血脂脂蛋白及载脂蛋白测定一血脂标本的采集与检验质量控制二血清浆静置试验三血清浆总胆固醇测定四血清浆

血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定一、血脂标本的采集与检验质量控制二、血清(浆)静置试验三、血清(浆)总胆固醇测定四、血清(浆)甘油三酯测定五、血清(浆)脂蛋白测定六、血清载脂蛋白测定分析前质控选择合格的试剂受试者的准备检测方法的选择标本的处理标本的采集校准物的选用血脂分析标准化一、血脂标本的采集与检验质量控制

采集标本前受试者应处于稳定代谢状态，至少2周保持一般饮食习惯和稳定体重

取血前24h内不进行剧烈身体活动

采集标本前受试者禁食约12h取血前24小时内不做剧烈运动《中国成人血脂异常防治指南》(2016年修订版)建议：

如血脂检验异常,应在2个月内进行再次或多次测定，但至少要相隔1周

妊娠后期各项血脂都会增高,应在产后或哺乳停止后3个月查血，才能反映其基本血脂水平

应注意有无使用影响血脂的药物，采血前应根据所用药物的特性，停止用药数天或数周，否则应注明用药信息

《中国成人血脂异常防治指南》(2016年修订版)建议：

①生物因素，如年龄、性别、体型、种族等因素的个体差异影响因素③临床因素，包括疾病或药物引起的脂代谢改变④血标本采集与处理，如是否空腹、采血部位、血液浓缩、抗凝剂与保存剂、标本处理、储存条件等②生活方式，包括饮食习惯、吸烟、饮酒、饮咖啡、运动及应激等

分析前因素对结果的影响二、血清(浆)静置试验血清静置试验是将患者空腹12小时后采集静脉血分离出血清置4℃冰箱中过夜，然后观察其分层现象及清澈度。

7正常空腹血清应清澈透明空腹血清混浊，表示TG升高，可放在4℃冰箱过夜后进一步观察如果上层出现奶油样且下层清澈，表明CM升高，VLDL正常，可能为Ⅰ型高脂血症如果上层出现奶油样且下层混浊，表明CM及VLDL均升高，可能是Ⅴ型空腹血清混浊，4℃冰箱中过夜后仍为均匀混浊，表明VLDL升高，此时应进一步测定TC，TC升高者可能是Ⅲ或Ⅱb型，而TC正常者则可能为Ⅳ型

Ⅱa型高脂血症血清也清澈透明同位素稀释-质谱法：决定性方法化学法（ALBK法）：参考方法胆固醇氧化酶法(COD-PAP法)：常规方法三、血清（浆）总胆固醇测定血清（浆）TC测定血清中TC游离胆固醇(FC或ch)胆固醇酯（CE）约占1/3约占2/3血清（浆）TC的测定，无论是化学法还是酶法，一般都要先将胆固醇脂水解为游离胆固醇才能测定（一）酶法(COD-PAP法)常规方法检测原理先用胆固醇酯酶(CEH)将标本中胆固醇酯水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成Δ4-胆甾烯酮和H2O2，然后在过氧化物酶(POD)的催化下，H2O2与4-氨基安替比林(4-AAP)及酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收峰在500nm左右，吸光度与标本中的胆固醇含量成正比在500nm处的吸收值与胆固醇含量成正比三者合称PAP（二）正己烷抽提L-B反应显色法原理

用KOH乙醇溶液使血清蛋白变性，并使CE水解为Ch。加水后用正己烷分溶抽提，可以从碱性乙醇液中定量地提取胆固醇(达99.7％)

