第十三章 生物制品分析概论1

第十三章 生物制品分析概论Analysis of biologicals 本章主要内容生物药物种类与 特点生物药物质量检验的 基本程序与方法生物药物理化测定法： HPLC法、酶法、电泳法生化药物生物制品（生物技术药物）生物药物 （biopharmaceuticals）： 利用生物体、生物组织和器官制得的天然活性物质及其类似物一、概述分类没有严格的界限 动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生命基本物质及其衍生物等生化药物 biochemical drugs 人纤维蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃酸氨基酸、 Pr类 酶、辅酶类 多糖类 脂类 核酸类 应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 自动免疫制品 生物制品 biological products 其他（血液制品、组织制品等） 免疫血清菌苗、疫苗、类毒素诊断制品利用重组 DNA等生物技术生产的药物基因工程药物 biotechnology drugs发现并确定有治疗作用的 Pr分离或合成控制该 Pr合成的基因将该基因导入受体细胞受体细胞表达该 Pr分离纯化胰脏(A)n 胰岛素原mRNAcDNA 重组质粒 转化细菌mRNA反转录酶胰岛素原基因与质粒连接感染E.coli胰岛素原重组胰岛素原的合成 基因工程药物主要类别蛋白质多肽类： 激素类及神经递质类 细胞因子类 酶及凝血因子类 核酸类： 反义寡核苷酸 等人生长激素释放抑制因子（Human Somatotin） 干扰素（ Human Interferons） 链激酶（ Streptokinase） 5. 生化药物和基因工程药物特点 1）共同特点： 活性强，毒副作用小 2）分子量大，结构确证难 3） 全过程 的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品 4）生物活性检查 5）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、外源性 DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等 6）效价（含量）测定收录于 中国药典中国药典 和 中国生物制品规程中国生物制品规程 二、检验的程序和方法鉴别 杂质检查 安全性 检查 含量（效价 ）测定1.鉴别1）理化鉴别法： UV、 肽图 等 反应序列信息RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽 1（ 7 36）肽图谱 药物分析杂志 2005， 25(1)24-26标准品样品胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36)由 30个氨基酸组成，结构中含 2Lys、 1Arg、 1Asp、 3Glu2）生化鉴别法： 免疫法 、酶法、电泳法等 3）生物鉴别法：动物试验等专属性强，应用广泛免疫双扩散法SDS-PAGEMarker Sample116.0k 66.2k 45.0k 35.0k 25.0k 18.4k 14.4k2. 杂质检查1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等 2）特殊杂质：有关物质等 高效凝胶过滤色谱法 (High Performance Gel Filter ， HPGFC）、RP-HPLC萄聚糖凝胶 立体网状结构图标准蛋白色谱图时间 (min)0 4 8 121654321.右旋糖酐蓝 2.醛缩酶 3.血清白蛋白 4.碳酸酐酶 5.抑蛋白酶肽 6.酪氨酸重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（rhTRAIL）质控方法和质量标准的研究 药物分析杂志 2005， 25（ 3） 253-257 Synmetry 300 C18柱（ 3.9150mm ）3. 安全性检查1）热原检查 家兔法、鲎试剂法 2）降压物质检查 3）过敏试验 4）异常毒性试验 豚鼠、大鼠存活试验 5）无菌试验 6）宿主细胞蛋白残留、 DNA残留 ELISA法1）理化分析法： 重量法、滴定法、 电化学法、光谱法 色谱法（ HPLC法）4. 含量（效价）测定例：蛋白质含量测定（ ChP2005三部） 凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法2）生化分析法 v酶法： v免疫分析法酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析 酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法 3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价 IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性， IU/mg）例：冻干基因工程 1b 干扰素制造及检定规程本品系用从健康人白细胞中获得的 1b 干扰素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人 1b 干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。 主要包括以下内容： 1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备 5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定 8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期 12 冻干基因工程 1b 干扰素使用说明书 检查： 纯度： 1电泳纯度 2高效液相色谱纯度 pH值 水分鉴别： 分子量测定 肽图测定 等电聚集 紫