卡托普利及snp对vsmc中et-1释放的作用

卡托普利及 SNP 对 VSMC 中 ET-1 释放的作用 2010-01-14 丛洪良 黄体钢 周丽娟 宋昱 马向虹 王伟 刘洪梅 【摘要】 目的 探讨卡托普利及 SNP 对培养的大鼠 VSMC 释放 ET-1 的影响及相互关系。 方法 在大鼠 VSMC 培养液中置入不同浓度卡托普利及/或 SNP 后，用放免法测定 ET-1。结 果 卡托普利及 SNP 均可减低因 Ang引起 VSMC 分泌增加的内皮素量，Ang水平与 VSMC 分泌 ET-1 量呈正相关。结论 ET-1 通过抑制 VSMC 内源性 NO 的产生加速 AS 的发生及发展， ACEI 或 NO 抑制 ET-1 释放，可减缓 AS 形成。 【关键词】 卡托普利 硝普钠 内皮素 一氧化氮 血管平滑肌细胞 The releasing effected of captopril and sodium nitroprusside on endothelin-1 in vascular smooth muscle cell Cong Hongliang, Huang Tigang, Zhou Lijuan, et al. Tianjin Cardiovascular Institute, Tianjin 300211 【Abstract】 Objective Investigating the influence of captopril and SNP on releasing ET-1 in cultured VSMC of rat. Methods Measuring the endothelin-1 level through radioimmunology assay in various concentration of captopril and/or sodium nitroprusside in cultured vascular smooth muscle cell of rat. Results The results show that both captopril and SNP could reducing the high ET-1 level of VSMC which were caused by Ang. There were a linear relationship between Ang level and ET-1 production (r=0.760 1,P0.001).Conclusion Endothelin-1 maybe accelerating the atherosclerosis formation and developing through inhibiting endogenous NO produced by VSMC. ACEI or NO, inhibiting ET-1 release, may reduce atherosclerosis formation. 【Key words】 Captopril Sodium nitroprusside Endothelin-1 Nitric oxide Vascular smooth muscle cell 血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)已被公认为高血压、冠心病有效药物之一，并已广泛应 用。硝普钠(Sodium Nitroprusside, SNP)为血管扩张剂，由于在体内产生 NO，被认为是一 种 NO 供体。NO 抑制血小板聚集、血管平滑肌细胞(VSMC)增生及白细胞对内皮细胞(EC)粘附， 对限制动脉粥样硬化(AS)的局部血管损伤起重要作用1 。但 ACEI 及一氧化氮(NO)对局部 损伤所起的保护作用是否与 VSMC 释放的内皮素(ET-1)减少有关，尚少见报道。本研究的目 的是探讨卡托普利及 SNP 对培养大鼠 VSMC 释放 ET-1 的影响及相互关系。 材料与方法 1.大鼠 VSMC 培养、鉴定与分组 大鼠 VSMC 培养为组织贴块法2 。应用透射电镜鉴定 VSMC，待 VSMC 长满呈亚融合状， 消化成细胞悬液铺 24 孔板，每孔为 3.1104 细胞数，于 CO2 孵育箱静置 48 小时，弃上清 液，设定每六孔为一组。