2024高考生物一轮复习第10单元生物技术实践第32讲微生物的培养与应用教案

PAGEPAGE26第32讲微生物的培育与应用单科命题备考导航核心素养解读命题趋势(1)进行微生物的分别和培育(2)用大肠杆菌为材料进行平面培育,分别菌落(3)测定某种微生物的数量(4)分别土壤中分解尿素的细菌,并进行计数(5)探讨微生物的利用(1)通过以大肠杆菌为材料进行平面培育,驾驭微生物分别、纯化和培育的方法(2)通过选择培育基分别土壤中分解尿素的细菌,驾驭微生物的分别和计数方法(3)通过微生物利用的实例,形成发酵工程利用微生物的特定功能规模化生产对人类有用的产品的观念◆题型内容:考查微生物的计数、分别和纯化培育◆考查形式:以生产生活材料为背景,考查微生物的计数、分别和纯化培育等考点一微生物的培育和分别1.培育基(1)概念:人们依据微生物对养分物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的养分基质。

(2)成分:一般都含有水、碳源、氮源、无机盐,还要满意不同微生物生长对pH、特别养分物质以及氧气的需求。

(3)分类①按物理性质固体②按功能选择培养基2.无菌技术(1)含义:指在培育微生物的操作中,全部防止杂菌污染的方法。

(2)关键:防止外来杂菌的入侵。

(3)无菌技术的主要方法和适用对象项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温柔的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源紫外线消毒法无菌室灭菌剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物,包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培育基及容器的灭菌3.纯化大肠杆菌(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的步骤计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。

(2)纯化大肠杆菌①原理:在培育基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。

②方法:a.平板划线法:通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培育基的表面。

b.稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的浓度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面,进行培育,当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的菌落。

4.菌种的保藏(1)对于频繁运用的菌种,可以采纳临时保藏的方法:固体斜面培育基上4℃保存,菌种易被污染或产生变异。

(2)对于长期保存的菌种,可以采纳甘油管藏的方法:甘油瓶中-20℃在冷冻箱中保藏。

1.培育基配制过程中,先调pH后定容。(✕)2.伊红美蓝培育基是固体、合成、选择培育基。(✕)3.培育基分装到培育皿后才能进行灭菌。(✕)4.消毒的原则是既能杀死材料表面的微生物,又要削减消毒剂对细胞的损害。(√)5.无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培育基、接种环等),都可采纳高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(✕)6.平板划线法中,接种环灼烧后干脆进行划线。(✕)如图是采纳纯化微生物培育的两种接种方法接种后培育的效果图,据图分析下列问题:(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是、。