抽提液挥发干后，以L-B试剂与Ch显色，试剂中醋酸与醋酸酐作为Ch的溶剂与脱水剂，浓硫酸既是脱水剂又是氧化剂，所生成的绿色产物主要是五烯胆甾醇正离子，最大吸收峰620nm，但随后可变成黄色产物，故须严格控制显色条件参考区间《中国成人血脂异常防治指南》(2016修订版)提出的标准为:TC＜5.2mmol/L为合适范围5.2～6.2mmol/L为边缘升高≥6.2mmol/L为升高临床意义1.TC增高常见于动脉粥样硬化、冠心病、原发性高脂血症、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲减、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣较严重时的症状：1.头晕目眩，2.头痛，3.胸闷，4.气短，5.心慌，6.胸痛，7.乏力，8.口角歪斜，9.不能说话，10.肢体麻木2.TC降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲亢、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等四、血清TG测定同位素稀释－质谱法：决定性方法二氯甲烷抽提，变色酸显色法：参考方法酶法(GPO-PAP法)：常规方法（一）酶法

1.磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法）原理用LPL使血清中TG水解成甘油和FFA，甘油在ATP和GK的作用下，生成3-磷酸甘油，再经GPO作用氧化生成磷酸二羟丙酮和H2O2，H2O2在POD作用下与4-AAP及4-氯酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌类化物。分光光度计波长500nm测定吸光度，对照标准计算出TG含量原理500nm波长处测定吸光度，对照标准计算出TG含量消除游离甘油(FG)的干扰（1）外空白法：即同时采用不含LPL的酶试剂测定血清中FG作空白值，由于此法均需双份测定，使成本加倍，但也同时获得血清FG数值。（2）内空白法：（两步法或双试剂法）将酶试剂分作两部分，其中LPL和4-AAP组成试剂Ⅱ，其余部分为试剂Ⅰ。血清先加试剂Ⅰ，37℃孵育后，因无LPL存在，TG不被水解，FG在GK和GPO的作用下反应生成H2O2，但因不含4-AAP，不能完成显色反应，故可除去FG的干扰；再加入试剂Ⅱ，即可测出TG水解生成的甘油内空白法反应原理血清加试剂Ⅰ，37℃孵育，第一步反应如下：上述反应中，因无LPL，血清中TG不能水解，游离甘油（FG）在GK和GPO催化下生成H2O2，但因试剂不含4-AAP，不能完成Trinder显色反应(故可除去FG的干扰)。然后再加入试剂Ⅱ，TG即开始发生水解反应，最后生成红色苯醌亚胺，反应式同前。即通过血清分步反应除去FG的干扰。内空白法虽然增加了操作步骤，但不增加试剂成本，且排除FG干扰效果好，预孵育5min即可排除4mmol/LFG的干扰2.乳酸脱氢酶法本法的前两步与1法相同：利用NADH在340nm处吸光度的下降来测定甘油三酯的浓度

3.甘油氧化酶法该法直接测定甘油。分两步反应：（1）此步反应可以消除血清中游离甘油的干扰作用，其中EMAE是一种还原剂，其作用与酚相似，但灵敏度比酚高。一般第一步反应后3～5分钟后即可进行第二步反应（2）第二步反应包括：（二）变色酸显色法原理用二氯甲烷抽提血清TG，同时加入硅酸去除PL、FG、MG、部分DG及蛋白。TG经氢氧化钾皂化生成甘油，酸化后以过碘酸氧化甘油产生甲醛，用亚砷酸还原过剩的过碘酸后，甲醛与变色酸在硫酸溶液中加热产生紫红色反应，然后比色测定

美国CDC将化学法(Van-Handel方法)修改后作为内部参考方法。此法抽提完全，去除了磷脂和甘油的干扰，以变色酸作显色剂，具有灵敏度高，呈色稳定等优点，但操作步骤多，不适合于日常工作中应用参考区间《中国成人血脂异常防治指南》(2016年修订版)提出的标准为:血清TG合适范围：≤1.7mmol/L边缘升高：1.7～2.3mmol/L升高：≥2.3mmol/L

临床意义1.TG增高常见于家族性脂类代谢紊乱、肾病综合征、DM、甲减、急性胰腺炎、糖原积累病、胆道梗阻、原发性TG增高症、动脉粥样硬化等2.TG降低比较少见，慢性阻塞性肺疾患、脑梗死、甲亢、营养不良和消化吸收不良综合征等可引起血清TG的降低五、血清LP测定（一）血清脂蛋白电泳（二）HDL-C测定（三）LDL-C测定（四）Lp(a)测定（一）血清脂蛋白电泳

