不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化 毕业论文实验步骤.doc

柳州职业技术学院毕业设计题目：不同温度和ph培养条件下对枯草杆菌的提纯优化姓名： 学号： 专业：食品检测及管理年级：2009级时间：2011年11月 指导老师： 实验合作者： 时间：2011年 11 月 柳州职业技术学院毕业设计（论文）任 务 书基础部 系（部） 食品检测及管理专业 2 班学生 学号 一、毕业设计（论文）题目：不同温度和ph培养条件下对枯草杆菌的提纯优化二、毕业设计（论文）工作规定进行的日期：200 年 月 日起至 200 年 月 日 三、毕业设计（论文）进行地点： 学校图书馆 上网查资料 四、任务书的内容：目的：通过此次实验对枯草杆菌有了一个深入的理解，懂得如何根据实际情况培养得出纯种枯草杆菌，会科学地挑选生长环境因素，并在此基础上进行实验，得出结论，找出最佳生长环境，写出对结果的分析。任务：（1）上图书馆查阅微生物方面的科学杂志30-40篇，记录各篇论文的作者、题目、杂志名称、出版地点、时间及页码（如有摘录千万不能弄错是从哪篇文章摘录的）（2）确定一篇论文作为自己的研究起点，查阅该篇论文的参考文献，理出该研究的前因后果（3）依据上述工作确定自己的课题，选择合适的实验设计方案（4）填入模拟数据，进行模拟分析不同温度和ph培养条件下对枯草杆菌的提纯优化 摘要】：本文根据实验操作 ,针对枯草杆菌生长环境的选着，通过对培养基的ph值、生长温度的选择进行实验研究 ,得出最佳的生长环境。绪论：枯草杆菌是非致病菌细菌，对人畜无害，不污染环境，是好氧的阳性菌，而且很多学者的研究证明动物饲喂芽孢杆菌后，能显著降低肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的数量，使机体内的有益菌增加而潜在的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的有益菌数量增多，致病性微生物减少，从而净化了体内外环境，减少疾病的发生。氨、胺、吲哚、硫化氢等物质在肠道粘膜对细胞有明显的毒害作用，芽孢杆菌抑制了有害微生物，进而减少有害物质产生，有利于动物健康和生长。根据（士论文-枯草芽孢杆菌xm16菌株抗真菌蛋白的分离纯化及性质结构研究）中所说经过 100热处理 30min，活性未丧失可知 枯草杆菌是十分耐高温的，以此对样品经行预处理。所以本实验以土壤中的枯草杆菌为对象,观察不同温度和ph值对枯草杆菌的生长的影响。从而得到适合枯草杆菌生长的最佳条件。实验阶段：一、准备实验：1、仪器：恒温培养箱2个、 培养皿27个、 20ml的吸量管1支、 2ml的吸量管4支、 干燥箱、 高压灭菌锅、 水浴锅、 250ml的烧杯3个、（制作培养基）250ml的锥形瓶3个、200ml的锥形瓶1个、（废液） 洗耳球1个、 试管架1个、 酒精灯1个、 打火机1个、75%的酒精、 200ml的试剂瓶 电炉1个、 3支1ml的吸量管药品：蛋白胨、 牛肉膏、 nacl、 琼脂、 硫酸、 氢氧化钠2、玻璃仪器的灭菌：将所需的玻璃仪器洗净，用报纸包好，放到干燥箱125灭菌4h。3、取样：取土壤表层5-10cm下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋带回实验室分离。4、样品处理：称取肥土5g放入含有45ml水的锥形瓶中，摇动片刻，然后将此瓶在无菌实验室中用小火加热至悬浊液沸腾，维持15min。而后静置5min。5、培养基的配制：取蛋白胨2g、 牛肉膏0.6g 、nacl 1g 、 琼脂34g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且ph4的蒸馏水，溶解，倒入锥形瓶中。取蛋白胨2g、 牛肉膏0.6g 、nacl 1g 、 琼脂34g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且ph6的蒸馏水。溶解，倒入锥形瓶中。取蛋白胨2g、 牛肉膏0.6g 、nacl 1g 、 琼脂34g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且ph8的蒸馏水。