(2)某同学在纯化土壤中的细菌时,发觉培育基上的菌落连成了一片,最可能的缘由是,为避开此种现象应当实行的措施是

。

(3)在进行培育时,须要将培育皿倒置,缘由是。

(4)用B方法接种时,其次次及其后划线从上次末端起先,目的是。

(5)试验过程中,玻璃器皿和金属用具可以用干热灭菌法灭菌,缘由是。

答案(1)稀释涂布平板法平板划线法(2)菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌(3)使培育基表面水分更好挥发,并防止培育皿盖水珠污染培育基(4)使微生物数目随划线次数增加而削减,以达到分别的效果(5)玻璃器皿和金属用具能耐高温,并且要保持干燥1.培育基的种类、用途及配制原则(1)按物理状态分类培育基种类特点用途液体培育基不加凝固剂工业生产固体培育基加凝固剂(如琼脂)微生物分别、鉴定,活菌计数,菌种保藏半固体培育基视察微生物的运动、分类、鉴定(2)按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培育基培育基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的抗性而设计从众多微生物中分别所需的微生物加入青霉素分别得到酵母菌和霉菌鉴别培育基培育基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培育基中的特定指示剂或化学药品反应,产生明显的特征变更而设计鉴别不同种类的微生物伊红美蓝培育基可以鉴别大肠杆菌2.微生物的纯化培育——平板划线法与稀释涂布平板法方法平板划线法稀释涂布平板法留意事项(1)每一次划线前都须要灼烧接种环灭菌(2)灼烧接种环之后,要冷却后再进行操作,以免温度太高杀死菌种(1)稀释操作时:每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌;(2)涂布平板时:涂布器用体积分数为70%酒精消毒;酒精灯与培育皿距离要合适菌体获得在具有显著的菌落特征的菌落中挑取菌体从相宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体优点可以依据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落,又能对微生物计数缺点不能对微生物计数操作困难,须要涂布多个平板适用范围好氧菌厌氧菌和兼性厌氧菌目的在培育基上形成由单个细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落考向一考查培育基及其制备方法及无菌技术的操作1.下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述,正确的是()选项项目硝化细菌乳酸菌根瘤菌衣藻A能源NH3乳酸N2光能B碳源CO2糖类等糖类等CO2C氮源NH3N2N2NO3D代谢类型自养需氧型异养厌氧型自养需氧型自养需氧型1.答案B从能源来看,乳酸菌和根瘤菌需糖类等有机物供能;从氮源看,乳酸菌须要氨基酸;从代谢类型看,根瘤菌为异养需氧型;从碳源看,硝化细菌与衣藻需CO2,乳酸菌和根瘤菌须要糖类等有机物。2.(2024江苏四市高三3月调研)探讨人员以甘蔗汁为原料,先接种酿酒酵母发酵,将获得的含肯定酒精浓度的发酵液作为果醋发酵培育基,用于探讨醋酸菌的发酵,醋酸不再增加时结束发酵,获得试验结果如图所示,图1表示不同接种量(W/V)发酵的结果,图2表示接种适量醋酸菌种的发酵过程中菌体数量与醋酸产量变更。请分析并回答下列问题: 图1 图2(1)制备培育基时,常在甘蔗汁中添加酵母膏5g/L,这主要是为了给微生物供应等养分,再利用方法进行灭菌后备用。与前期酵母发酵相比,接种醋酸杆菌后进行发酵要调整限制的条件主要有。

(2)分析图1可知,四种接种量中,生产中最相宜的接种量是,缘由主要有。接种量为2%(W/V)时,获得的醋酸产量低的主要缘由是。

(3)分析图2可知,为了了解发酵液中醋酸杆菌的种群数量变更,每天定时利用测定发酵液中菌体数量。发酵120h后,发酵液中醋酸产量增加不显著的主要缘由是。

2.答案(1)氮源、碳源(和无机盐)高压蒸汽灭菌温度和溶解氧(2)6%(W/V)此时产量高、发酵周期短、接种量少、成本低菌体生长消耗的养分物质较多(3)血球计数板(或抽样检测法)发酵液中养分物质的量较少解析据图分析,图1试验的自变量是发酵时间和接种量,因变量是醋酸产量,随着发酵时间的延长,醋酸产量越来越高,最终趋于稳定。(1)制备微生物培育基时,加入的酵母膏可以为微生物供应氮源、碳源(和无机盐);配制好的培育基一般利用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理;醋酸杆菌是好氧菌,其发酵须要供应氧气,且须要相宜的温度条件(30~35℃)。(2)依据题图分析可知,接种量为8%(W/V)和6%(W/V)时,醋酸产生速度都很快,达到最大醋酸产量的时间一样快,考虑到成本等问题,选择6%W/V的接种量最佳。接种量为2%(W/V)时,菌体生长消耗的养分物质较多(或高浓度醋酸会影响醋酸杆菌的细胞代谢),所以获得的醋酸产量低。(3)测定发酵液中的醋酸杆菌的数量应当用血球计数板(或抽样检测法);发酵120h后,发酵液中养分物质的量削减,所以醋酸产量增加不显著。题后悟道·归纳1.培育基的配制原则(1)目的要明确:配制时应依据微生物的种类、培育目的等确定配制的培育基种类。(2)养分要协调:留意各种养分物质的浓度和比例。(3)pH要相宜:细菌为6.5~7.5,放线菌为7.5~8.5,真菌为5.0~6.0,培育不同微生物所需的pH不同。2.微生物对主要养分物质的需求特点(1)自养型微生物所需的主要养分物质是无机盐,碳源可来自大气中的CO2,氮源可由含氮无机盐供应。(2)异养型微生物所需的养分物质主要是有机物,即碳源必需由含碳有机物供应,氮源也主要由有机物供应,部分异养型微生物也可以利用无机氮源。考向二考查微生物的纯化技术3.下面是微生物平板划线示意图,划线的依次为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是()A.在五个区域中划线前后都要对接种环和培育基进行灭菌B.划线操作时完全打开皿盖,划完马上盖上C.接种时不能划破培育基,否则难以达到分别单菌落的目的D.第1区和第5区的划线最终要连接起来,以便比较前后的菌落数3.答案C在每次划线前后都要对接种环进行灭菌;进行划线操作时,左手将培育皿的皿盖打开一条缝隙,右手将冷却后沾有菌种的接种环快速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖;留意接种时不能划破培育基,否则难以达到分别单菌落的目的;第1区和第5区的划线不能相连。4.(2024安徽合肥调研)某同学在做微生物试验时,不当心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起,得到混合菌。请你完成分别得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的试验步骤,并回答有关问题:(1)主要步骤:①制备两种培育基:一种是培育基,另一种加青霉素的培育基。分别分成两份,依次标上A、A'和B、B',备用。