血清脂蛋白电泳分析是利用电泳原理直接测定血浆脂蛋白的组成和相对含量，对高脂蛋白血症的分型具有十分重要的意义。电泳支持物可选用醋酸纤维素薄膜、琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等，其中琼脂糖凝胶电泳最为常用脂蛋白电泳分析可分为预染法和电泳后染色法两大类预染法的操作比较简单，分离效果直观。其操作过程是先将待测血清和苏丹黑染料按一定比例混合进行预染处理，离心后取上清液进行电泳分析。其缺点是染液中残存的染料颗粒可停留在加样处，不易与乳糜微粒区分

电泳后染色法为用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑进行染色临床上比较常用的是预染法电泳参考区间α-脂蛋白：0.30～0.40前β-脂蛋白：0.13～0.25β-脂蛋白：0.50～0.60乳糜微粒：阴性（二）HDL-C测定测定方法参考方法超速离心除去VLDL，然后用肝素-Mn沉淀LDL，上清液中的HDL-C用ALKB法测定目前临床实验室测定方法1.匀相测定法：常规方法2.化学沉淀法：如磷钨酸-Mg法、DS-Mg法和PEG6000法（曾作为常规方法）1.匀相测定法原理：（1）PEG修饰酶法(PEG法)1)CM、VLDL、LDL+α-环状葡聚糖硫酸盐+Mg2+→CM、VLDL、LDL和α-环状葡聚糖硫酸盐的可溶性聚合物2)HDL-C+PEG修饰的CEH和COD→胆甾烯酮+H2O23)H2O2+酚衍生物+4-AAP+POD→苯醌亚胺色素（2）选择性抑制法(SPD法)1)CM、VLDL、LDL+多聚体阴离子+多聚体→CM、VLDL、LDL和多聚阴离子的聚合物并被多聚体掩蔽2)HDL-C+表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O23)H2O2+酚衍生物+4-AAP+POD→苯醌亚胺色素（3）抗体法（AB法）1)CM、VLDL和LDL+抗apoB抗体→CM、VLDL、LDL和抗apoB抗体的聚合物2)HDL-C+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O23)H2O2+酚衍生物+4-AAP+POD→苯醌亚胺色素（4）过氧化氢酶法(CAT法)1)CM、VLDL、LDL+选择性试剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O22)H2O2+过氧化氢酶→2H2O+O23)HDL-C+CEH和COD+过氧化酶抑制剂→胆甾烯酮+H2O24)H2O2+酚衍生物+4-AAP+POD→苯醌亚胺色素2.超速离心结合选择性沉淀法美国CDC参考方法。美国CDC采用本法测定参考血清的靶值，并用于评价常规方法的准确性。被认为是目前测定HDL-C最准确的方法原理（1）超速离心（2）选择性沉淀（3）HDL-C测定3.硫酸葡聚糖-Mg沉淀法CDC指定的比较方法原理以硫酸葡聚糖DS50（MW50000±5000）与镁离子沉淀血清中含apoB的脂蛋白［LDL、VLDL、Lp(a)］，用ALBK法测定上清液中的HDL-C。4.磷钨酸-镁沉淀法原理在镁离子存在下，磷钨酸能选择性地沉淀CM、VLDL、LDL和Lp(a)，离心后上清液中仅保留HDL，用胆固醇酶法试剂测定上清液中HDL-C含量参考区间《中国成人血脂异常防治指南》提出的标准(2007)为:合适范围：≥1.04mmol/L降低：＜0.91mmol/L升高：≥1.55mmol/L临床意义HDL是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白，是冠心病的保护因素，冠心病的发病率与血清HDL水平呈负相关，HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病的危险因素，其增高被认为是冠心病的“负”危险因素HDL-C下降多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化等高TG血症常伴有低HDL-C；肥胖者、吸烟者的HDL-C也常偏低，但饮酒和长期体力活动会使之升高（三）LDL-C测定参考方法超速离心结合沉淀法，称β-定量法（BQ法）。所测定LDL-C实际上包括了Lp(a)和IDL的胆固醇含量。由于此法使用设备昂贵、操作复杂、费时且技术要求高，普通实验室很难开展临床实验室测定方法1.匀相测定法：常规方法2.化学沉淀法：如PVS法（曾作为常规方法）3．Friedewald公式计算法1.匀相测定法原理（1）增溶法(Sol法)1)VLDL、CM和HDL由表面活性剂和糖化合物封闭2)LDL-C+表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O23)H2O2+4-AAP+POD+HSDA→苯醌胺色素（2）表面活性剂法(SUR法)1)VLDL、CM和HDL+表面活性剂Ⅰ+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O2

