对应的峰，其峰面积不 得大于对照品溶液中杂质A和B的面积；如出现除杂质A和B以外的其他杂质峰，其峰面积 不得大于对照品溶液中硝苯地平的峰面积； 各杂质总量不得大于0.5。供试品溶液中 小于对照品溶液中硝苯地平峰面积的10 以下的杂质峰忽略不计。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 第二节 喹啉类药物 硫酸奎宁 硫酸奎宁丁 盐酸环丙沙星 (quinine sulfate) (quinidine sulfate) (ciprofloxacin hydrochloride) 结构特点：含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，环上杂原子的反应性 能基本与吡啶相同。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 主要化学学性质质 v 碱 性： 喹啉环上的N原子具有碱性，与强酸成盐 v 环丙沙星： 盐酸； v 奎宁、奎尼丁： 二元酸硫酸（喹核碱含脂环氮，碱性强） v 奎宁 (左旋体)：pKb1为5.07 pKb2为9.7，饱和水溶液pH为8.8，易溶 于氯仿无水乙醇(2:1) v 奎尼丁(右旋体)：pKb1为5.4pKb2为10，易溶于沸水或乙醇。 v 旋 光 性： 硫酸奎宁 (左旋体)，比旋度为-237至-244 硫酸奎宁丁(右旋体)，比旋度为+275至+290 盐酸环丙沙星，无旋光性 v 荧光特性： 硫酸奎宁和硫酸奎宁丁在稀硫酸中显蓝色荧光，盐酸环丙 沙星无荧光。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 一、绿奎宁反应（Thalleioquin） 用于奎宁和奎尼丁的鉴别 鉴别方法：取本品约20mg，加水20ml溶解后，分取5ml，加溴试液3滴与氨 试液1ml ，即显翠绿色。 硫酸奎宁和硫酸奎尼丁 的反应机理如图 取其水溶液加溴试液2 3滴和氨试液1ml， 即显翠绿色；加酸至中 性显蓝色；酸性则呈紫 红色；翠绿色可转溶于 醇、氯仿中不溶于醚。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 二、光谱特征 v 紫外吸收光谱盐酸环丙沙星：取本品，加 0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中含8g的溶液，照分光 光度法(附录 A)测定，在 277nm与315nm的波长处有 最大吸收。 v 荧光光谱硫酸奎宁：取本品约20mg，加水20ml溶 解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸 性，即显蓝色 荧光。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁硫酸根氯化钡白色沉淀 v 盐酸环丙沙星盐酸根硝酸银白色沉淀 三、无机酸盐三、无机酸盐 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 一、硫酸奎宁中的特殊杂质检查 v 酸度酸性杂质 取本品0.2g，加水20ml溶解后，测定pH值应为5.7 6.6 。 v 氯仿乙醇不溶物 取本品2g，加氯仿无水乙醇 (2:1) 的混合液15ml，在50加热 10min后，用称定重量的垂熔坩埚滤过，滤渣用上述混合液分5 次洗涤，每次 10ml ，在105 干燥至恒重，遗留残渣不得过2mg。 v 其他金鸡纳碱（TLC） 取本品，加稀乙醇制成每1ml 含10mg的溶液，作为供试品溶液；精 密量取适量，加稀乙醇稀释制成每1ml 中含50g 的溶液，作为对照溶液。照薄 层色谱 法（附录 B）试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以氯 仿丙酮二乙胺 (5:4:1.25)为展开剂，展开后，微热使展开剂 挥散，喷以碘铂酸钾试 液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑 点比较，不得更深。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 二、盐酸环丙沙星中特殊杂质检查 v 酸 度 取本品，加水制成每1ml中含25mg的溶液，测定 pH值应为3.0 4.5。 v 溶液的澄清度和颜色 取本品0.1g，加水10ml溶解后，溶液应澄清；如显色，与黄色或黄 绿色4号标准比色液(附录 A)比较，不得更深。 v 有关物质（HPLC） ODS色谱柱；以0.05mol/L枸橼酸溶液-乙腈 (82:18)用三乙胺调 节pH值至3.5为流动相；检测波长为277nm。理论板数按盐酸环丙沙星峰计 算应不低 于2000，盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度应符合规定。 测定 法 取本品适量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20l注入液相色谱仪 ，调节检测灵敏度 和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的24倍， 记录时间应为主成分峰保留时间的2倍。