②分别向A、B培育基中接种。

③接种后,放在恒温箱中培育3~4天。④分别从A、B培育基的菌落中挑取生长良好的菌种,接种到A'、B'培育基中。⑤接种后,把A'、B'培育基放入恒温箱中培育3~4天。(2)回答问题:在步骤①中,为保证无杂菌污染,试验中应采纳的主要措施有:对培育基进行、将在酒精灯火焰上灭菌、接种过程在旁边进行。在步骤④中,A培育基上生长良好的菌种是。

第④⑤两个步骤的目的是获得。

4.答案(1)无氮混合菌(2)高压蒸汽灭菌接种环酒精灯火焰圆褐固氮菌纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌解析本题是以微生物分别纯化为背景的一道试验设计题,A、B两组互为比照,A组和B组分别挑取菌落到A'和B'组为微生物的纯化过程,分析试验题过程中应留意把握试验结构:(1)圆褐固氮菌能够固定氮元素,因此培育基中不须要氮元素,青霉素是一种抗生素,能够杀死细菌即圆褐固氮菌,酵母菌是真菌,故能在含有青霉素的培育基上生长,因此A培育基上能够生长的是圆褐固氮菌,B培育基上生长的是酵母菌。(2)微生物的培育与纯化应保证无菌操作;④⑤两步操作为微生物的纯化。考点二微生物的筛选与计数1.土壤中分解尿素的细菌的分别和计数(1)分别原理:土壤中能合成脲酶的细菌才能分解尿素,配制以尿素为唯一氮源的培育基,能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。

(2)试验流程土壤取样(富含有机质)→配制土壤溶液和制备培育基→系列稀释→涂布平板与培育→细菌的计数。

(3)鉴定①原理:细菌分解尿素的反应中,细菌合成脲酶将尿素分解成了氨,其会使培育基中的碱性增加,pH上升。如图:

②方法:在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂培育分解尿素的细菌,假如pH上升,指示剂将变红。

2.分解纤维素的微生物的分别(1)纤维素酶①组成:纤维素酶是一种复合酶,它包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。

②作用(2)菌种筛选①方法:刚果红染色法,即通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。

②原理纤维素分解菌↓刚果红纤维素→红色复合物红色消逝、出现透亮圈③培育基:以纤维素为唯一碳源的选择培育基④筛选流程土壤取样:富含纤维素的环境

↓选择培育:用选择培育基培育,以增加纤维素分解菌的浓度

↓梯度稀释:制备系列稀释液,目的是使纤维素分解菌的细胞分散开,以获得单个的菌落

↓涂布平板:将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上↓选择产生透亮圈的菌落

1.选择培育基可以鉴定某种微生物的种类。(✕)2.从物理性质的角度看,选择培育基多属于固体培育基。(√)3.分解尿素的细菌在分解尿素时,可以将尿素转化为氨,使得培育基的pH降低。(✕)4.在筛选能分解纤维素的细菌的试验中,选择培育的目的是增大样品中目的菌株的浓度。(√)5.刚果红可以与纤维素形成透亮复合物,所以可通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。(✕)6.刚果红染色法只能在培育微生物的时候加入刚果红。(✕)7.分别纤维素分解菌试验中先用选择培育基培育,后用鉴别培育基培育。(√)8.以尿素为唯一氮源的培育基中,尿素可为纤维素分解菌供应碳源。(✕)9.在筛选纤维素分解菌试验中,选择培育用的是选择培育基。(√)请回答以下关于纤维素分解菌的分别与计数过程的问题:(1)该过程中肯定要进行选择培育吗?选择培育的目的是什么?。

