药品微生物实验室质量管理.ppt

1、药品微生物实验室的质量管理,甘肃省药品检验研究院 孙莺,药品微生物实验室规范,中国药典2010年版微生物实验室规范指导原则 ISO 17025 检测和校准实验室能力的通用要求 CNASCL09 实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 USP1117Microbiological Best Laboratory 药品生产质量管理规范（2010年版） WHO GPML No.961 Annex 2 CNASCL05 实验室生物安全认可准则 人间传染的病原微生物名录（卫生部2006年发布） 中国药典2015年版药品微生物实验室质量管理指导原则,增修订情况,1.名称： “药品微生物实验室规范指导

2、原则” 修订为 “药品微生物实验室质量管理指导原则”,增修订情况,2. 整体框架 修订前：人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、文件、实验记录、结果的判断 修订后：人员、培养基、试剂、菌种、环境、设备、样品、检验方法、污染废弃物处理、检测结果质量保证和检测过程质量控制、实验记录、结果的判断和检测报告、文件,药品微生物实验室规范指导原则,人员 培养基 菌 种 实验室的布局和运行 设 备 文件 实验记录 结果的判断,一、人员,从事药品微生物试验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背 景。 实验人员应依据所在岗位和职责接受相应的培训，在确认他们可以承担某一 试验前，他们不能独立从事该

3、项微生物试验。应保证所有人员在上岗前接受胜任 工作所必需的设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，经考 核合格后方可上岗，同时，实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划。 检验人员必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价。微生物实验 室的管理者其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相符。如：管理技能、实 验室安全、试验安排、预算、实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调查、技 术报告书写等。 实验室应通过参加内部质量控制、能力验证或使用标准菌株等方法客观评估 检验人员的能力，必要时对其进行再培训并重新评估。当使用一种非经常使用的 方法或技术时，有必要在检测前确认微生物检测人

4、员的操作技能。 所有人员的培训、考核内容和结果均应记录归档。,一、人员,2015版药典具体增修订情况： 人员方面进一步要求从事药品微生物检验工作的所有人员应保证在上岗前接受胜任工作所必需的设备操作、微生物检验技术等方面的培训，“如无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种的转种、传代和保藏、微生物检查方法及使用鉴定的基本技术等,经考核合格后方可上岗”。 强调了“实验人员应经过实验室生物安全方面的培训，保证自身安全，防止微生物在实验室内部污染”。 提出了实验室应制定所有级别实验人员的继续教育计划，“保证知识与技能不断的更新”,一、人员,CNAS-CL09 检测和校准实验室能力认可准

5、则在微生物检测领域的应用说明 第5.2.1节要求： 实验室使用人员时，应考虑以下条件 a) 有颜色视觉障碍的人员不能执行某些涉及到辨色的试验。 b) 实验室人员是否熟悉生物检测安全操作知识和消毒知识？ c) 实验室是否对在培人员实施有效监督？ d) 实验室是否对新员工进行检测技能的培训，对新员工的检测技能进行确认？,岗位职责,2. 一定资质,3 .人员培训、再培训,检验人员 基本技术、生物安全、相关能力,管理人员 技术要求、管理技能、标准应用,关注要点,二、培养基,应符合中国药典2010年版有关规定及(CNAS-CL09:2006)实验室现场评审核查表检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领

6、域的应用说明 实验室应建立和保持有效的适合试验范围的培养基（试剂）质量控制程序,二、培养基,应做的质量管理工作： （1）建立培养基质量控制程序 如： 培养基质量控制程序 （2）培养基的配制操作SOP 如： 培养基配制标准操作规程 （3）培养基配制记录 如：培养基配制原始记录 （4）培养基适用性检查 如：培养基适用性检查记录表 培养基灵敏度检查表,二、培养基,培养基储藏保管注意： 干粉培养基包装未开启使用前应储藏在阴凉干燥处，开启使用后的应置冰箱储藏，防止微生物生长、吸潮、结块、变质。应有专人保管并建立帐册。 帐目立项：进货日期、品名、规格、批号、数量（瓶）、领用日期、领用数量、领用人等。,二、

7、培养基,严格遵守用验证过的灭菌程序灭菌。（温度和时间） 灭菌后的培养基应注意避光保存，防止第二次污染。 应有配制培养基的原始记录、灭菌记录 记录项目： 日期、名称、批号、配置数量、配制人,无菌检查培养基适用性检查,无菌性检查 灵敏度检查 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 黑曲霉 白色念珠菌,微生物限度检查培养基适用性检查,计数培养基 控制菌检查用培养基 促生长能力 抑制能力 指示能力,对照培养基,培养基的储存,培养基的制备（灭菌温度、时间）,（适用性检查、 pH值、定期稳定性）,培养基的质量控制,.,.,.,关注要点,三、菌种,应符合：中国药典 2010年版相关规定 和(C