实验组分别予以含 Ang80 pg/mL、160 pg/mL、320 pg/mL、640 pg/mL,Ang640 pg/mL+卡托普利 100g/mL,Ang640 pg/mL+卡托普利 100 g/mL+SNP 10-5mol/mL 及加入含 SNP 10-5mol/mL 的 M199 培养液；对照组加入正常 M199 培养液。CO2 孵育箱孵育 36 小时后取细胞培养液进行鉴定。 2.主要试剂及测试盒 Ang粉剂(购自北京同正生物技术公司)，ET-1 放免分析药盒(购自北京东亚放免所)。 ET-1 测定，此方法是采用均相竞争法直接测定血浆或组织中的 ET 含量。取培养液 100L 与 125I-ET、PR-试剂混匀 37放置 15 分钟后，3 000 转/分,20 分钟离心，吸弃上清液，在 r 计数器上测定沉淀 cpm 数，以 Bi/Bo(%)为纵坐标，以 ET 标准浓度为横坐标，125I-ET 与 标准或样品竞争性地与 ET-抗体结合，根据样品管中放射性含量直接从标准曲线上查找出相 应的结果。SNP(北京生物化学厂)，卡托普利注射液(常州制药厂)。 3.统计学方法 所有计量资料均以（s）表示，应用 SPSS 统计软件进行多组间两两比较轶和检验， P0.05 有统计学意义。 结 果 随着 Ang水平升高 VSMC 释放 ET-1 量增加，SNP 和卡托普利降低 VSMC 的 ET-1 释放量 (见图 1)；VSMC 释放 ET-1 的量与 VSMC 培养液中 Ang的浓度关系(见图 2)。 图 1 卡托普利及 SNP 对 SMC 释放 ET 的影响 A:Ang0 pg/mL, B:Ang80 pg/mL, C:Ang160 pg/mL, D:Ang320 pg/mL, E:Ang640 pg/mL, F:Ang640 pg/mL+Captopril 100g/mL, G:Ang640 pg/mL+Captopril 100g/mL+SNP 10-5mmol/mL, H:SNP 10-5mmol/mL A 和 D、F 比 P0.05(q=3.426,3.337), A 和 E 比 P0.01(q=4.559), B 和 D、E、F 比 P0.05(q=2.775,3.132,2.722); C 和 D、E、F 比 P0.05(q=2.731,3.115,2.694), D 和 G、H 比 P0.05(q=2.663,2.869);E 和 G、H 比 P0.05(q=2.811,2.934), F 和 H 比 P0.05(q=2.691) 图 2 不同 Ang水平与 ET 水平的相关关系 讨 论 内皮素为一种 21 氨基多肽，包括 ET1、ET2 及 ET3。ET1 是目前所确定的最强的血管收 缩剂3 。近来研究表明 ET1 血浆水平在症状性 AS 及经皮冠状动脉内血管成形术(PTCA)后 升高，在人 AS 损害时，ET1 表达增高，ET1 功能与磷酯酶 C(PLC)调节的磷酸肌醇水解和蛋 白激酶(PKC)激活有关4 。ET1 调节血管收缩性及促使 VSMC 增生，在高血压及 AS 发病机 理中起重要作用。然而 ACEI 及 NO 对 VSMC 释放 ET1 的影响，尚少见报道。本研究结果显示， NO 供体 SNP 及 ACEI 卡托普利单独或联合使用均降低 VSMC 对 ET1 的释放，对抗 Ang诱发的 ET1 生成增多。SNP 与卡托普利联合应用时降低的 ET1 较单独应用卡托普利更明显，而单纯 SNP 不影响基础 ET1 含量。Ang浓度与 ET1 释放呈正相关(P0.01)。Ikeda 认为，ET1 可 降低细胞因子如白介素-1(IL-1)引起的 NO 生成增多，其降低的作用被 ET1 受体拮抗剂 BQ- 485 减弱，表明 ET 抑制 VSMC NO 生成增多作用在 ETA 受体，并部分通过 PKC 依赖途径5 。 本实验结果则反过来证明 NO 的增多也可以抑制 ET1 的生成，改善血管收缩或 VSMC 功能状态。 ET1 为 EC 分泌的强烈血管收缩剂，其与血管疾病有关。内皮素受体分两种，ETA 和 ETB。所 有 VSMC 对 ET1 的反应受 ETA 或 ETB 受体调节，VSMC 收缩和增殖依赖于 ET1；ETB 受体扩血 管作用可以通过 ET1 与 ETB 受体接合6 。Nakahashi 认为 ET1 既不影响基础也不影响 IL- 1 诱导的 NO 生成，因此推论 ET1 对 NO 合成抑制作用是通过 PKC 依赖途径，而其他 PKC 激 活剂，如 Ang、精氨酸血管加压素，已显示减低细胞因子诱导的亚硝酸盐堆积7 。 Groves 研究认为 NO 供体抑制 PTCA 后血小板聚集、VSMC 增殖及 E