药学毕业论文 番石榴叶提取物的降血糖作用研究

番石榴叶提取物的降血糖作用研究目录TOC\o"1-3"\h\u12662摘要 前言文献综述DM简介DM是以糖代谢紊乱为主要表现的内分泌代谢性疾病，常伴随多种慢性并发症，造成多器官、多系统的广泛损伤，具有较高的致残率，其发病率呈逐年上升趋势。估算世界上所有国家（在1995、2000和2025年）三个时间点的DM患病率和≥20岁的DM患者人数，并计算其他参数，研究设计和方法将针对特定年龄段的DM患病率估算值应用于联合国人口估算和预测中，世界上所有≥20岁的成年人数量，以便预测DM的发生率。根据统计发现，DM将越来越集中在城市地区。本报告结论支持对21世纪第一季度世界DM流行特征的早期预测。中医理论治疗DM中医治疗方法适合以天花粉来滋阴清热、益气养阴，从而改善病症。DM晚期的症状表现为，体内痰疲互结，气血阴阳俱虚，浊毒内停，从而造成多重器官严重受损。治疗病症除了祛痰浊毒邪、活血化瘀外，还要补肾培元、益气养血，这样才能有比较理想的治疗效果。课题背景Gua由于其药理活性，不仅在世界范围内被用作食品，而且还被用作民间药物。尤其，Gua的叶提取物在东亚和其他国家传统上用于治疗DM。此外，在一些动物模型中已经报道了提取物的抗高血糖活性。然而，关于提取物在人类临床试验中的治疗活性及其潜在的治疗机制和安全性知之甚少。在日本，含有GL含水提取物的番石榴叶茶（Bansoureichasup/sup，养乐多本社，日本东京）已被批准为特定健康用途食品之一，现已在市场上销售。其描述了GL提取物的活性成分及其在体外的抑制作用，提取物和番石榴叶茶的安全性，餐后血糖升高的降低以及高血糖，高胰岛素血症，低脂联素血症的改善，鼠模型中的高甘油三酯血症和高胆固醇血症以及一些临床试验。餐后血糖升高的慢性抑制对于预防T2DM很重要，并且番石榴叶茶被认为可作为长期疗法的营养疗法。鼠模型中的高甘油三酯血症和高胆固醇血症以及一些临床试验。作为一种天然的药物资源，GL在降血糖研究中有着较好的开发前景，为了更加有效地开发和利用GL这种天然产物在治疗DM的药用价值，本实验研究不同浓度EEGL对DM小鼠的降糖效果，以及其糖耐量、总胆固醇（总胆固醇量）、丙二醛（丙二醛）、超氧化物歧化酶（超氧化物歧化酶）水平、脏器系数等相关指标的影响，并且对其降血糖作用进行了评估，旨在可以更广泛地开发和利用具有降血糖作用的GL，为DM的临床治疗提供可靠的实验依据和理论参考。实验部分实验动物雄性昆明种小鼠36只，清洁级，体重20~25g，（SPF级，由四川省疾病预防控制中心提供）。许可证号：SYXK(川)2020-229。于室温（20~25℃）、相对湿度（50±5%）的动物室内适应7d，自由摄食和饮水，多笼饲养。实验药物（1）材料：攀枝花GL（2）预处理：图2-1EEGL的提取：图2-2实验试剂试剂：65％食用乙醇（蒸馏水稀释95％食用乙醇配制），试剂：70%乙醇；柠檬酸、柠檬酸钠：AR级（购于天津华东试剂厂）；链脲佐菌素（STZ）：纯度≥98%（HPLC）（美国SIGMA公司）；盐酸二甲双胍（海南金晓制药有限公司）；NaCl注射液（0.9%）（吉林康乃尔药业有限公司）；葡萄糖粉剂（广西梧州制药有限公司）。试剂盒：总胆固醇（T-CHO）试剂盒（ml063156-J）、丙二醛（丙二醛）试剂盒（ml063156-J）和超氧化物歧化酶（超氧化物歧化酶）试剂盒（上海源叶生物科技有限公司）（ml560479）。实验仪器京都血糖仪GT-1640（日本ARKRAYInc.）；电热恒温水浴箱：SSY6型（北京泰克仪器有限公司）；多功能离心机Frontier™5000MultiPro（上海达姆实业有限公司）；涡旋混匀器：VORTEX08（上海达姆实业有限公司）；真空冷冻干燥机LAB-JP2G（医药压盖型，2平方）（上海继谱电子科技有限公）；真空泵D总胆固醇量-22B型（日本ULUACKIKO公司）；冷凝器DWN-90（东京理化器械株式会社）。