8、NAS-CL09:2006)检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 菌种管理的重要性 在微生物检验中用的菌种，相当于在理化分析中用的对照品。微生物实验室对菌种的管理除了相当于化学实验室对对照品的管理要求外，还有菌种保存的特殊性。,三、菌种,溯源性、有记录 微生物检验室用于验证试验、阳性对照试验、培养基适用性试验等的对照菌种，应是一批形态、生物化学、血清学特性稳定的标准菌株，这些菌株应来自认可的国内或国外菌种收藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。,三、菌种,CNAS-CL09： 2) 实验室应有文件化的菌种管理程序（从原始菌种到日常工作用菌）该程序应

9、包括： a) 参照菌种是否定期转种传代，并做确认试验，包括实验室中所需要的关键诊断指标？实验室是否加以记录并予以保存？ b) 每一支参照菌种都应以适当的标签、标记或其它标识方式来表示其名称、标准号、接种日期和所传代数。,三、菌种,c) 其管理记录中还应包括（但不限于）以下内容： 从原始菌种传代到工作用菌种的代数； 菌种生长的培养基及孵育条件； 菌种生存条件。 要求上述a)、b)、c)均应有记录。,三、菌种,实验室必须建立和保存其所有菌种的进出、收集、贮藏、保存、确认试验以及销毁的记录， 应有文件化的程序管理菌种（从标准菌株到工作菌株），该程序包括：标准菌种的申购记录；从标准菌株到工作菌株操作及

10、记录； 菌种必须定期转种传代，并做纯度、特性等实验室所需关键诊断指标的确认，并记录； 每支菌种都应适当标注，注明其名称、标准号、接种日期、所传代数；菌种生长的培养基和培养条件；菌种保存的位置和条件；其它需要的程序。,三、菌种,实验室应做的质量管理工作： （1）建立菌种管理程序 如：菌种管理程序 （2）建立菌种转种操作SOP. 如：检验用菌种保管与转种传代管理标准操作规程 （3）建立菌种的领用制度 如：实验菌种领用登记表 （4）进行菌种保管的定期检查。 如：菌种传代、使用记录,三、菌种,菌种管理举例： 1、 菌种申购，应有室主任同意签字。 2、指定专人负责保管，并持证上岗。 3、建立菌种购入、领

11、用进出帐册。 4、有菌种专用冰箱加锁保藏。 5、微生物实验室应分保藏菌种和工作用菌种。 6、专人负责定期转种、传代工作。每次转种应 严格核对慎防混淆。 7、有转种、传代记录：日期、菌种名称、编号、传代次数、培养基、培养温度、菌落型态、确认试验、转种传代人签名。 8、保藏菌种控制传代次数不超过5代 9、 转种后上一次菌种应高压灭菌后清洗。 10、每管工作用菌种斜面开启后不得重复使用。并高压灭菌处理。,三、菌种,以上10点均应在建立的菌种管理文件（菌种管理程序、菌种管理标准操作规范（GL-SOP）、菌种转种传代标准操作规范（SOP)、菌种转种传代领用记录）有体现。,关注要点,.菌种的来源,标准菌株

12、,标准储备菌株 工作菌株,.菌种保藏,.菌种的传代和使用,代内,.菌种的管理,程序文件,四、实验室的布局和运行,(CNAS-CL09:2006) 检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 对实验室设施的要求是以能获得可靠的生物检测结果为重要依据；实验室总体布局和各部位的安排应有利于减少潜在的对样本的污染和对人员的危害。 对有洁净条件要求的工作区域应有明确标识。并能有效地进行控制、监测和记录 注意实验室间的有效隔离，有适当措施防止交叉污染。 对进入无菌或净化等特定区域的人员应有效控制 。 有妥善处理废弃样品和有害废弃物的设施和制度，并且注意生物安全。,四、实验室的布局和运行,（）合

13、理分区、操作便利、避免混乱、防止污染、生物安全 （）无菌检查 修订前万级（C）下局部百级（A）或隔离器 修订后B + A或D + 隔离器 （）微生物限度检查 修订前万级（C）下局部百级 修订后 不低于受控环境下的B级,四、实验室的布局和运行,单向流空气区与工作台面必须定期按国家标准GB/T16292-16294-现行版【医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法】进行洁净度测定。,四、实验室的布局和运行,洁净室使用管理 1、 建立洁净室使用与清洁维护标准操作规程。 如： 洁净室的验证、使用与清洁维护标准操作规程 洁净室(区)使用标准操作规程,四、实验室的布局和运行,2、建立洁净室使

