肾衰Ⅱ号方对5-6肾切除大鼠肾组织形态及肿瘤坏死因子―α表达的影响

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 肾衰 号方对 5/6 肾切除大鼠肾组织 形态及肿瘤坏死因子 表达的影响 摘要：目的 观察肾衰号方对 5/6（A/I）肾切除慢性肾功能衰竭 （CRF）大鼠残肾组织病理形态及肿瘤 坏死因子-（ TNF-）表_的影响，探 讨其可能的作用机制。方法 制备 5/6（A/I）肾切除 CRF 大鼠模型，随机 分为假手术组、模型组、西药组和中药 组，各给药组给予相应药物。给药 60 d 后，测定大鼠血肌酐（SCr） 、尿素氮 （BUN） 、血红蛋白（Hb） 、内生肌酐 清除率（Ccr ） ，观察残肾组织病理形态， 免疫组化检测残肾组织 TNF- 的表达。 结果 与模型组比较，各给药组大鼠 SCr 和 BUN 水平显著降低、 Hb 和 Ccr -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 显著升高（P 中国论文网 /6/view- 12984024.htm 关键词：肾衰号方；慢性肾衰 竭；肿瘤坏死因子-；肾间质纤维化； 大鼠 DOI：10.3969/j.issn.1005- 5304.2017.07.013 中图分类号：R285.5 文献标识 码：A 文章编号：1005-5304（2017） 07-0054-04 Abstract： Objective To observe the effects of Shenshuai Prescription on expressions of pathologic morphology and TNF- in nephridial tissue of chronic renal failure （CRF ） rats induced by 5/6th kidney （ablation/infarction， A/I） ； To investigate its possible mechanism of action. Methods 5/6 （A/I） nephrectomized CRF rat models were prepared and randomly divided into sham- operation group， model group， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 Western medicine group and TCM group. Each medication group was given relevant medicine. The levels of serum creatinine （SCr） ， blood urea nitrogen （BUN） ， hemoglobin （Hb） and endogenous creatinine clearance （Ccr） were measured after 60 days of administration. The histopathology of residual kidney was observed， and the expression of TNF- in residual renal tissue was detected by immunohistochemistry. Results Compared with the model group， the levels of SCr and BUN significantly decreased， while Hb and Ccr significantly increased in each medication group （P24 h 后脱水，石蜡 包埋，制成 3 m 切片。常规 HE 染色， 观察肾脏组织病理形态。 1.6 检测指标 1.6.1 生化指标检测 全自动生化 分析仪检测 SCr、尿素氮（ BUN） 、血 红蛋白（Hb） 。用内生肌酐清除率 （Ccr）代替 GFR。Ccr（mL/min）=尿 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 肌酐24 h 尿量血清肌酐14406。 1.6.2 肾组织肿瘤坏死因子- 表 达检测 采用 SABC 免疫组化三步法。3 m 切片二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，3%过 氧化氢灭活内源性消化酶，0.01 mol/L 柠檬酸缓冲液（pH 6.0）抗原修复， 5%BSA 封闭液封闭；适当稀释一抗，4 过夜，生物素化二抗，37 、30 min；滴加 SABC 复合物，DAB 显色， 苏木素复染，中性树胶封片。每个样本 随机选取高倍镜下 5 个不同视野，分析 每个视野棕黄色染色区域反应面积作为 阳性面积占总视野面积的百分比，取其 平均值。 1.7 统计学方法 采用 SPSS18.0 统计软件进行分 析。