新教材高中生物选择性必修3课件2：1 2 1 微生物的基本培养技术(人教版)

第2节第1课时微生物的基本培养技术高压蒸汽灭菌液体培养基从社会中来向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。一般家庭自制酸奶可能会导致肠胃不适，主要原因是有杂菌混入。那么怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？这需要应用无菌技术和微生物的培养技术无细胞结构原核细胞真核细胞微生物：真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫等1.微生物的类群病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒细菌：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌：链霉菌等难以用肉眼观察的微小生物的统称。2、实验室培养微生物条件1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件——培养基2）确保其它微生物无法混入——无菌技术微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。高压蒸汽灭菌微生物1）细菌的形态杆菌球菌霍乱弧菌葡萄球菌螺旋菌2）微生物生长繁殖产生的菌落沙门氏菌毛霉一、培养基的配制1、培养基概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。3、培养基类型：固体培养基液体培养基有无琼脂分离、计数、鉴定等扩大培养、工业生产2、培养基作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。（阅读P9回答）长有酵母菌菌落盛有液体培养基（①提供微生物繁殖所需各种营养，②异养微生物的能源）划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途（补充资料1)培养基的类型及用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基一、培养基的配制培养基中加氨苄青霉素具有抗氨苄青霉素能力的菌落没有氨苄青霉素抗性的细菌选择培养基培养基+氨苄青霉素培养基没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?一、培养基的配制4、培养基的营养构成:（1）基本成分：碳源、氮源、水、无机盐①碳源：无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物②氮源：无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源③无机盐：Ca、K、Mg为大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能够为微生物提供C、N等元素的营养物质。一、培养基的配制表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（2）还需满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的需求例如:培养乳酸菌要添加维生素；培养霉菌要调酸性；培养细菌要调至中性或弱碱性；培养厌氧菌要提供无氧条件。一、培养基的配制维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等泛指在培养微生物的操作中，避免杂菌污染的方法。主要包括消毒和灭菌两个方面：消毒对操作的空间、操作者的衣着和手灭菌培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶、吸管和接种环等还要注意：避免已经灭菌的材料用具与周围物品接触为了避免周围环境微生物污染，操作应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。二、无菌技术消毒使用较为温和的物理、化学或生物等方法，杀死物体表面或内部一部分微生物。1.概念：2.消毒的方法：①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：62-65℃下煮30min或80-90℃下煮30s-1min。

③化学药剂消毒法：用70%酒精擦拭双手；氯气消毒水源。

④紫外线消毒法：用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台资料卡常用的消毒和灭菌方法二、无菌技术灭菌

1.概念：指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。2.灭菌的方法：

①灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧效果：最彻底原理：使微生物燃烧对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位二、无菌技术原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于

玻璃器皿(如试管、培养皿、吸管、注射器)

金属器具(如针头、镊子、剪刀等)的灭菌②干热灭菌：干热灭菌箱内160-170℃下加热2-3h二、无菌技术原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。对象：培养基等注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。③湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121℃下维持15-30min高压蒸汽灭菌锅二、无菌技术

1.概念：2.灭菌的方法：

①灼烧灭菌②干热灭菌③湿热灭菌

160-170℃下加热2-3h。100kPa、121℃下维持15-30min.二、无菌技术灭菌芽孢

有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。孢子

细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。二、无菌技术类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min消毒与灭菌接种室、接种箱，超净工作台二、无菌技术三、微生物的纯培养由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。1.概念：2.内容：（1）配制培养基（2）灭菌（培养基和器具）（3）微生物接种（4）分离（5）恒温箱中培养酵母菌的纯培养探究-实践分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。1、菌落：2、纯培养：采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。3、原理：微生物群分散或稀释单个细胞单个菌落繁殖方法步骤1、制备培养基1）配制培养基称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml.2）灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min.将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h.包器材倒平板的具体操作：3）倒平板——待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。1.拔出锥形瓶的棉塞2.将瓶口迅速通过火焰3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基到人，立即盖上皿盖。4.等待培养皿冷却后，将培养皿倒过来放置。灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。

防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。问题讨论2、接种和分离酵母菌通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。(1)原理：单个细胞微生物群单个菌落连续划线分散或稀释生长繁殖连续划线法分区划线法(2)“平板划线”实验操作(2)“平板划线”实验操作1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞3、将试管口通过火焰.4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液5、将试管通过火焰，并塞上棉塞6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连8、将平板倒置放入培养箱中培养。划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌分区划线法12345①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌④划线后,培养皿倒置培养平板划线法注意事项:灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞杀死接种环上原有微生物问题讨论问题讨论3.培养酵母菌