(2)接种前如何确定固体培育基是否被污染?。

(3)如何设计试验证明选择培育基有选择作用? 。

(4)在稀释涂布平板法中,推断操作胜利的标准是。

(5)每个稀释浓度涂布三个平板,这一操作遵循了试验的原则,该操作的目的是,设置空白比照的目的是。

答案(1)不肯定。选择培育的目的是增加样品中所需菌种的浓度(2)设置空白培育基,相宜条件下放置一段时间,假如没有菌落出现,则未被污染(3)设置一般培育基(如牛肉膏蛋白胨培育基)为比照,若一般培育基菌落数目多,则说明选择培育基有选择作用(4)有两个或两个以上培育基菌落数目在30~300之间(5)重复解除偶然因素的影响解除非测试因素的影响1.筛选菌株(1)原则:人为供应有利于目的菌生长的条件,同时抑制或阻挡其他微生物的生长。(2)菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物①选择培育基的成分:尿素作为唯一的氮源②鉴定方法:在培育基中加入酚红指示剂,若指示剂变红,pH上升,说明细菌能分解尿素①选择培育基的成分:纤维素作为唯一的碳源②鉴定方法:刚果红染色法,即刚果红与纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,培育基出现以纤维素分解菌为中心的透亮圈2.微生物的计数(1)两种计数方法的比较比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)干脆计数法(显微计数法)原理当样品的稀释度足够高时,培育基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推想出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算肯定容积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌落数:(C÷V)×MC:某稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M:稀释倍数每毫升原液所含细菌数:每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数缺点当两个或多个菌体连一起时,平板上视察到的只是一个菌落不能区分死细胞和活细胞结果比实际值偏小比实际值偏大(2)设置比照和重复比较项目比照重复目的解除非测试因素对试验结果的影响解除偶然因素对试验结果的影响实例空白比照:确定培育基制作是否合格同一稀释度涂布至少3个平板1.下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分别与计数”试验的叙述,错误的是()A.土壤取样时应选取距地表约3~8cm的土壤层B.测定细菌的数量,一般选用104、105和106倍的稀释液C.土壤中能合成脲酶的细菌能分解尿素D.向以尿素为唯一氮源的培育基中加入刚果红溶液可以鉴定出分解尿素的细菌1.答案D鉴定分解尿素的细菌时需向以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂。2.苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,探讨人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如图所示,①为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A.图中②培育目的菌株的选择培育基中应加入苯酚作为碳源B.假如要测定②中活细菌数量,常采纳稀释涂布平板法C.若图中④为比照试验,则其中应以苯酚作为唯一的碳源D.运用平板划线法可以在⑥上获得单菌落2.答案C用苯酚作为选择培育基中的碳源,也是微生物的能源物质,会影响其他微生物生长。测定培育液中细菌数目常采纳稀释涂布平板法。若④为比照试验,则④中应含除苯酚外的其他碳源,⑤以苯酚作为唯一碳源。运用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在⑥上获得单菌落。3.(2024广东惠州高三调研)不同品牌的酸奶具有不同的口味。某探讨小组利用含碳酸钙的固体培育基探究甲、乙两品牌酸奶中乳酸菌的类型是否相同(乳酸能够溶解碳酸钙,使培育基变得透亮)。请回答下列问题:(1)将甲、乙两品牌酸奶中的乳酸菌纯化,分别接种在含碳酸钙的固体培育基中培育,依据菌落四周透亮圈的大小,可确定酸奶中乳酸菌的类型。不同乳酸菌菌落透亮圈大小不同的缘由是 。

(2)家庭制作酸奶时,在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培育技术中的操作,纯牛奶变成酸奶,变更了口味但含有的能量削减,缘由是 。