图2-3实验环境实验方法实验动物的分组表2-1小鼠分组情况组别小鼠状况数量样品剂量空白组正常鼠6蒸馏水500mg／kg·BW模型组DM模型鼠6蒸馏水500mg／kg·BW阳性对照组DM模型鼠6盐酸二甲双胍500mg／kg·BW低剂量组DM模型鼠6EEGL250mg／kg·BW中剂量组DM模型鼠6EEGL500mg／kg•BW高剂量组DM模型鼠6EEGL1000mg／kg·BW取6只正常小鼠作为空白组，其余造模鼠分为五组，每组6只，具体分配见表2-1。T1DM动物模型的建立链脲佐菌素（STZ）配制：图2-4小鼠造模：小鼠的理化指标和生化指标的测定（1）小鼠体重、摄食量、饮水量的测定：开图2-5（2）小鼠空腹血糖的测定：测定小鼠空腹血糖值时，取尾静脉血，剪尾尖后弃第1滴血用第2滴血测定。（3）口服葡萄糖耐量试验：最后1次灌胃后禁食12h，经口1次性灌胃大剂量葡萄糖溶液（剂量2g/kg·BW），分别测定小鼠0、10、30、90、120min时的血糖水平。（4）脏器系数的测定：称取解剖小鼠所得心、肝、脾和肾的重量，计算得脏器系数。（5）生化指标的测定：取眼血和肝脏，冰浴保存，按照各试剂盒的使用方法进行操作，测定吸光值，计算总胆固醇量、丙二醛和超氧化物歧化酶含量。统计学分析采用SPSS15.0对所得的实验数据进行统计学分析，进行单因素试验，所得数据以图表和均值±标准偏差（±SD）的形式表示。P<0.05，表示差异性显著，P<0.01，表示差异性极为显著，P>0.05，表示无显著性差异。结果分析EEGL性状及得率EEGL浓缩成膏状物后稍粘稠，烘干后表面光泽不明显，不易吸潮，研磨成粉后呈棕黄色；用乙醚脱去脂溶性物质后，乙醇提取物颜色变浅。GL经65%乙醇提取得到得EEGL，得率为22.0%。EEGL对一般情况的影响表3-1EEGL对小鼠基础指标的影响（n=6x±s）项目空白组模型组阳性组低剂量组中剂量组高剂量组体重增量/g22.82±3.2510.33±0.8116.36±3.52*9.23±2.23*11.35±1.26*16.43±4.28*摄食量/g230.63333.62267.38*210.52*193.65*226.34*饮水量/g283.521523.651103.26*1683.56*1796.35*1856.39*注：“*”为与空白组比较P<0.05对各组小鼠经3周的灌胃试验，对比观察得到：空白组小鼠体重增重最多，高于注射STZ的各组小鼠，并存在显著性差异（P<0.05），因此，正常组食物利用率最高，而模型组食物利用率最低，给药组随着用药剂量的增加食物利用率随之提高，“三多一少”症状有所缓解。各组摄食量没有显著性差异，但是模型组较正常组而言出现了多饮现象。EEGL对小鼠血液指标的影响乙醇提取物对小鼠空腹血糖的影响各组小鼠血糖变化见图3-1。图3-1小鼠血糖变化分析注：模型组与空白组比较P<0.01，给药组与模型组比较，四周时P<0.05，四周之后，P<0.01。由图3-1我们可以看出，在成功造模之前，所有小鼠体内血糖浓度差异不显著，但在造模成功后，所有模型组的小鼠血糖量均高于11.1mmol/mL。从灌胃治疗开始，模型组血糖浓度逐渐上升，空白组相对稳定，且与其他组血糖浓度有显著差异（P<0.05）；给药组血糖随时间延长逐渐下降，其中，高剂量组血糖下降最快，在一定程度上与盐酸二甲双胍的降糖效果一致，这说明高剂量组降糖效果显著，对小鼠降血糖具有辅助作用。图3-2乙醇提取物对小鼠糖耐量的影响注：型组与空白组比较P<0.01，给药组与模型组比较，低剂量组和中剂量组90min和120min，P<0.05，其他，P<0.01。在0~60min，各组小鼠血糖浓度全部呈上升趋势，并且在60min时达到最大，在60min之后，各组小鼠血糖浓度均呈下降趋势。在60~90min时，所有给药组血糖浓度均显著低于模型组（P<0.05），高剂量、中剂量组与阳性对照组血糖浓度急剧下降，低剂量组也下有所下降，并且下降趋势与空白对照组相近。说明高剂量和中剂量组对小鼠糖耐量的改善效果较好，表明该乙醇提取物具有提高小鼠抗血糖的能力。对小鼠血液总胆固醇量、丙二醛、超氧化物歧化酶的影响EEGL对小鼠血液总胆固醇量、丙二醛、超氧化物歧化酶的影响见表3-4。