H2O2+POD→清除H2O2，无色2)LDL-C+表面活性剂Ⅱ+CEH和COD→胆甾烯+H2O23)H2O2+4-AAP+POD+HSDA→苯醌亚胺色素（3）

保护法(PRO)1)LDL+保护剂，保护LDL不被酶反应非LDL-C+CEH和COD→H2O2+过氧化氢酶→H2O2)LDL-C+去保护剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O23)H2O2+4-AAP+POD+HDAOS→显色（4）过氧化氢酶法(CAT法)1)非LDL-C+非离子表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O2

H2O2+过氧化物酶→H2O2)LDL-C+离子型表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O2

过氧化氢酶+NaN3→抑制3)H2O2+4-AAP+POD+HSDA→苯醌亚胺色素2.PVS沉淀法原理

血清中聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚（PVS）选择性地沉淀LDL，离心后上清液中含HDL、VLDL和CM，用胆固醇测定酶试剂分别测定上清液和血清TC含量，二者之差即LDL-C含量

PVS沉淀法是中华医学会推荐的血脂测定方法3.Friedewald公式计算法

单位mg/dl

LDL-C=TC﹣HDL-C﹣TG/5单位mmol/L

LDL-C=TC﹣HDL-C﹣TG/2.2在血清中存在CM、血清TG＞4.25mmol/L(100mg/d1)、血清中存在异常β-脂蛋白、Ⅲ型高脂蛋白血症等脂代谢异常时不宜采用Friedewald公式法计算参考区间《中国成人血脂异常防治指南》(2016)提出的标准为:理想水平：＜2.6mmol/L合适范围：＜3.4mmol/L边缘升高：3.4～4.1mmol/L升高：≥4.1mmol/L临床意义LDL-C增高是动脉粥样硬化发生发展的主要脂类危险因素由于TC水平同时也受HDL-C水平的影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标美国国家胆固醇教育计划成人治疗专业组规定以LDL-C水平作为高脂蛋白血症的治疗决策及其需要达到的治疗目标(四）血清Lp(a)测定Lp(a)因含有独特的载脂蛋白(a)而得名，其脂质组成和结构与LDL极其相似1988年国际Lp(a)专题会议公认Lp(a)为动脉粥样硬化的危险因素，其作为动脉硬化的独立因子日益受到人们的重视测定方法1.以免疫化学原理测定Lp(a)所含Apo(a)，结果以Lp(a)质量表示，也有以Lp(a)颗粒数mmol/L表示的2.测定Lp(a)所含的胆固醇，结果以Lp(a)-C表示目前大都用免疫学方法测定免疫透射比浊法原理血清Lp(a)与试剂中的特异性抗人Lp(a)抗体相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浊度。在波长340nm测出吸光度，浊度高低反映血清标本中Lp(a)的含量

Lp(a)抗原+抗Lp(a)抗体→抗原抗体复合物产生浊度测定340nm吸光度临床意义

Lp(a)的水平与遗传因素有关，与饮食、生活习惯、年龄、性别无关血清Lp(a)为动脉粥样硬化形成有关的独立因子血清中高浓度的Lp(a)是动脉粥样硬化和心脏疾病危险程度的指标研究表明：当胆固醇在正常水平，Lp(a)超过300mg/L时，患心脑血管疾病的危险性比