(3)为长期保存纯化的优质菌,可将菌液与充分混匀,置于-20℃的冷冻箱中保存。

(4)该探讨小组进一步探究甲品牌酸奶中乳酸菌数量,试验操作如上图。接种微生物的方法有很多,图中过程①②③所示的方法为。用该方法统计样本菌落数后,所得数据须要乘以10n后,才可表示乳酸菌的数量(单位:个/mL),这里的n=。用该方法统计样本菌落数时,同时须要做A、B、C三个平板,目的是。假如平板菌落数超过300,一般还需进一步。

3.答案(1)(在相同时间内)不同类型的乳酸菌产生乳酸的量不同,不同量的乳酸能够溶解碳酸钙的量不同,形成的透亮圈大小不同(2)接种乳酸菌在发酵时使牛奶中的养分成分发生变更,乳酸菌细胞呼吸消耗部分有机物,从而使能量削减(3)(灭菌的)甘油(4)稀释涂布平板法6设置重复组,取平均值,使试验结果更加精确牢靠稀释解析(1)(在相同时间内)不同类型的乳酸菌产生乳酸的量不同,不同量的乳酸能够溶解碳酸钙的量不同,形成的透亮圈大小不同。(2)由于酸奶中含有乳酸菌,因此在纯牛奶中加入少量酸奶相当于微生物培育技术中的接种操作,纯牛奶变成酸奶是乳酸菌发酵的结果,乳酸菌在发酵过程中利用牛奶中的养分物质进行代谢,通过细胞呼吸消耗了牛奶中的部分有机物,因此酸奶比纯牛奶中的能量削减了,在乳酸代谢过程中又有新物质的生成,从而使牛奶中的口味发生了变更。(3)菌种保藏分为临时保藏法和甘油管藏法。其中甘油管藏法是用于长期保存的方法。(4)图中①②③所示的方法为稀释涂布平板法。由①②的操作可知这时已对酸奶样品稀释了100倍,②重复3次又稀释了1000倍,从中取出0.1mL进行涂布,所用到的量是原来的10-6倍,因此这里的n=6。进行试验统计数据时,为了使结果更牢靠,一般要遵循重复原则;假如平板菌落数超过300,则说明菌体浓度过大,须要进一步进行稀释加以统计。4.(2024湖南长沙四县高三调研)纤维素酶已被广泛应用于多个领域,如何从生物体内获得纤维素酶已成为一个重要的探讨方向。请回答:(1)目前用于生产纤维素酶的微生物较多的是丝状真菌,尤其是木霉菌。它所含的纤维素酶分解纤维素效果较好,但是提取出来的纤素酶中的活性较低,会导致分解时产生的纤维二糖积累,干脆影响分解效率,因此须要不断改进提取工艺。木霉菌分泌的纤维素酶能降解其体外的纤维素,但是不能降解其自身细胞壁,缘由是其细胞壁的成分。

(2)若要从羊的胃中分别出能分解纤维素的微生物,除了须要打算相应的培育基外,在培育时还要供应(填“有氧”或“无氧”)条件。从羊胃中筛选出的菌株,对其中所产生纤维素酶的测定方法,一般是采纳对纤维素酶分解滤纸等纤维素后产生的进行定量测定。

(3)常用染色法来推断微生物分解纤维素的状况。染色的方法有两种:第一种是先培育微生物,再加入染色剂进行颜色反应;其次种是在时就加入染色剂。第一种方法的优点是显示出的颜色反应可干脆体现纤维素分解菌的作用,但是操作繁杂,加入的染色剂溶液还会使。