溶解，倒入锥形瓶中。6、生理盐水的配制：称取0.85g的食盐200ml的烧杯中溶解，移入100ml的试剂瓶中。7、湿热灭菌：用棉花塞好装有培养基的3个锥形瓶和装有生理盐水的试剂瓶的瓶口，用报纸包好瓶口。放入高温灭菌锅121灭菌20min。8、无菌室的灭菌：将实验服挂于无菌室，打开无菌操作台的紫外光灯，再打开无菌室的紫外光灯，灭菌1h，在做实验前半小时关闭。二、实验操作：1、进入无菌室，用75%的酒精擦拭双手，穿上灭过菌的实验服，将所需玻璃仪器和培养基放入无菌操作台，点上酒精灯。2、吸取2ml样液到1号试管中，再吸取20ml无菌生理盐水到该试管，摇匀，即为10-1 。吸取1号试管的样液2ml到2号试管中，再吸取20ml无菌生理盐水加到该试管，摇匀，即为10-2 。同方法制作10-3 于3号试管中。3 、取ph4的培养基分别倒20ml平铺于3个培养皿中。吸取1号试管中样液1ml，放入培养皿，使样液平铺于培养基上。吸取2号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。吸取3号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。取ph6的培养基分别倒20ml培养基于3个培养皿中。吸取1号试管中样液1ml，放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。吸取2号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。吸取3号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。取ph8的培养基分别倒20ml培养基于3个培养皿中。吸取1号试管中样液1ml，放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。吸取2号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。吸取3号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。将这9个培养皿倒置于20的恒温培养箱中培养24h、36h、48h。分别计数。以3的方法做两组实验，分别倒置于37、42的恒温培养箱中培养24h、36h、48h分别计数。三、数据记录 （注：每个梯度只根据ph值和温度比较。ph4的培养基不凝固）培养皿典型菌落数（杂菌菌落数）10-1记录表1 20374224h36h48h24h36h48h24h36h48hph6未生长未生长未生长未生长未成长未生长边缘少量生长少量生长少量生长ph8未生长未生长未生长片状略大片状大片状很大片状略大片状略大片状略大培养皿典型菌落数（杂菌菌落数）10-2记录表220374224h36h48h24h36h48h24h36h48hph6未生长未生长未生长小片状片状略大片状大小片状片状略大片状略大ph8未生长未生长未生长片状大片状略大片状很大小片状片状略大片状略大培养皿典型菌落数（杂菌菌落数）10-3记录表320374224h36h48h24h36h48h24h36h48hph6未生长未生长未生长小片状片状略大片状大小片状片状略大片状略大ph8未生长未生长未生长小片状片状大片状很大小片状片状略大片状略大四、结果讨论：1、从表1、2、3可以看出，在20的温度下，ph6和ph8的培养基中的枯草杆菌都是不生长的。所以在20的温度下，枯草杆菌难以生长。2、从表1、2、3可以看出，在37的温度下，ph6和ph8的培养基中的枯草杆菌都以上升的趋势生长。表明37对枯草杆菌的生长适合。3、从表1、2、3可以看出，在42的温度下，ph6和ph8的培养基中的枯草杆菌在36h之前都以上升的趋势生长，但在36h到48h这段时间却变化不大，停滞生长。表明短时间内，能缓慢生长，时间稍长就会出现停滞生长的现象。4、经过比较，在同一时间、同一温度下，ph8条件下的枯草杆菌都比ph6条件下的生长的好，即在同一时间里ph8条件下的枯草杆菌生长状态和速度都比ph6的好。表明在ph8比较适合枯草杆菌的生长。五、得