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文档简介

1、氨基酸的分离鉴定纸层析通过氨基酸的分离，学习纸层析的基本原理及操作方法。 目的，纸层析法是以滤纸为惰性支持物的分配层析法。 以水(结合在滤纸纤维上)为固定相，以有机溶剂为流动相，样品点在滤纸上展层，氨基酸不断分配到两相中，分配系数不同，所以样品根据流动相的不同，移动速度不同，分离，形成距原点的距离不同的断层点。 氨基酸分离后的纸色谱上的位置用Rf值(比位移)表示： Rf=原点到色谱中心的距离/原点到溶剂前端的距离，原理上作为一定条件的物质的Rf值是一定的。 Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂体系、色谱滤纸的质量和色谱温度等因素有关。 本实验采用纸层析法分离氨基酸。 器材、1、色谱柱2、毛细管

2、3、喷雾器4、培养皿5、色谱滤纸(新华1号) 6、烘箱7、铅笔(直尺) 8、切刀9、胶带10、分液漏斗11、吹风机、1 2 .扩张剂4份的将20 mL正丁醇和5 mL冰醋酸放入人分液漏斗，与15mL水混合，充分振荡，静置后将下层水层分层排出。 3 .显色剂0.1水合茚三酮正丁醇溶液。 将装有试剂、1平衡溶剂的烧杯放入密封的色谱柱中。 (不可单相)准备2枚滤纸，取1枚色谱滤纸(长22 cm，宽14 cm )。 纸的窄边朝下，从下端2 cm处用铅笔画出与底边平行的直线，在该直线上每隔2 cm做一个记号()。 3点样品将各氨基酸样品用毛细管分别标在中央的5个标记()上，干燥后再点。 各点在纸上扩展的直径最大为5 mm以下。 4扩张用线在滤纸上缝成筒状，使纸的两侧不接触。 用胶带把两边粘在一起。 将装有约20 mL扩张剂的培养皿迅速放入密闭的色谱柱中，使滤纸在培养皿上直立(点样的一端位于下方，扩张剂的液面必须比点样线低1 cm )。 溶剂前端上升1520 cm后取出滤纸，铅笔画出溶剂前端分界线，自然干燥或用吹风机热风吹。 用5显色用喷雾器均匀喷涂0.1茚三酮正丁醇溶液后，放入烘箱中烘烤5分钟(80分钟)或用热风喷涂后，出现各层斑点。 6修正各种氨基酸的Rf值。 操作，(一方面向上色谱)，1，纸色谱和扩张剂怎么制备？ 平衡溶剂在色谱柱中的作用是什么？ 2 .什么是射频值？

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