生物化学检验标本

2.生物化学检验标本 临床检验的目的是为临床提供准确可靠的实验诊断依据。为了保证实验数据的可靠性， 在检验医学中必须坚持全面质量控制（total quality control，TQC.即指对影响临床检验结果 可靠性的各方面因素及各个环节进行质量控制）和全过程质量控制（即指对实验工作的全 过程进行质量控制和质量管理）。全过程质量控制包括实验前（分析前）、实验中（分析 中）和实验后（分析后）三个阶段的质量控制。在实验误差中实验前误差占 70%，因而实 验前质量保证对减少实验误差显得尤其重要。 实验前质量保证包括病人准备、 标本收集、处理、贮存和运输等， 因而能否正确地、 规范化地采集和处理标本，是能否做到实验前质量保证的重要内容。在临床化学检验中， 血液标本是最多应用的生物体液，血液标本因素是影响临床化学分析准确性和可靠性的最 重要、最直接的因素。我国从我们的国情出发，参考了美国临床实验室标准化委员会 （NCCLS）的有关规定，对临床化学检验血液标本的有关问题也提出了相应的要求。 我 国卫生标准技术委员会临床检验标准专业委员会（CCCLS）已对“临床化学检验血液标本 的收集与处理”提出了“中华人民共和国卫生行业标准”，旨在通过标本方面的质量控制 达到临床化学分析的质量保证。目前该“标准”文件正在待批中。 一、临床化学检验血液标本的定义 临床化学检验血液标本是指为完成某项或多项临床化学检验项目而采集的一定量的血 液，包括抗凝及非抗凝血。 1、血糖、血脂应空腹抽血，因为进食后可增加而影响测定结果； 喝酒会引起 r-GT 升 高。 2、葡萄糖耐量试验： (1).试验前三天每日碳水化合物进量不得少于 300g， (2).试验前一天晚餐后禁食至试验完毕 (3)试验日抽空腹血 2ml，将 100g 葡萄糖溶于 300ml 水中，让病人服下，服后 0.5h,1h,2h.3h 各抽血 2ml 测血糖即可。及时送检。 3、高蛋白、高脂及可引起血中蛋白、血脂、尿酸增高、香蕉、咖啡等可引起尿中儿茶 酚胺代谢产物的测定等. 4、异菸肼、庆大毒素、氨芐青毒素等药物可使谷丙转氨酶活性增高、咖啡因可使胆红 素增加。因此，建议检查前几天就停止使用有干扰的药物，且申请单最好能注明近期用药 情况。 5、进食、运动、妊娠、情绪波动、体位、吸烟、昼夜变化等对检测结果的影响。如进 食可显著影响血 GLU、TG 的结果；运动可增加血中肌酸激酶的含量；醛固酮的立卧位结 果完全不同；妊娠可影响血常规等多个项目；皮质醇的昼夜结果差异也很大。因此采集标 本时尽可能避免这些干扰， 尽可能在清晨病人空腹的条件下采集，保持条件一致。 临床生物化学是化学、生物化学与临床医学的结合，已经发展成为一门成熟的独立学 科。临床生物化学有其独特的研究领域、性质和作用，是一门理论和实践性较强的、边缘 性的应用学科，以化学和医学知识为主要基础。广义上临床生物化学是化学、生物化学与 临床医学的结合，已经发展成为一门成熟的独立学科。临床生物化学有其独特的研究领域、 性质和作用，是一门理论和实践性较强的、边缘性的应用学科，以化学和医学知识为主要 基础。广义上讲，临床生物化学是研究器官、组织人体体液的化学组成和进行着的生物化 学过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判 断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。 生化检验常用的标本（specimen） 有血液、尿液、脑脊液和腹水等，其中以血液标本 最为常用。 二、检验申请单 申请单是实验检查的第一步。