14、用登记表。 如： 洁净室（区）使用、维修登记表 洁净室（区）的清洁、维护记录表 逐月保存并定期归档备查！,微生物功能实验室,1.洁净室或隔离系统： 2.活菌操作区： （包括生化鉴定、 分子生物学实验、 必要的化学实验） 3.辅助区域：,无菌检查 微生物限度检查 无菌采样,阳性间 细菌实验室、真菌实验室 微生物效价检定室,培养室 培养基及实验用具准备（包括灭菌）区 样品接收和储藏区 标准菌株储藏区 污染物处理区,四、实验室的布局和运行,监测标准 参考GMP（2010），见下表 各洁净级别空气悬浮粒子的标准,沉降菌,物理参数,表面微生物,空气 悬浮粒子,浮游菌,环境监控,关注要点,清洁、消毒和卫生

15、,标准操作规程,杀死广泛的微生物 对人体无毒害 不腐蚀或玷污设备 有清洁剂的作用 性能稳定、作用快 残留少、价格合理。,种类定期更换 监测微生物污染,理想的消毒剂,A级和B级洁净区应当使用无菌的或经无菌处理的消毒剂和清洁剂。,五、设 备,1、高压灭菌锅管理 （1）档案建立： 从开箱验收记录调试记录专人负责制操作规程（SOP）定期校验检定使用登记维修记录改造或更新记录报废记录。应贯穿设备的一生。 （2）定期校验 应由计量测试院定期强检，以确保消毒质量和使用安全。并贴有绿色合格标识后使用。 选择物理、化学指示剂和生物指示剂进行灭菌效果监测和验证。留底温度计、三M试纸、嗜热脂肪芽孢杆菌，并且记录。,

16、五、设 备,（3）操作SOP的建立 如： 立式压力蒸汽灭菌器标准操作规程 （4）建立使用记录、维护记录： 如： 年高压灭菌锅（编号： ）使用记录,五、设 备,净化工作台的管理 （1）档案建立： 从开箱验收记录调试记录专人负责制操作规程（SOP）洁净度验证使用登记维修记录高效过滤更换记录报废记录。应贯穿设备的一生。 （2）定期洁净度验证 （3）操作SOP的建立 （4）建立使用记录、维护记录：,五、设 备,恒温干燥箱 培养箱 冰箱,建立仪器设备的清洁保养制度,建立完整的仪器设备管理制度,建立仪器设备操作规程,建立仪器设备使用、监控等记录,清单化管理 标识化管理 分类管理,关注要点,定期维护 性能检

17、定 清洁消毒 持证上岗（特殊设备） 设备专用,温度测量装置 称量设备 容量测定设备 生物安全柜、层流超净台、高效过滤器 其他设备,1.设备的维护,2.校准、性能 验证和使用监测,关注要点,六、文件,检验工作,规定质量方针、目标， 描述管理体系的要素、要求、 职责与途径 质量手册 实施体系各要素时涉及各部门 管理体系程序文件 质量活动的程序（谁、做什么、 何时、何地、如何做） 标准操作规程 操作中的技术细节（作业指导 书、实施细则）（怎么做） 记录（报告、表格、原始记录等） 结果、表明体系正在运行 使用范围 图1 管理体系文件结构,六、文件,写你所做的 做你所写的 记你所做的,六、文件,文件充分

18、表明试验是在实验室里按可控的检查法进行的。 包括内容： 人员培训与资格确认； 设备验收、验证、检定（或校准期间核查）和维修； 设备使用中的运行状态（设备的关键参数）； 培养基制备、贮藏和质量控制； 菌种管理； 检验规程中的关键步骤； 数据记录与结果计算的确认； 质量责任人对试验报告的评估； 数据偏离的调查。 关注要点,七、实验记录,实验结果可靠性,原始记录书写 应规范化,。,内容完整,关键的实验细节,检验标准选择,严格按照SOP操作,八、结果的判断,不符合药典或标准规定要原因调查。,无菌阳性，按药典要求进行评估，确定是否进行重试。,异常结果应进行偏差调查。,检测报告应该符合检测方法的要求。,准

19、确、清晰、明确、客观 地报告每一项或每一份检测的结果。,实验结果充分全面评价。,(4),(5),关注要点,九、污染废弃物处理,应符合实验室安全条例的要求及(CNAS-CL09:2006) 检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明 实验室是否有妥善处理废弃样品和有害废弃物的设施和制度？并且注意生物安全？,九、污染废弃物处理,实验室应有妥善处理废弃样品、“过期(或失效)培养基”和有害废弃物的设施和制度，“旨在减少检查环境和材料的污染。污染废弃物的最终处理必须符合国家环境和健康安全规定”。,九、污染废弃物处理,需做的质量管理工作： （1）建立灭活和防污染控制程序 见：灭活和防污染控制程