乙肝五项操作规程

乙肝五项操作规程乙型肝炎表面抗原（HBsAg）操作步骤：配液：配制工作浓度洗涤液（以纯化水做25倍稀释）编号：将样品对应微孔按序编号（共预留阴性对照孔3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔）加样：加入75微升待测样本和阴、阳性对照与反应孔中。温育：用封片纸覆盖反应板后，置37oc温育60分钟。加酶标抗体：取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴性、阳性对照孔中加入50微升酶结合物。微孔振荡器或手工轻轻振荡10秒钟。温育：用封片纸覆盖反应板后，置37oc温育30分钟。洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板机：将孔内液体甩干。选择5次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，用封板纸覆盖反应板后，将反应板放置37oc孵化30分钟。终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。测定：用酶标仪读数，波长450nm。（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm或630相近的波长）若需扣除显色剂空白，则先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。结果判断目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性；无色者为乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性。酶标仪检测：临界值（CUT/OFF）计算：COV:Cut-offValue参考值PC：阳性对照OD值NCx：阴性对照平均OD值。NCx=(NC1+NC2+NC3)÷3检测有效性：NCx≤0.1、PC≥1.0，则检测结果有效。COV=NCx+0.100S：待测样品的OD值，S/COV：待测样本和COV的比值。阳性判定：样品OD值S/COV≥1.0者判定为HBsAg阳性。阴性判定：样品OD值S/COV<1.0者判定为HBsAg阴性。

乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）、操作步骤：配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（20*）用蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。温育：置37oc温育30分钟。洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振匀，37oc避光显色15分钟。终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。测定：用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。结果判断目测：在白色背景下观察核孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗体（抗－HBs）阳性；无色者为乙型肝炎表面抗体（抗－HBs）阴性。酶标仪检测：临界值（CUT/OFF）计算：COV=阴性对照平均OD值×2.1。（阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。阳性判定：样品的OD值大于或等于COV值时，说明HBsAg阳性。阴性判定：样品OD值小于COV值时，说明为HBsAg阴性。

乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）操作步骤：配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）加样：将待测样本用生理盐水1:30稀释。（稀释样本检测结果为临床意义；样本原液加样，检测结果为流行病学意义。用户可根据实际情况选择。）分别在相应孔中加入稀释样本50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。温育：置37oc温育30分钟。洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振匀，37oc避光显色15分钟。终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。测定：用于酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。结果判断目测：在白色背景下观察核孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗体（HBcAb）阳性；无色者为乙型肝炎表面抗体（HBcAb）阴性。酶标仪检测：临界值（CUT/OFF）计算：未稀释样品CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N×0.3。1:30稀释样品CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N×0.5。阳性判定：样品OD值小于COV，说明该样品HBcAb阳性。阴性判定：样品OD值大于或等于COV，说明该样品HBcAb阴性。

乙型肝炎e抗原（HBeAg）操作步骤：配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。温育：置37oc温育30分钟。洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置浸泡30～60秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振匀，37oc避光显色15分钟。终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。测定：用于酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。结果判断目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性；无色者为乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性。酶标仪检测：临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N×2.1。（阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算）阳性判定：样品OD值大于或等于COV值时，说明该样品HBeAg阳性。阴性判定：样品OD值小于COV值时，说明该样品HBeAg阴性。

乙型肝炎e抗体（抗-HBe）操作步骤：配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。温育：置37oc温育30分钟。洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振匀，37oc避光显色15分钟。终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。测定：用于酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm）测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。结果判断目