一份完整的申请单应包含以下内容： 条码号， 门诊号， 住院号；病人的姓名，性别，出生日期；病房，床位号；临床诊断，问题或特殊检验注意 事项；申请检查项目；标本类型；采样时间， 标本接收时间（年、月、日、时、分）；有 关治疗情况（如用药情况）；医生姓名等。其中有关的临床和治疗信息，特别是用药信息 是检验师评价结果的必要条件。药物可能在体外影响分析方法或在体内引起病理变化，因 而，要特别注意在申请单上提供此类信息。 三、血液标本的采集 生化检验用的血液标本可来自于静脉、动脉或毛细血管。静脉血是最常用的标本，静 脉穿刺是最常用的采血方法。毛细血管采血主要用于儿童，血气分析多使用动脉血。 （一） 静脉采血法 1采血步骤 采血前核对病人姓名、性别、年龄、编号及检验项目等，按试验项目要求，准备好相 应的容器，如空白试管、抗凝管或促凝管等。病人应取坐位或卧位，采血部位通常是前臂 肘窝的正中静脉。若用普通采血法，采血后应取下针头，将血液沿管壁缓慢注入试管内。 2注意事项 （1） 防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清洁；淤血时间过长； 穿刺不顺利，组织损伤过多；抽血速度太快；血液注入容器时未取下针头或注入速度过快 产生大量泡沫；震荡过于剧烈等。若用普通注射器采血后，未取针头直接将血注入真空管 内，也易造成溶血。体内溶血属合格标本，但应在报告单上注明。 （2） 避免充血和血液浓缩：采血时应动作迅速，尽可能缩短止血带使用时间。用止 血带压迫时间最好不超过半分钟，否则将使生化结果升高或下降。 （3） 若病人正在进行静脉输液，不宜在输液同侧手臂采血；若女性病人做了乳腺切 除术，应在手术对侧手臂采血。 （4） 采血的体位：体位改变可引起一系列的生理变化，使血液中的许多指标发生改 变。一般采取直立位采血，其二标本的测定值比卧位高 5 15 。因此，采血时要注 意保持正确的体位（坐位或卧位），以及体位的一致性。 （5） 采血时只能向外抽，决不能向静脉内推，以免注入空气，形成气栓而造成严重 后果。 （6） 很多生化成分受膳食影响，因此，采血前要确认病人是否空腹。 （二） 动脉采血法 肱动脉、股动脉、桡动脉以及其它任何部位的动脉都可以作为采血点，但多选择肱动 脉和桡动脉。在摸到明显搏动处，按常规消毒，左手固定搏动处，右手持注射器，针头成 60角刺入，血液将自动进入注射器内。采血注意事项见血气分析部分。 第二章 生物化学检验的基本知识 3 （三） 真空采血法 双向针的一端插入真空试管内，另一端在持针器的帮助下刺入静脉，血液在负压作用 下自动流入试管内。由于在完全封闭状态下采血，避免了血液外溢引起的污染，并有利于 标本的转运和保存。标准真空采血管采用国际通用的头盖和标签颜色显示采血管内添加剂 种类和试验用途。可根据需要选择相应的盛血试管。 1普通血清管 红色头盖，采血管内不含添加剂，用于常规血清生化、血库和血清学相关检验。 2快速血清管 橘红色头盖，采血管内有促凝剂，可激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白变为不可溶 的纤维蛋白多聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块。快速血清管可在 5 分钟内使采集的血 液凝固，适用于急诊血清生化试验。 3惰性分离胶促凝管 金黄头盖，采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后，惰性分离胶能够将血 液中的液体成分（血清或血浆） 和固体成分（红细胞、白细胞、血小板、纤维蛋白等）彻 底分开并完全积聚在试管中央而形成屏障，标本在 48 小时内保持稳定。