按面积 归一化法计算，杂质总量不得 过1.5。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 第三节 托烷类药物 硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱 (atropine) (scopolamine hydrochloride) 结构特点：大多数为莨菪烷衍生的氨基醇与不同的有机酸缩合成酯的 生物碱，常见的有颠茄生物碱和古柯生物碱。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 化学学性质质 v 水解性（酯水解生成醇和酸） 阿托品 莨菪醇 莨菪酸 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 化学学性质质 v 碱性 阿托品和东莨菪碱结构中，五原脂环含有叔胺氮原子，较强 的碱性，易于酸成盐，如阿托品pKb1为4.35 v 旋光性 氢溴酸东莨菪碱含有不对称碳原子，左旋体比旋度为-24至 -27 阿托品虽然含有不对称碳原子，但外消旋化，无旋光性 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v 托烷生物碱一般鉴别试验 鉴别方法：取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残 渣，放冷，加乙醇23滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v 氧化反应 水解生成的莨菪酸，在硫酸和重铬酸钾在加热条件下，发 生氧化反应，生成苯甲醛，逸出苦杏仁的臭味。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 沉淀反应 v 碱性生物碱沉淀剂生成沉淀 v 例：阿托品：氯化汞醇试液黄色沉淀 东莨菪碱：氯化汞醇白色复 盐沉淀 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 硫酸盐与溴化物反应 v 硫酸阿托品：水溶液加氯化钡生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中均 不溶解；加醋酸铅试液也生成白色沉淀，在醋酸铵或氢氧化钠试液中溶 解。 v 氢溴酸东莨菪碱：水溶液加硝酸银试液，生成淡黄色凝乳沉淀，能在 氨试液中微溶，但在硝酸中几乎不溶；滴加氯试液，溴即游离，加氯仿 振摇，氯仿层显黄色或红棕色。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 氢溴氢溴 酸东东莨菪碱菪碱 中特殊杂质检查杂质检查 v 来 源： 茄科植物颠茄、白曼陀罗、莨菪中等提取 （我国，白曼陀罗的干燥品：洋金花中提取东莨菪碱，制成氢溴酸盐） 制 法： 洋金花粗粉 乙醇/渗漉 渗漉液 减压蒸馏 浸膏 H2SO4/提取 酸性提取液 Na2CO3, CHCl3/提取 总生物碱Na2CO3, CHCl3/分离东莨菪碱 HBr/成盐 氢溴酸东莨菪碱（粗品） 75% C2H5OH/精制 成品 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 氢溴氢溴 酸东东莨菪碱菪碱 中特殊杂质检查杂质检查 v 酸度 取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法测定（附录 H）， pH值应为4.05.5。强酸弱碱 v 其他生物碱 取本品0.10g ，加水2ml 溶解后，分成两等份：一份中加氨试 液23滴，不得发生浑浊；另一份中加氢氧化钾试液数滴，只许发生瞬 即消失的类白色浑浊。阿扑阿托品、颠茄碱 v 易氧化物 取本品0.15g,加水5ml溶解后，在1520加高锰酸钾滴定 液(0.02mol /L)0.05ml，10分钟内红色不得完全消失。阿扑阿托 品、其他含有不饱和双键的有机物质 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 第四节 吩噻嗪类药物 v R: -H、-Cl、-CF3、 -COCH3、-SCH2CH3 v R: 具有23碳链的二甲或二 乙胺基，或含氮杂环如哌嗪和哌 啶的衍生物 v 典型药物：盐酸氯丙嗪、盐酸异 丙嗪、奋乃静、盐酸氟奋乃静、癸氟 奋乃静、盐酸三氟拉嗪和盐酸硫利达 嗪等 吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍 生物，分子结构中均含有硫氮 杂蒽母核，基本结构如下： LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 主要的化学学性质质 v 紫外吸收光谱特性 硫氮杂蒽母核为共轭三环的系统，紫外区三个吸收峰值，约 205nm、254nm、300nm，最强多在254nm附近，根据2位、10位取 代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 当母核的二价硫被氧化为砜或亚砜，则呈现四个峰值。 v 红外吸收光谱特性 由于取代基R和R的不同，具有不同的红外光谱，已被药典用于不同 品种的鉴别。