(4)到富含纤维素的环境中去找寻分解纤维素的微生物,说明白在自然界找寻各种目的菌株时,遵循的共同原则是依据目的菌株。

4.答案(1)葡萄糖苷酶不含有纤维素(2)无氧葡萄糖(3)刚果红倒平板菌落之间产生混杂(4)对生存环境的要求,到相应的环境中去找寻解析(1)纤维素在C1、CX酶的作用下,会被分解成纤维二糖,葡萄糖苷酶可以把纤维二糖分解成葡萄糖。木霉菌中所含的纤维素酶分解纤维素效果较好,但是提取出来的纤维素酶中的葡萄糖苷酶活性较低,会导致分解时产生的纤维二糖积累。木霉菌的细胞壁不含纤维素,故其分泌的纤维素酶不能分解自身的细胞壁。(2)从土壤中分别的纤维素分解菌是需氧的,而羊的胃中是无氧的环境,故提取的纤维素分解菌是厌氧的,须要在无氧条件下培育。纤维素的分解产物是葡萄糖,故可以通过测定葡萄糖的量来推断纤维素酶的量。(3)推断微生物分解纤维素的状况常用刚果红染色法,刚果红与纤维素会形成红色复合物,但刚果红不和纤维素的分解产物发生这种反应。染色的方法有两种:第一种是先培育微生物,再加入染色剂进行颜色反应;其次种是在倒平板时就加入染色剂。若先培育微生物,再加入染色剂进行颜色反应,显示出的颜色反应可干脆体现纤维素分解菌的作用,但是操作繁杂,加入的染色剂溶液还会使菌落之间产生混杂。(4)找寻各种目的菌株时,遵循的共同原则是依据目的菌株对生存环境的要求,到相应的环境中去找寻。1.(2024江苏,19,2分)下列关于产纤维素酶菌分别及运用的叙述,不合理的是()A.筛选培育基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖供应生长养分B.可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌C.在分别平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的实力D.用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值1.答案A筛选产纤维素酶菌的培育基中应以纤维素为唯一碳源,而不应添加大量的葡萄糖或蔗糖,A错误;富含腐殖质的林下土壤含有大量纤维素,因此可以从中筛选产纤维素酶菌,B正确;在分别平板上长出菌落,只能说明这些菌落具有分解纤维素的实力,但其产纤维素酶的实力的大小须要进一步确定,C正确;农作物秸秆富含纤维素,用产纤维素酶菌发酵处理可以将其中的纤维素分解成葡萄糖,有利于动物利用,该处理可提高农作物秸秆饲用价值,D正确。2.(2024北京理综,3,6分)筛选淀粉分解菌需运用以淀粉为唯一碳源的培育基。接种培育后,若细菌能分解淀粉,培育平板经稀碘液处理,会出现以菌落为中心的透亮圈(如图),试验结果见下表。菌种菌落直径C(mm)透亮圈直径H(mm)H/C细菌Ⅰ5.111.22.2细菌Ⅱ8.113.01.6有关本试验的叙述,错误的是()A.培育基除淀粉外还含有氮源等其他养分物质B.筛选分解淀粉的细菌时,菌液应稀释后涂布C.以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外D.H/C值反映了两种细菌分解淀粉实力的差异2.答案C微生物的培育基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等养分物质,A正确;筛选淀粉分解菌的试验流程为取样→选择培育(可省略此步)→梯度稀释→将样品涂布到鉴别淀粉分解菌的培育基上→选择产生透亮圈的菌落,B正确;细菌Ⅰ、Ⅱ均能将淀粉酶分泌至细胞外,所以出现了以菌落为中心的透亮圈,C错误;H/C值大,说明细菌分解淀粉实力强,D正确。3.(2024课标全国Ⅰ,37,15分)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解,会造成环境污染。某小组用三种培育基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。Ⅰ号培育基:在牛肉膏蛋白胨培育基中加入X(5g/L)。Ⅱ号培育基:氯化钠(5g/L),硝酸铵(3g/L),其他无机盐(适量),X(15g/L)。Ⅲ号培育基:氯化钠(5g/L),硝酸铵(3g/L),其他无机盐(适量),X(45g/L)。回答下列问题。(1)在Ⅰ号培育基中,为微生物供应氮源的是。Ⅱ、Ⅲ号培育基中为微生物供应碳源的有机物是。

(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培育基中,培育一段时间后,不能降解X的细菌比例会,其缘由是 。