促凝剂可快速激 活凝血机制，加速凝血过程，适用于急诊血清生化试验。 4肝素抗凝管 绿色头盖，采血管内添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延长标本凝血时 间。适用于红细胞脆性试验、血气分析、红细胞压积试验、血沉及普通生化测定，不适于 做血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集，不能用于白细胞计数。因其可使血片染色 后背景呈淡蓝色，故也不适于白细胞分类。 5血浆分离管 浅绿色头盖，在惰性分离胶管内加入肝素锂抗凝剂，可达到快速分离血浆的目的，是 电解质检测的最佳选择，也可用于常规血浆生化测定和 IC U 等急诊血浆生化检测。血浆 标本可直接上机并在冷藏状态下保持 48 小时稳定。 6E DT A 抗凝管 紫色头盖，乙二胺四乙酸（E DT A ，分子量 292） 及其盐是一种氨基多羧基酸，可 以有效地螯合血液标本中的钙离子。螯合钙或将钙从反应位点移去将阻滞和终止内源性或 外源性凝血过程，从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验，不适用于凝血试验及 血小板功能检查，亦不适用于钙离子、钾离子、钠离子、铁离子、碱性磷酸酶、肌酸激酶 和亮氨酸氨基肽酶的测定及 PCR 试验。 7枸橼酸钠凝血试验管 浅蓝头盖，枸橼酸钠主要通过与血样中钙离子螯合而起抗凝作用。适用于凝血实验， 国家临床实验室标准化委员会（national com mittee forclinical laboratory standards ，NCCLS）推荐的抗凝剂浓度是 3.2 或 3.8 （相当于 0109 或 0129 molL）， 抗凝剂与血液的比例是 19。 8枸橼酸钠血沉试验管 黑色头盖，血沉试验要求的构橼酸钠浓度是 3.2 （相当于 0109 molL），抗凝 剂与血液的比例为 14 。 9草酸钾氟化钠 灰色头盖。氟化钠是一种弱效抗凝剂，一般常同草酸钾或乙碘酸钠合并使用，其比例 为氟化钠 1 份，草酸钾 3 份。此混合物 4 mg 可使 1 ml 血液在 23 天内不凝固和抑制糖 分解，它是血糖测定的优良保存剂，不能用于尿素酶法测定尿素，也不能用于碱性磷酸酶 和淀粉酶的测定，推荐用于血糖检测。 表 2-1 标准真空采血管种类及用途 种类头盖颜色添加剂种类检测项目备注 草酸钾/氟化钠 抗凝管 灰色草酸钾/氟化钠，氟化钠 是一种弱效抗凝剂，一 般常同草酸钠或乙碘酸 钠合并使用，其比例为 氟化钠 1 份，草酸钠 3 份。此混合物 4mg 可使 1ml 血液在 23 天内不凝 固和抑制糖分解 血糖、葡萄糖耐 量试验 在 4葡萄糖分子 可保存 48 小时。 不能用于尿素酶 法测定尿素、碱 性磷酸酶和淀粉 酶的测定 普通血清管红色不含添加剂，用于常规 血清生化，血库和血清 学相关检验 肝功能、血糖、 血脂、无机离子、 血清蛋白，各种 酶类测定。血清 学试验：免疫球 蛋白、不提、免 疫复合物、C 反 应蛋白、自身抗 体、肿瘤免疫、 各种病毒检测 血糖试验应立即 送检，不可在室 温放置时间过长 快速促凝血清 管 橘红色有促凝剂，可激活纤维 蛋白酶原，使可溶性纤 维蛋白变为不可溶的纤 维蛋白聚体，进而形成 稳定的纤维蛋白凝块，5 分钟内使采集的血液凝 固，适用于急诊血清生 化试验 快速的临床生化、 免疫学、血清学 和急诊的血样检 测项目 惰性分离胶促 凝管 金黄色添加有惰性分离胶和促 凝剂。