提取和鉴定DNA

1、提取和鉴定DNA,温故知新: (1)细胞的遗传物质是什么？ (2)DNA的结构模型是什么? (3)真核细胞DNA的存在场所?,一、基础知识与原理,1、提取DNA的基本思路,利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分,细胞中有哪些生物大分子呢？,请回答： 观察左图，尝试描述DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线。,DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？,2、DNA的溶解性,2 molL,资料：DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质（如蛋白质）则可以溶于酒精。,3、DNA在酒精溶液中的溶解性,使

2、用酒精可以将DNA与蛋白质等物质进一步分离，得到杂质较少的DNA。,4、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,资料1：蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA 影响,资料2：大多数蛋白质不能忍受6080C的高温，而DNA在80C以上才会变性,资料3：洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去 除 ,但对DNA没有影响,没有,脂质和蛋白质,二、实验设计,（一）实验材料的选取,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,（三）去除滤液中的杂质,（四）DNA的析出与鉴定,二、实验设计,（一）实验材料的选取,1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、大肠杆菌。（从中选取23种实验材料）,2、

3、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。,思考：一定不能选用哪种材料？为什么？,思考：若取用的动物细胞为鸡血细胞，如何用简便的方法使其破裂呢？,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,1、动物细胞,需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解,2、植物细胞,问题：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？,答：洗涤剂能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解,在鸡血细胞溶液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液。,（三）去除滤液中的杂质,讨论：获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？,可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质

4、,讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？,答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；,方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离,（四） DNA的析出与鉴定,DNA的析出用的是冷却的酒精溶液（体积分数为95 ） 。静置23min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。,1、DNA的析出,2、 DNA的鉴定,方法：在试管中先加入2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，另一只不加，然后各加入二苯胺溶液4ml。,蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。,混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待

5、试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化。,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,你知道柠檬酸钠的作用是什么吗？,防止血液凝固。,思考：这一步骤后，DNA是存在于滤液还是滤物中呢？,思考：此时加入蒸馏水的目的是？为何DNA能析出？,过滤取纱布上的滤物,纱布过滤,再次溶解DNA,2mol/LNaCl溶液,取滤物,加冷酒精使DNA析出（进一步纯化）,DNA的鉴定,对照组溶液 色，实验组溶液变为 色。,无,蓝,本节小结：,1、在提取和鉴定DNA实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,课堂反馈,B,课堂反馈,2. 下列关于提取和鉴定DNA的说法正确的是 A人血不可代替鸡血进行实验 B随着氯化钠的浓度降低，DNA的溶解度增大 C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 DDNA易溶于酒精,A,课堂反馈,3.在利用鸡血进行“提取和鉴定DNA的实验中，相关叙述正确的是 ()A用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物