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 主要的化学学性质质 v 易氧化呈色 硫氮杂蒽母核中的二价硫易氧化，不同的氧化剂如硫酸、硝酸、 三氯化铁试液及过氧化氢等，母核易被氧化成亚砜、砜等不同的产物，随 取代基的不同，呈现不同的颜色，可用于鉴别。 v 金属离子络合呈色 未氧化的硫可与金属钯离子形成配位化合物，而氧化产物亚砜、 砜则不能，可用于鉴别和含有测定，具有专属性。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v紫外吸收光谱鉴别 药物溶剂 浓度 (g/ml) max (nm) A 盐酸氯丙嗪盐酸 (91000)52540.46915 306 盐酸异丙嗪盐酸 (0.1mol/L)6249883937 奋乃静无水乙醇72580.65 癸氟奋乃静乙醇10260 盐酸氟奋乃静盐酸 (91000)10255553593 盐酸三氟拉嗪盐酸 (120)10256630 盐酸硫利达嗪乙醇8264与315 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v氧化显色反应 药物硫酸硝酸过氧化氢 盐酸氯丙嗪显红色，渐变为淡黄色 盐酸异丙嗪 显樱桃红色，放置 后颜色渐变深 生成红色沉淀，加热即溶解，溶 液由红色转变为橙黄色 奋乃静 显深红色，放置后 红色渐褪去 盐酸氟奋乃静 显淡红色，温热后 变成红褐色 盐酸三氟拉嗪 生成微带红色的白色沉淀；放置 后，红色变深，加热后变黄色 盐酸硫利达嗪显蓝色 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v 与钯离子络合显色 鉴别方法：取本品约50mg，加甲醇2ml溶解后 ，加0.1%氯化钯溶液3ml，既有沉淀生成，并显红色 ，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v分解产物反应（如癸氟奋乃静等含氟有机药物） 鉴别方法：取本品1520mg，加碳酸钠与碳酸钾 各约0.1g，混匀，在600 炽 灼1520分钟，放冷， 加水2ml使溶解，加盐酸溶液(12)酸化，滤过，滤液加 茜素锆试液0.5ml，应显黄色。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查盐盐酸异异丙嗪嗪 v 合成工艺 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 v 盐酸异丙嗪杂质来源 使得最终合成产物变为： 此异构体在丙酮中溶解度大，精 制也不易除去。 另外，异丙嗪不太稳定，易氧化 ，贮藏过程可能分解， LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 v 检查方法: (TLC) 取本品，加二氯甲烷制成每1ml中含10mg的溶液，作为供 试 品溶液；精密量取适量，加二氯甲烷稀释成每1ml 中含 0.15mg和0.05mg的溶液，作为对照溶液(1)和(2) 。照薄层色 谱法（附录 B）试验，吸取上述三种溶液各10l，分别点于同一 硅胶GF254 薄层板上，以己烷丙酮二乙胺(8.5:1:0.5) 为展开 剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品溶液如 显杂质斑点，不得多于3 个 ；其杂质斑点与对照溶液(2)的主斑点 比较，不得更深；如有一点超过，应不深于对照 溶液(1)的主斑点 。 注：避光操作；溶液临用新配。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 v 盐酸硫利达嗪中的有关物质检查 对光不稳定，无杂质对照品，TLC高低浓度对比法 检查方法：取本品，加氯仿制成每1ml中约含10mg的溶 液，作为供试品溶液; 精密量取适量，加氯仿稀释成每1ml中约含 50g的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法( 附录 )试验，吸 取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿异 丙醇浓氨溶液(74:25:1)为展开剂，展开后，晾干，先用碘化铋 钾试液冰醋酸水(10:20 :70)的混合液喷雾，然后喷以过氧化 氢试液，立即覆盖同样大小的洁净玻璃板，检视，供试 品溶液如显 杂质斑点，其颜色与对照溶液所显的主斑点比较，不得更深。 （避 光操作） LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 第五节 苯并二氮杂卓类药物 地西泮 阿普唑仑 奥沙西泮 氯氮卓 (diazepam) (alprozolam) (oxazepam) (chlordiazepoxide) 结构特点：含氮杂原子、六元和七元环双环并合而成，其中1,4-苯并 二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的抗焦虑、抗惊厥药。如：地 西泮、硝基地西泮、艾司唑仑、氯氮卓、阿普唑仑、三唑仑、盐酸氟 西泮、氯硝西泮和奥沙西泮等，其中，除了氯氮卓外，均为地西泮的 衍生物。