支原体检验王富英讲解

8.3支原体检验MYCOPLASMATEST王富英教学目标掌握支原体的概念1熟悉常见支原体的主要特征和微生物学检验2支原体检验支原体是一类缺乏细胞壁、形态上呈多形性的微生物，能通过滤菌器并能在无生命培养基中独立生长繁殖的最小原核细胞型微生物。生态平衡生理意义无细胞壁，多形性，革兰染色阴性。繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等。对抗生素敏感。含RNA和DNA。可在人工培养基生长，生长为小菌落。一、分类与特征柔膜体纲支原体目分为两个属：支原体属，64个种；脲原体属，仅有2种。与人类感染有关的主要是肺炎支原体、生殖道支原体和解脲脲原体。生物学性状（一）形态结构形态结构无细胞壁、多形性，有的细胞膜外有荚膜，与致病性有关。革兰阴性，但不易着色，（因细胞膜中胆固醇含量较多）。常用姖姆萨染色呈淡紫色。生物学性状（二）培养特性1.培养条件：营养要求比一般细菌高基础营养物质，10～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇及长链脂肪酸。最适pH7.8～8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲脲原体能分解尿素产氨，最适pH6.0～6.5。大多数兼性厌氧，但多数为微需氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2、90%N2生长更好。最适合温度：35℃。生物学性状2.生长特征：生长缓慢琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落：圆形（直径10～16um），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。液体培养基：烟雾状，有些呈小颗粒状生长沉于管底，有的成片状集落于管壁。对干燥较敏感，分离培养时保持高湿度。二分裂的方式增殖图1-15细菌L型的油煎蛋样菌落形态支原体与细菌L型的主要区别主要性状支原体细菌L型来源自然界细菌细胞壁缺陷返祖任何条件下不能返祖除去抗生素可返祖遗传遗传与细菌无关与细菌有关培养培养基中需加胆固醇不需加胆固醇生长菌落较小，直径0.1-0.3nm菌落较大，直径0.5-1nm二、临床意义1.致病机理：支原体→呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞粘附并定居后→细胞损伤→释放神经（外）毒素、磷酸酶及过氧化氢等。肺炎支原体所致称为原发性非典型性肺炎1解脲脲原体可引起泌尿生殖道感染2肺炎支原体肺炎病人或带菌者飞沫经呼吸道与宿主细胞上唾液酸受体结合原发性非典型性肺炎头痛、发热、咳嗽、胸痛、淋巴结肿大等，X光线胸部透视肺部明显浸润。通过外毒素对细胞毒害泌尿生殖道感染解脲脲原体、人型支原体和生殖道支原体等感染可引起非淋球菌性尿道炎、阴道炎、盆腔炎、输卵管炎、宫颈炎、睾丸附睾丸炎、慢性前列腺炎；可导致尿路结石；通过胎盘感染胎儿，引起孕妇流产、早产、死胎和低体重胎儿及新生儿呼吸道感染；二、临床意义2.免疫性免疫性巨噬细胞、lgG及lgM对支原体均有一定的杀伤作用。SlgA抗体有阻止支原体吸附的作用。致敏淋巴细胞可增强机体对肺炎支原体的抵抗力。三、微生物学常规检验1.标本采集：因支原体有粘附细胞作用，最好采用拭子标本。保存液为蔗糖磷酸盐缓冲液，4℃不宜超过72小时，液氮或-70℃长期保存。三、微生物学常规检验2.检验方法：液体培养基由黄色变为红色，液体清则有生长。培养基：固体培养基上10天左右有“荷包蛋样”菌落生长。生化：葡萄糖分解试验、尿素分解试验等血清方法：代谢抑制试验（MIT）、生长抑制试验（GIT）、放射免疫沉淀试验、ELISA、PCR等。支原体防治肺炎支原体的感染多采用大环内酯类药物，如罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等，或使用喹诺酮类药物，如氧氟沙星、司帕沙