(3)Ⅱ号培育基加入琼脂后可以制成固体培育基,若要以该固体培育基培育目标菌并对菌落进行计数,接种时,应采纳的方法是。

(4)假设从Ⅲ号培育基中得到了能高效降解X的细菌,且该菌能将X代谢为丙酮酸,则在有氧条件下,丙酮酸可为该菌的生长供应和。

3.答案(1)牛肉膏、蛋白胨X(2)下降不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖,而能降解X的细菌能够增殖(3)稀释涂布平板法(4)能量合成其他物质的原料解析(1)在Ⅰ号培育基中,牛肉膏、蛋白胨可以为微生物供应氮源,Ⅱ、Ⅲ号培育基中为微生物供应碳源的是有机物X。(2)Ⅱ号培育基中,碳源只有X,不能降解X的细菌会因缺乏碳源而不能增殖,使该类细菌比例降低。(3)利用固体培育基对菌落进行计数时,需采纳稀释涂布平板法进行接种。(4)在有氧条件下,丙酮酸可被分解为CO2和H2O且释放能量,为该菌的生长供应能量和合成其他物质的原料。4.如图是探讨人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图,下列有关叙述错误的是()A.在配制步骤②、③的培育基时,应先调整pH后再进行高压蒸汽灭菌B.步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散,可以获得单细胞菌落C.步骤③采纳涂布平板法接种,并需向牛肉膏蛋白胨培育基中加入尿素D.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种,比较细菌分解尿素的实力4.答案C配制培育基时,应先调整pH后再进行高压蒸汽灭菌,A项正确;步骤③纯化分解尿素细菌的原理是将聚集的细菌分散,获得单细胞菌落,B项正确;步骤③中要想筛选分解尿素的细菌,培育基中应以尿素为唯一氮源,C项错误;步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种,比较细菌分解尿素的实力,D项正确。5.【不定项选择题】漆酶属于木质素降解酶类,在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。如图是分别、纯化和保存漆酶菌株的过程,相关叙述正确的是()A.生活污水中含有大量微生物,是分别产漆酶菌株的首选样品B.筛选培育基中须要加入漆酶的底物,通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C.在涂布平板上长出的菌落,再通过划线进一步纯化D.斜面培育基中含有大量养分物,可在常温下长期保存菌株5.答案BC产漆酶的微生物主要生活在木质素含量较高的环境中,生活污水中含有大量的微生物,不是分别产漆酶菌株的首选样品;筛选产漆酶微生物的培育基中应加入木质素等漆酶降解的底物,因不同菌种的菌落特征不同,故可通过菌落特征选择产漆酶的菌落;由图可知,通过涂布平板法进行初步筛选,再通过平板划线法进一步纯化;微生物长期保存应用甘油管藏法,保存温度为-20℃。6.请依据所学微生物培育与计数的相关学问,回答下列问题。(1)试验室制备牛肉膏蛋白胨培育基时常须要加入作为凝固剂,该培育基在制作过程中常采纳法进行灭菌,在灭菌前常须要调整培育基的。

(2)若要用此培育基对微生物进行计数统计,应采纳法接种;在接种前,随机取灭菌后的空平板在恒温箱中先行培育24h,这样做的目的是。

(3)如表是某同学调查的市面上一种常见的面膜的部分成分,请回答下列问题。类型成分(部分)保湿剂水、甘油、丁二醇、丙二醇防腐剂羟苯甲酯、山梨酸钾、脱氢乙酸钠黏度调整剂卡波姆植物提取物海藻提取物、银耳提取物、马齿苋提取物舒缓成分尿囊素、甘草提取物pH调整成分氢氧化钠、氢氧化钾、氨基酸、乳酸其他香精、尿素、蚕丝胶蛋白羟苯甲酯:广谱抗菌物质,能抑制革兰氏阴性、阳性细菌,对酵母菌及霉菌有较强的抑制作用。①网上流传“面膜等同于细菌培育基”。依据微生物培育的学问并结合该种面膜的组成成分来分析,你认为此说法(合理/不合理),理由是。(答一点即可)

