动物细胞融合和单克隆抗体.ppt

1、知识回顾,1.动物细胞融合过程：,动物细胞A 动物细胞B,诱导，融合,2个完整的杂交细胞AB,有丝分裂,（膜融合、质融合）,（核融合）,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。,主要是应用杂交瘤技术制造单克隆抗体,2.意义：,3.应用：,三、动物细胞融合,方法？,4.植物体细胞杂交和动物细胞融合比较,细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、 果胶酶去壁,用胰蛋白酶 使细胞分散,物理、化学方法,物理、化学、 生物方法,获得部分或完整植株,主要用于制备 单克隆抗体,考点疑难分析,克服远源杂交不亲和的障碍,突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能,（讨论归纳）,高考仿

2、真题练,1.(2016海口模拟)(1)动物细胞诱导融合运用的原理 是_， 该过程中区别于原生质体融合的 方法是用_处理。,细胞膜具有流动性,灭活病毒,2.科学工作者用绿色和红色荧光材料，分别标记人和鼠的 细胞膜上的蛋白质。当两个标记细胞融合成一个细胞后， 起初一半膜发出绿色荧光，另一半膜发出红色荧光，一段 时间后，两种颜色的荧光点均匀分布，如图所示。请分析 回答：,该实验结果说明了细胞膜 ，这是因为 若在两个细胞融合成一个细胞后，将融合细胞置于0 条件下再保持40min，则融合细胞仍然是一半膜发绿色荧 光，另一半膜发红色荧光，这说明,具有一定的流动性,构成细胞膜的磷脂分子和蛋白质大都是可以运动

3、的,膜的流动性受温度影响，在低温下分子的运动受抑制,1. 单克隆抗体的概念,单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体,将单个B淋巴细胞和骨髓瘤细胞 融合成杂交瘤细胞分泌的,四、单克隆抗体,(1)单克隆抗体：,(2)制备原理：,知识回顾,B-B B-瘤 瘤-瘤 （未融合的B、瘤）,（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活,获得产生相应抗体的B细胞,（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔内培养,杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。,2.单克隆抗体制备过程,B淋巴细胞 骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养基,杂交瘤细胞（

4、 B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,产生所需抗 体的杂交瘤 细胞,体外培养,单克隆抗体,2.单克隆抗体制备过程图解,（用箭头和文字写出概念图）,知识自主构建,提纯,（讨论归纳）,共有几种细胞？,（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?,小鼠骨髓瘤细胞可大量增殖， B淋巴细胞能产生抗体。,（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗?,有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。,感悟拓展,（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?,第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）,第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有 一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后 再筛选出

5、能产生特异性抗体的细胞群。,3.单克隆抗体的应用：,（1）作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与抗原特异性结合,（2）用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,优点：准确、高效、简易、快速,单克隆抗体的优点：,优点:疗效高、毒副作用小,特异性强，灵敏度高，能大量制备。,（2013年 海南卷）31.(15分)单纯疱疹病毒I型HSV-I)可引起水泡性口唇炎。利用杂交瘤技术制备出抗SV-1的单克隆抗体可快速检测HSV-1。回答下列问题：,(1)在制备抗HSV-I的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的HSV-1蛋白，一段时间后，若小鼠血清中抗_ 的抗体检测呈阳性，说明小鼠体

6、内产生了_ 反应，再从小鼠的_ _中获取B淋巴细胞。将该B淋巴细胞与小鼠的_ _ 细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞，该细胞具有的特点是_ 。：,HSV1蛋白,体液免疫,脾脏,无限增值且产生专一抗体,骨髓瘤,真题感悟,(2)若要大量制备抗该蛋白的单克隆抗体，可将该杂交瘤细胞注射到小鼠的_ 中使其增殖，再从_ _中提取、纯化获得。 (3)通过上述方法得到的单克隆抗体可准确地识别这种HSV-I蛋白，其原因是该抗体具有 _和_ _等特性。,腹腔,腹水,纯度高,特异性强,2014新课标卷(第40题)（15分）某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，

7、每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。,若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：,真题感悟,（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过 _ 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是 _小鼠，理由是_ _,4,Y,（2）细胞融

8、合完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。 （3）杂交瘤细胞中有 个细胞核，染色体数目最多是 条。 （4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是 。,Y小鼠的血清抗体效价最高,骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞,淋巴细胞相互融合形成的细胞,细胞融合是随机的且融合率达不到100%,1,100,不能无限增殖,1.(2016河南名校测试）(1)单克隆抗体 制备过程中涉及的细胞工程技术有 _。 (2)单克隆抗体的特点是： _。,特异性强、灵敏度高、并可大量制备,动物细胞培养、动物细胞融合,高考仿真题练,(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则

9、B细胞是取自小鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。 （2）d过程是一个_过程，该过程的进行常用_或_的诱导。 (3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种类型的C细胞，因此需用_培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是 ，其特点是_。,效应B,抗原,细胞融合,聚乙二醇 灭活的病毒,选择性,3,既能无限增殖又能产生特异性抗体,杂交瘤细胞,2.(2015甘肃模拟)根据图解回答问题：,(4)在培养时通过_分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项）_。 （5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_。,特异性强、灵敏度高,有丝,无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境,两个过程,动物细胞融合过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势,课堂小结,重点,课后作业：三维设计P104知命题热点二、1,1、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达