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 化学学性质质 v碱 性： 非水溶液滴定法测定含量 v水 解： 在强酸性溶液中，形成二苯甲酮衍生物 ，具有的特性可用于鉴别和含有测定 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 1、沉淀反应 氯氮卓稀盐酸溶液 阿普唑仑稀盐酸溶液 盐酸氟西泮水溶液 氯硝西泮稀盐酸溶液 碘化铋钾试液 橙红色沉淀 放置后 颜色变深 2、水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液(12)，缓缓加热煮沸，放冷，加亚硝 酸钠和碱性-萘酚试液，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗。 一、化学鉴别一、化学鉴别 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 3、硫酸荧光反应： 苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下显 不同的颜色。 药物硫酸稀硫酸 地西泮黄绿色黄色 氯氮卓黄色紫色 艾司唑仑亮绿色天蓝色 硝西泮淡蓝色蓝绿色 4、分解产物的反应 有机氯化合物，氧瓶燃烧法破坏，生成HCl，以5%氢氧化钠溶液吸收， 硝酸酸化，显氯化物反应。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 5、氯化铜焰色反应 分子结构含有氯元素，在铜网上燃烧发出氯化 铜的绿色火焰。 一、化学鉴别一、化学鉴别 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 二、紫外特征吸收 药物溶剂 浓度 (g/ml) max (nm) A 地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242约0.51 282约0.23 366 氯氮卓盐酸 (91000)7245、3080.65 阿普唑仑盐酸 (91000)12264 盐酸氟西泮硫酸甲醇(136)102392、2842比值1.952.50 3622 氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液102392，3072 奥沙西泮乙醇10229，3152 (较弱) IR：地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 硅胶G薄层板，苯丙酮(3:2)为展开剂，稀硫酸喷雾 ，105干燥30min，紫外灯下检视荧光斑点： 药物 Rf值斑点颜色* 单一点样混合点样自然光254nm365nm 地西泮0.800.78无色黄色 (m)黄色 (m) 氯氮卓0.340.34无色蓝紫色 (s)蓝紫色 (w) 艾司唑仑0.220.20无色灰紫色 (m)蓝紫色 (m) 硝西泮0.720.72黄色紫色 (w)紫色 (w) 奥沙西泮0.490.52黄色亮灰蓝色 (s)亮灰蓝色 (s) *s, m, w分别表示荧光的强、中、弱 三、薄层色谱法三、薄层色谱法 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 鉴别试验鉴别试验 v 酸水解产物的薄层色谱法 苯并二氮杂卓类经酸水解后生成二苯甲酮衍生物，但 专属性差，不同的药物可能水解产生相同的二苯甲酮衍生物（ 三唑仑、阿普唑仑等经水解后不产生二苯甲酮衍生物，可以区 别）。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 v TLC是本类药物较为常用的检查方法 例：地西泮 检查方法：取本品，加丙酮制成每1ml 中含100mg 的溶液，作为 供试品溶液；精密 量取适量，加丙酮稀释成每1ml 中含0.3mg 的溶液，作 为对照溶液。照薄层色谱法（附 录 B）试验，吸取上述两种溶液各5l， 分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以醋酸乙酯己烷(1:1)为展开剂，展开 后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照 溶液的主斑点比较，不得更深。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 v HPLC法在杂质检查中的应用也逐渐增加 例：氯氮卓（USP24、BP2000采用薄层色谱法） HPLC检查法： 色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇磷酸液 (0.05mol/L)(60:40), 40%氢氧化钠调pH6.0；流速1ml/min，检测 波长254nm。 结果：灵敏度高，可检测未知结构的痕量杂质。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 特殊杂质检查杂质检查 v HPLC法用于地西泮降解产物的检查 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 甲醇水(70:30) 为流动相；检测波长为254nm 。理论板数按地西泮峰计 算应不低于1500，地西泮峰和内标物质峰的分离度应符合要求。 