第20章(浊度)自动化仪器分析-2010.ppt

1、第20章免疫检查自动化仪器分析，1了解免疫检查自动化的基本概念2了解免疫检查自动化设计的基本原理3了解免疫检查自动化仪器的临床应用4了解几种常用免疫检查自动化设备的检测原理、应用和评价，本章的重点，免疫检查自动化(automation of immunoassays)是在免疫反应检测过程中取样、试剂、混合，第一节自动免疫浊度分析系统，免疫浊度分析是液相沉淀检查，基本原理是抗原，抗体对特定电解质溶液反应，形成小分子免疫复合物(19S)，使反应液产生浊度。抗体稍微过度固定后，产生的免疫复合物的数量随着抗原量的增加而增加，反应液的浊度也增加。也就是说，要测试的抗原数量与反应溶液的浊度有正相关关系。第

2、一，免疫透射率浊度法，【原理】当特定波长的入射光在抗原抗体反应后通过溶液时，由其中的免疫复合粒子吸收、反射和折射减弱(图9-7)，在一定范围内，吸光度和免疫复合物的量是正相关的，形成的免疫复合物的量与参与反应的抗原和抗体的量有函数关系。与已知浓度的抗原参考剂相比，可以确定标本的抗原含量。第二，免疫乳胶浊度法原理是抗体致敏的大小适中的均匀乳胶粒子(通常为0.2米)，遇到该抗原时，乳胶粒子的抗体与抗原特异性结合，引起乳胶粒子的聚集，使得透射光和散射光都发生了巨大变化。图：a是单乳胶粒子，不妨碍光线通过，b是抗原抗体结合形成的冷凝乳胶大粒子，可减弱透射光或提高散射光。第三，免疫散射浊度法，【原理】粒

3、子对射线的散射作用是，当溶液中的微粒受到光的照射时，微粒对光产生反射和折射，形成散射光。悬浮粒子对光的散射形成的散射光的强度与粒子的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等密切相关，其公式如下：表达式的I是与入射光成角度的散射光的强度。I0是入射光的波长和强度。Dn/dc是反映溶液折射指数和粒子浓度变化的修正因子。m是粒子分子量。c是浓度。n是佛祖保佑指数。粒子和探测器之间的距离；散射光和入射光的角度(散射角)。II042(dn/dc) 2 Mc(1 cos) N24、粒子直径1/10瑞利散射1/10粒子直径Debye散射粒子直径Mile散射、定时散射比浊法随着时间的推移，散射浊度法是避免抗

4、原抗体反应的不稳定阶段，散射光信号是反应开始7.5s2分钟以内的第一次读数，在抗原抗体反应的最佳时机，特别读数检测误差最小化。速度散射浊度法速度散射浊度法是抗原抗体结合反应的动力学测定。速度是指抗原抗体反应形成免疫复合物的速度(不是免疫复合物累积量)，在每个单位时间内形成复合物的速度，并与产生的散射光信号相联系，形成动态的速度散射比浊法，每个检测在1分2分钟左右就完成了。，表位抗体复合物的形成速度，抗原抗体反应速度的动态变化，BN ProSpec全自动特定蛋白质分析器，BNP antigen过度设计：优化反应条件，扩大初始稀释度分析范围，确保抗原抗体反应最佳比例的预反应计划：IgM，LamU，

5、AlbU，2MU 温度，抗原抗体反应的特性，抗原抗体反应的影响因素，抗体，抗体的质量特异性，效价，亲和性，r型抗体过量服用，抗体的特定抗体只针对该抗原，非特异性交叉反应会引起伪浊度。抗体效价合格的浊度抗体效价必须在1: 20以上(抗体稀释度)，否则容易发生假性浑浊。抗体亲和力强的抗体具有较高的抗体活性，不仅能提高抗原抗体反应速度，而且免疫复合物结实，不易分解。r型抗血清代表兔子，例如豚鼠、老鼠、兔子、家禽、绵羊等动物的免疫血清。抗血清亲和力高，与抗原结合，再次不易破裂，抗体分泌过多时形成大而稳定的复合体，抗原过量时形成可溶性复合体。h型抗血清，如驴、骡、马等动物的免疫血清，代表马。血清亲和力弱

6、，抗原抗体结合后容易再次解开，抗原过量和抗体过量容易形成可溶性复合物。ph: 6.58.5离子强度：在一定范围内离子强度高，IC快速形成；离子强度太低或没有电解质的话，很难出现可见的沉淀反应。3 .使用浊度剂为了提高抗原抗体复合物的形成速度，经常添加分子量为6000800的3%4%聚乙二醇(PEG)或tween -20(tween-20)等粘度计，去除蛋白质分子周围的电子云和水合层，促进抗原抗体结合。但是，如果peg浓度太高，分子量通过大会，血清中其他蛋白质(如IgM，2球蛋白，脂蛋白)非特异性地沉淀，成为伪浊。因此，要使用适当的浊度剂，正确测量适当的浓度。4 .假性浊度非抗原抗体特异性结合形

7、成的浊度称为假性浊度，抗原检查结果会引起假性上升。医生浊度形成的原因包括浊标本、高脂血症标本、反复冻融标本等。抗体效价低(1333620)，抗血清灭活，抗血清包含交叉反应抗体等。浊度剂peg浓度太高。抗血清细菌污染和变质作用；设备，特别是有色杯不清洁，灰尘污染等；缓冲液的离子强度太高，pH和温度不合适等影响浊度。5 .标准曲线准备和质量管理应用中规定的标准准备剂量-反应曲线，一般为5或6点修正，选择适合曲线拟合的数学方法；每次更换试剂的放置，都要重新制造剂量-反应曲线。为了确保准确可靠的结果，选择适当的质量控制血清，每次开机都需要进行室内质量控制。根据自动酶联免疫吸附分析系统的处理方法，人们一

8、般将自动酶联免疫分析分为分型、连体机两类。拆分器系统由自动样品处理站预处理系统和自动酶免疫分析器后处理系统组成。沙姆布雷基由一台计算机、一个操作系统、一个模块组成，自动完成从稀释标本、加法到酶板孵化、清洗、试剂、再孵化、清洗、读数、打印结果的所有过程。自动酶联免疫吸附分析系统，自动酶联免疫吸附分析程序可以同时操作630个面板酶板，具有不同大小和配置的完整工作和分析系统，但性能基本相同。，1 .条形码识别系统2。样品框架和样品采集系统3。试剂机架4。温度培养系统5。液体系统6。洗涤系统7。酶读写器8。自动负载转移系统9。计算机管理和信息系统、仪表评价自动酶分析器的沙姆布雷机结合样品处理站和自动酶分析器工作，速度快、自动快，适合血液站系统等大规模样品处理。di