标本离心后，惰 性分离胶能够将血液中 的液体成分（血浆）和 固体成分（红细胞、白 细胞、血小板、纤维蛋 白等）彻底分开并完全 积累在试管中央而形成 屏障，标本在 48 小时内 保持稳定。促凝剂可快 速激活凝血机制。加速 凝血过程，适用于急诊 血清生化试验 肝功能、血糖、 血脂、无机离子、 血清蛋白，各种 酶类测定；血清 学试验：免疫球 蛋白、补体、免 疫复合物、C 反 应蛋白、自身抗 体、肿瘤免疫、 各种病毒检测 血糖试验应立即 送检，不可在室 温放置过长。凝 固时间 1030 分 钟。 相对离心力 11001500g EDTA 抗凝管紫色乙二胺四乙酸（EDTA) 及其盐是一种氨基多羧 红/白细胞、血小 板、嗜酸性粒细 抗凝剂与采血管 要准确。不适用 第二章 生物化学检验的基本知识 5 基酸，可有效地螯合血 液标本中的钙离子，螯 合钙或将钙反应位点一 区将滞留后终止内源性 或外源性凝血过程，从 而防止血液标本凝固 胞、网织红细胞 计数、白细胞分 类计数、血红蛋 白、血红比容、 出血时间、凝血 时间测定 于凝血试验，血 小板功能检查， 钙、钾、钠、铁 离子、碱性磷酸 酶、肌酸激酶 、亮氨酸氨基肽 酶的测定及 PCR 试验 枸橼酸钠凝血 试验管 浅蓝色添加枸橼酸钠，其主要 通过与血样中的钙离子 螯合而起抗凝作用。适 用于凝血试验，国家临 床实验室标准化委员会 （NCCLS)推荐的抗凝剂 浓度为 3.2%或 3.8% 高铁血红蛋白还 原试验、凝血因 子纠正试验、凝 血四项、D-二聚 体测定等血液凝 固试验 抗凝剂与采血量 要准确。比例是 1:9 肝素抗凝管绿色添加肝素，肝素具有抗 凝血酶的作用，可延长 标本凝血时间 适用于红细胞脆 性试验、血气分 析、血细胞比容 试验、血沉及普 通生化测定及血 液流变学试验 血氨抽血后封闭 立即送检。不适 于做血凝试验。 过量的肝素会引 起白细胞聚集， 不能用于白细胞 计数。其可能使 血染色后背景呈 淡蓝色，不适用 于白细胞分类 血浆分离管浅绿色在惰性分离胶管内加入 肝素锂抗凝剂，可达到 快速分离血浆的目的， 是电解质检测的最佳选 择，也可用于常规血浆 生化测定和 ICU 等急诊 血浆生化检测 电解质检测、常 规血浆生化、 ICU 等急诊生化 检测 血浆标本可直接 上机并在冷藏状 态下保持 48 小时 稳定 枸橼酸钠血沉 试验管 黑色枸橼酸钠，血沉试验要 求的枸橼酸钠浓度是 3.2%（相当于 109mmol/L） 血沉试验抗凝剂与采血量 比例是 1:4 四、全血处理为血清或血浆 血液标本采取后应尽可能早地自然地使血清（浆）从与血细胞接触的全血中分离出来。 一般应于采血后 2h 内分离出血清或血浆。全血处理为血清或血浆分为离心前、离心中和离 心后三个阶段，对各不同阶段均有具体要求。 （一）离心前阶段（一）离心前阶段 即指标本采集到离心处理前的一段时间。 1.血清：标本离心前一般应令其自行凝集，不可用木棍等剥离凝血块。通常于室温 （2225）放置 3060 min 血标本可自发完全凝集；冷藏标本凝集缓慢；加促凝剂时 凝集加快（标本采集后应轻轻颠倒混合 510 次，以确保促凝剂作用）。 2.血浆：需用血浆标本时，必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，而且采血后必须立 即轻轻颠倒采血管混合 510 次（以确保抗凝剂发挥作用）医.学教.育网搜.集整理，510 min 后即可分离出血浆。 3.冷藏标本：标本冷藏可抑制细胞代谢，稳定某些温度依赖性成分但全血标本一般不 能冷藏；血钾测定标本冷藏不得超过 2h. 血液中儿茶酚胺、pH 血气、氨、乳酸、丙酮 酸、胃泌素、甲状腺激素等检测时需用制冷的标本。 