计量资料以xs 表示，组间比较 采用方差分析，多重比较采用 LSD、S- N-K 法，组内治疗前后比较采用重复测 量设计的方差分析。P0.05 表示差异有 统计学意义。 2 结果 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 2.1 肾衰号方对模型大鼠给药 前后生化指标的影响 与假手术组比较，给药前后模型 组 SCr、BUN 水平明显升高（ P0.01） ， Ccr、Hb 水平明显降低（P0.01） ；给药 后与模型组比较，西药组、中药组 SCr 和 BUN 水平明显降低 （P0.05，P0.01） ，Ccr 和 Hb 水平明 显升高（P0.01） ；西药组、中药组给 药后较给药前 SCr 和 BUN 水平明显降 低（P0.05，P0.01 ） ，Ccr 和 Hb 水平 明显升高（P0.01） ，且中药组明显优 于西药组，差异有统计学意义 （P0.05） 。结果见表 1。 2.2 肾衰号方对模型大鼠残余 肾组织病理形态的影响 假手术组肾小球结构正常， Bowman 囊腔结构清晰，肾小球基底膜 较薄、无增厚；小管基底膜薄，管腔无 扩张、无囊肿，管周无纤维化。肾间质 无水肿、无炎症细胞浸润、无纤维化； 模型组肾小球结构破坏严重，近全球性 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 硬化，球周纤维化，毛细血管管腔闭塞、 球囊粘连，肾小球基底膜弥漫增厚；肾 小管扩展并充满蛋白管型；肾间质大量 炎症细胞浸润，可见纤维化。西药组肾 小球结构较模型组完整，Bowman 囊腔 结构较模型组清晰，无明显球囊粘连， 肾小球硬化程度明显减轻；肾小管管腔 无明显扩张，管腔内见少量蛋白管型； 间质炎性细胞浸润较模型组减少。中药 组肾小球结构较西药组完整，纤维化程 度减轻，Bowman 囊存在，无球囊粘 B，囊腔结构较西药组完整；管腔无明 显扩张，未见明显蛋白管型；间质炎性 细胞浸润程度较西药组减轻。结果见图 1。 2.3 肾衰号方对模型大鼠残余 肾组织肿瘤坏死因子- 水平的影响 与假手术组比较，模型组大鼠肾 组织 TNF- 水平明显升高（P0.01） ； 与模型组比较，各给药组大鼠肾组织 TNF- 水平明显降低（P0.01） ，且中 药组明显低于西药组（P0.01） 。结果 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 见表 2、图 2。 3 讨论 肾血流量占心输出量的 1/4，但 仅有 10%的氧被肾脏摄取，大多流向肾 皮质以保证肾小球滤过和溶质的再吸收， 肾髓质血流量较低5。肾皮质氧分压约 为 50 mm Hg，髓质氧分压只有 1020 mm Hg6。肾小管大量氧的需求和局部 较低的氧供，导致生理性皮质和髓质的 低氧压张力，肾组织内环境处于低氧状 态。毛细血管对氧的通透性、氧耗、最 初血流量等细小变化都能影响氧的供应 和需求的平衡，在疾病状态下，平衡一 旦被打破，即表现为肾小管间质缺血、 缺氧。 长期以来，慢性缺氧始 终被认为是导致各类原因引起 CKD 进 展的主要因素，缺氧影响细胞能量代谢 和细胞功能、红细胞和血管生成、炎症 细胞的信号传导3。TNF- 是一种强效 的促炎症细胞因子，是参与炎症性组织 损伤的重要介质。TNF- 在肾小管间质 中表达，主要存在于近端肾小管上皮细 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 胞，通过减少肾脏血流、肾小球滤过率， 改变毛细血管壁的屏障功能，形成毛细 血管血栓，影响血细胞结构等途径参与 肾脏损伤。在肾组织炎症反应中，TNF- 趋化单核胞、中性粒细胞向炎症部 位聚集，诱导内皮细胞表达黏附分子， 增强巨噬细胞的细胞毒性，调节其他炎 症细胞因子如白细胞介素（IL）-1、IL- 6 等释放7。 TNF- 诱导肾小管不同形 式的炎症基因的激活，促进肾小管间质 炎症反应，导致小管间质损害，最终引 起肾功能不可逆性损伤的 RIF8。研究 显示，TNF- 与肾功能之间存在显著负 相关9。抑制肾小管间质的炎症反应， 可以减少其结构和功能的破坏10，延 缓 RIF 进展11。 根据 CRF 临床表现，其属中医 学“水肿”“关格”“虚劳”“ 癃闭 ”等范畴。 其形成机制复杂，或因正虚，或因邪实， 或因失治误治，每呈虚实并见，辨证除 本虚外，还应注意邪实。总属本虚标实、 正虚邪实。本虚主要是脾、肾两虚，可 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 因病情进展影响到心、肺两脏，及气、 血、精、阴、阳的亏损。邪实主要为外 邪、痰湿、湿热、瘀血、热毒等。其中， 痰湿、浊毒、瘀血既是脏腑功能失调的 病理产物，又进一步加重脏腑虚损。肾 衰号方中党参健脾益气养血，淫羊藿 温肾壮阳，共为君药，培本固源，补肾 与健脾协同并进，起到补火生土，健脾 转相滋肾的作用。臣以四味活血药物： 丹参活血养血，当归补血活血，川芎行 气活血祛风，桃仁活血祛瘀，补泻兼施， 使补而不留邪，泻而不伤正，气行则血 行，气血同调。大黄泻下攻积、清热解