检查方法： 取本品，加甲醇分别制成每1ml中含1mg的供试品溶液 和每1ml中含5g的对照溶液。照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对 照溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为 记录仪满量程的10；再准确量取上述两种溶液各10l分别进样，记录色谱 图至主成分峰保留时间的4倍，供试品溶液的色谱图中主成分峰之后如显示杂 质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主成分峰的峰面积。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 第六节 含量测定 高效液相色谱法高效液相色谱法 非水溶液滴定法非水溶液滴定法 铈量法铈量法 比色法比色法 紫外分光光度法紫外分光光度法 气相色谱法气相色谱法 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 非水溶液滴定法 v 原理 一般方法 冰醋酸作为溶剂，若滴定氢卤酸盐，则加5%醋酸汞的冰醋酸溶 液，用高氯酸(0.1mol/L)滴定，并用空白试验校正。 问题讨论 适用范围：Kb10-8的有机碱盐 酸根影响：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸 滴定剂稳定性：温度、贮藏条件都有影响 终点指示方法：结晶紫指示剂，电位法 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 非水溶液滴定法 应用实例 游离弱碱性药物：地西泮、尼克刹米或氯氮卓 ，基于氮原子的弱碱性可以结晶紫为指示剂， 非水溶液直接滴定，终点颜色绿色蓝绿色 蓝色不等。 氢卤酸盐类药物：加入过量的醋酸汞冰醋酸溶 液，使其形成难电离的卤化汞，再用高氯酸滴 定，可用结晶紫、橙黄作为指示剂，或用电 位法指示终点。 硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质 中只显示一元酸解离为HSO4- LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 硫酸奎宁的非水滴定 3 H+ H+ LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 硫酸奎宁的非水滴定 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 非水溶液滴定法 应用实例 硝酸盐的滴定：由于硝酸的氧化性破坏指示剂变 色，用电位法指示终点 磷酸盐与有机酸盐：直接滴定 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 铈铈量法 v 原理：氧化还原 v 适用范围：硝苯地平邻二氮菲指示剂 (还原型) 红色 (氧化型) 浅蓝色 C12H8N2溶于亚 铁盐溶液 吩噻嗪类药物自身颜色的变化 + + Free radical 红色自由基 Bivalent cation 二价阳离子，无色 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 比色法 一、酸性染料比色法 v 原理：在适当的介质中，碱性药物(B) 可与氢离子结合成(BH+) ，而一些酸性染料可解离为(In-)，两者定量结合成有色络合物 (BH+ In-)离子对，可被有机溶剂定量提取，在一定波长处测定其 吸收，即可算出碱性药物的含量。 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 对照品溶液的制备 精密称取在120干燥至恒重的硫酸阿托品对照品 25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置 100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约 相当于硫酸阿托品2.5mg ），置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并 稀释至刻度，用干燥滤纸滤过，收集续滤液，即得。 测定方法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置预先精密 加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液取溴甲酚绿50mg与邻苯二 甲酸氢钾1.021g，加0.2mol/L氢氧化钠溶液6.0ml使溶解，再加水稀释至 100ml，摇匀，必要时滤过2.0ml，振摇提取2min后，静置使分层，分取 澄清的氯仿液，照分光光度法（附录 B），在420nm的波长处分别测定吸收 度，计算，并将结果与1.027 相乘，即得供试量中含有(C17H23N O3)2H2SO4H2O的重量。 例：硫酸阿托品片的含量测定例：硫酸阿托品片的含量测定 LOGOLOGO中国药科大学 药物分析教研室 比色法 一、酸性染料比色法 v 影响因素 水性最佳pH值：使得BH+和In-最多 酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