标本需要冷藏（28）时，标本采取后应立即将标本置于冰屑或冰水混合物（不可 用大冰块），并且必须保证标本与制冷物充分接触，保证制冷物达到标本的高度。 4.代谢抑制剂和防腐剂：某些添加剂加入血液标本中能抑制细胞代谢，可以防止血液 标本贮存时分析物浓度的变化。血液葡萄糖测定时，如在血液中加入氟化钠，在血细胞未 分离的情况下，葡萄糖在 2225时可稳定 24h，28 时可以稳定 48h；但在新生儿和 儿童标本，由于红细胞压积高，用氟化钠难以控制细胞的糖酵解作用；甲醛草酸钾抗凝 保存剂不适合血糖测定；氟化钠麝香草酚混合剂因能抑制酶活性，不适用于酶学测定。 5.标本采集现场：（1）标本采集后应尽快送往实验室，尤其当收集区温度超过 22时 此点更为重要；（2）血液标本采集后血管必须加塞、管口向上、垂直放置，以减少管中内 容物振动，促进凝血完全，防止标本蒸发、污染和外溅等；（3）已收集的血液标本应温和 地处理，要防止标本管振荡所造成的溶血；溶血可影响测定结果。有严重影响（使结果升 高）的项目有：乳酸脱氢酶、血清门冬氨酸氨基转移酶、血清钾和血红蛋白；引起值得注 意的影响的项目有：血清铁（）、血清丙氨酸氨基转移酶（）和血清甲状腺素（）； 轻度受影响（增加）的有： 总蛋白、白蛋白、血清磷、血清镁、血清钙和酸性磷酸酶； （4）应避免对光线敏感的分析物暴露在人造光或太阳光（紫外线）照射下。如 VA 、VB6 、 胡萝卜素、卟啉、胆红素等测定时，标本管应该用铝箔或类似物质包裹保 护起来。 6.标本运送：全血标本应尽快从采血现场运送至实验室，如果运送距离较远，特别是 因分析物稳定性有影响，必要时可于采血现场分离出血清或血浆后，再送往实验室；标本 运送过程中要注意标本的包装、温度要求、处理方法等，要确保分析成分的稳定性；标本 管在运送过程中要保持管口封闭、向上垂直放置。 7. 实验室接受标本及离心标本准备：（1）要有标本收取记录（应认真核对检验中清 单，对有关情况要认真记录，标本接收及处理应签字登记）； （2）对接受的标本要予以 分类准备离心；（3）实验室接受标本后应仍保持标本管于密闭封口、 管口向上，垂直位 放置。管塞移去后血中 CO2丢失，会造成 pH 增加，离子钙和酸性磷酸酶减少， 尤其 pH 变化会影响某些检测结果的准确性；（4）标本凝集时间要充分 ；加抗凝剂的血液标本可 以立即离心；加促凝剂的标本可于采血后 515 min 尽早离心；抗凝的全血标本（锌、锂、 原卟啉等测定时）可以不离心；（5）冷藏（28）标本应保持这个温度直到准备离心。 推荐用温度控制离心机； （6）离心标本前不主张用小木棒或类似器材去剥离附着于试管 壁和管塞上的凝块，人为剥离会诱导溶血。如果必须露出试管壁或取下管塞时，一定要十 分注意，动作一定要轻柔。 （二）离心阶段（二）离心阶段 即指标本处于离心机里的一段时间。 1. 离心时间和相对离心力（RCF）：临床化学分析血液标本离心时， RCF（10001200） ，离心时间为 510 min. 2. 温度控制离心： 离心时产热不利于分析物稳定，临床化学分析血液标本离心时必 第二章 生物化学检验的基本知识 7 须采用温度控制离心机。 一些温度依赖性分析物 （如促肾上腺皮质激素、环腺苷酸、 儿 茶酚胺等）应在 4分离； 无特殊温度要求的分析物，离心温度应设定在 20 22； 温度低于 15可以人为地使血钾测定值增高；冷藏运送的标本必须在要求的温度下离心。 3.关于再离心：标本离心最好一次完成，若需再次离心，应距上次离心相隔时间很短； 对于含有分离物质的血标本绝不可以再离心。 （三）离心后阶段（三）离心后阶段 指标本离心后和用于