表3-2对小鼠血液总胆固醇量、丙二醛、超氧化物歧化酶的影响（n=6x±s）组别总胆固醇量mmol/L丙二醛mmol/L超氧化物歧化酶mmol/L空白组5.52±1.218.02±3.66b249.96±5.69a模型组10.65±2.73*19.23±8.03*165.63±12.36*阳性组7.86±1.2810.86±4.68245.63±6.83低剂量组9.23±1.2713.22±3.89220.23±3.86*中剂量组8.33±1.1311.63±1.65233.56±5.63高剂量组7.83±1.259.98±3.66246.37±4.36注：“*”为与空白组比较P<0.05，其余的实验差异不显著由表3-2可知，空白组总胆固醇量、丙二醛、超氧化物歧化酶的含量最低，模型组的含量最高，并且给药组随乙醇提取物浓度的上升，总胆固醇量、丙二醛、超氧化物歧化酶的含量逐渐下降，其中高剂量组与阳性组的总胆固醇量、丙二醛、超氧化物歧化酶值差异性不显著（P>0.05），但均低于中、低剂量组。超氧化物歧化酶含量在模型组中最低，空白组中最高，灌胃EEGL的三组随浓度的上升而上升。其中高、中、低剂量组与阳性组差异不显著（P>0.05），与模型组有显著性差异（P<0.05）。这说明不同浓度的EEGL可能具有一定的提高DM小鼠抗氧化能力的作用。EEGL对小鼠脏器系数的影响EEGL对小鼠脏器系数的影响见表3-3。表3-3EEGL对小鼠脏器系数的影响（n=6x±s）组别心肝脾肾空白组0.40±0.032.86±0.160.23±0.020.82±0.06模型组0.41±0.034.56±0.32*0.33±0.031.58±0.08*阳性组0.35±0.023.49±0.36*0.21±0.040.98±0.03*低剂量组0.36±0.033.33±0.480.12±0.010.79±0.03c中剂量组0.33±0.023.19±0.370.18±0.040.89±0.02高剂量组0.40±0.043.52±0.45*0.14±0.011.09±0.01*注：“*”为与空白组比较P<0.05，其余的实验差异不显著从表3-3中可以看出，灌胃EEGL的小鼠心脏脏器系数和脾脏脏器系数与空白组相比没有显著性差异（P>0.05），说明EEGL对小鼠心脏和脾脏没有负担。模型组的肝脏脏器系数和肾脏脏器系数显著高于给药组（P<0.05），其中高剂量组和阳性组肝脏系数和肾脏系数最为接近。因此，不同浓度EEGL可能具有缓解DM小鼠的肝肾肿大的生理功能，浓度越高效果越好，但是由于药物普遍存在剂量问题，所以不宜过量。结论小鼠经3周的灌胃试验，正常组食物利用率最高，而模型组食物利用率最低，给药组随着用药剂量的增加食物利用率随之提高，“三多一少”症状有所缓解。通过小鼠血糖变化分析给药组血糖随时间延长逐渐下降，其中，高剂量组血糖下降最快，在一定程度上与盐酸二甲双胍的降糖效果一致，说明高剂量组降糖效果显著，对小鼠降血糖具有辅助作用。EFGL对小鼠糖耐量的影响高剂量和中剂量组对小鼠糖耐量的改善效果较好，表明该乙醇提取物具有提高小鼠抗血糖的能力。对EFGL对小鼠血液总胆固醇量、丙二醛、超氧化物歧化酶的影响分析，不同浓度的EEGL可能具有一定的提高DM小鼠抗氧化能力的作用。EEGL对小鼠脏器系数的影响，不同浓度EEGL可能具有缓解DM小鼠的肝肾肿大的生理功能，浓度越高效果越好，但是由于药物普遍存在剂量问题，所以不宜过量。综上所述，EEGL能够降低血浆中的总胆固醇量、丙二醛的含量，提高超氧化物歧化酶含量，进而提高DM小鼠抗氧化能力，其可能具有缓解小鼠脏器肿大的功能，能够显著降低小鼠的血糖值，在临床上可以用于降血糖。但是EEGL降血糖作用的相关具体机制仍然需要进一步的探讨。参考文献：庄远杯,魏爱红,陈堪彬,张超,刘付薇,梁淑荷,张声源.番石榴不同部位乙醇提取物的抗氧化、降血糖及酪氨酸酶抑制活性[J].食品工业科技,2022,43(08):365-371.梁凡,苏通,刘铜华,高明,盛彤,王颖,郭翔宇.番石榴叶提取物对db/db小鼠骨骼肌AMPK-PGC-1α-FNDC5信号通路的影响[J].陕西中医,2020,41(07):849-852.叶伟.番石榴叶有机溶剂提取物清除过氧自由基能力及抑制酪氨酸酶活力研究[J].安徽农业科学,2020,48(02):186-188.沈静.番石榴叶