②生活中很多人喜爱利用自然材料干脆替代面膜产品,如黄瓜切片、芦荟切片、鸡蛋清等。结合所学学问对这一行为进行评价并给出你自己的建议: 。

6.答案(1)琼脂高压蒸汽灭菌pH(2)稀释涂布平板检验培育基是否灭菌彻底(3)①不合理面膜的成分中含有防腐剂,能抑制微生物的繁殖②自然材料中不含防腐剂及各种添加剂,值得提倡,但建议敷面膜时间不要过长或者敷完后要刚好清洗干净,否则会引起微生物的繁殖,可能感染皮肤(或自然材料可能引起过敏或细菌生长,不建议采纳,建议选用不易引起过敏或经运用报道平安的自然材料敷面膜等)解析(1)牛肉膏蛋白胨培育基是固体培育基,一般须要加入琼脂作为凝固剂;培育基一般常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌,且要先调整pH后灭菌。(2)微生物常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法,两者都可以分别菌种,且后者还可以对菌种进行计数。在接种前,随机取灭菌后的空平板在恒温箱中先行培育24h,作为空白比照组,检验培育基是否灭菌彻底。(3)①“面膜等同于细菌培育基”这种说法是不合理的,因为面膜的成分中含有防腐剂,能抑制微生物的繁殖。②自然材料中不含防腐剂及各种添加剂,值得提倡,但建议敷面膜时间不要过长或者敷完后要刚好清洗干净,否则会引起微生物的繁殖,可能感染皮肤(或自然材料可能引起过敏或细菌生长,不建议采纳,建议选用不易引起过敏或经运用报道平安的自然材料敷面膜等)。一、单项选择题1.下列有关微生物培育的叙述正确的是()A.通常运用液体培育基分别获得细菌单菌落B.若培育基须要调整pH,应当在灭菌后进行C.用显微镜干脆计数固体培育基中微生物数量D.倒置平板可防止培育基被滴落的冷凝水污染1.答案D常用固体或半固体培育基分别获得细菌单菌落,液体无法分别,A错误;若培育基须要调整pH,应当在灭菌前进行,B错误;显微镜干脆计数是测定培育液中微生物数量的方法,固体培育基上用涂布分别法干脆计数单个菌落数,C错误;平板倒置是为了避开冷凝的液体掉到培育基上,污染培育基,D正确。2.下表为某培育基的配方,下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mLA.从物理性质看该培育基属于液体培育基,从用途看该培育基属于选择培育基B.该培育基中属于碳源的物质主要是葡萄糖,属于氮源的物质是蛋白胨C.该培育基缺少供应生长因子的物质D.该培育基调整合适的pH后就可以接种运用2.答案B分析表中成分可知,该培育基中没有凝固剂,为液体培育基,该培育基的养分成分齐全,但存在伊红、美蓝等鉴别物质,属于鉴别培育基,A项错误;该培育基中的蛋白胨既是唯一的氮源,也是碳源,而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源,B项正确;该培育基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子,C项错误;培育基调整完pH还要进行灭菌等操作后才能运用,D项错误。3.无菌技术包括以下几个方面的叙述,其中正确的是()A.紫外线照耀前,适量喷洒石炭酸等消毒液,可以加强消毒效果B.高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖C.为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.在微生物接种的试验中,用95%酒精对试验者的双手和超净工作台进行消毒3.答案A用紫外线照耀30min,可以杀死物体表面或空气中的微生物,在照耀前,适量喷洒石炭酸等消毒液,可以加强消毒效果,A正确;高压灭菌加热结束时,待压力表指针回到零后,才能开启锅盖,不能打开放气阀使压力表指针回到零,B错误;接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落,C错误;在微生物接种的试验中,一般用75%酒精对试验者的双手进行消毒,用紫外线照耀30min对超净工作台进行灭菌,D错误。4.稀释涂布平板法是微生物培育中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是()A.操作中须要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B.需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培育基表面C.不同浓度的菌液均可在培育基表面形成单个的菌落D.对培育基和涂布器等均需进行严格灭菌处理4.答案C只有菌液稀释到肯定程度后,在固体培育基表面才能形成单个的菌落,否则可能会出现两个或两个以上的细菌共同形成一个菌落,或菌落重叠的现象。5.给无氮培育基接种土壤稀泥浆的正确方法是()A.打开培育皿盖,取一根接种环蘸取少许稀泥浆,轻轻地点接在培育基的表面上B.取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后蘸取少许稀泥浆,略微打开培育皿盖,在培育基的表面轻点C.打开培育皿盖,取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后蘸取少许稀泥浆,在培育基的表面轻点D.略微打开培育皿盖,取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌,冷却后蘸取少许稀泥浆,在培育基的表面轻点5.答案D接种过程中要防止外来杂菌的入侵,左手将培育皿打开一条缝隙,右手将接种环在火焰上灭菌,冷却后蘸取少许稀泥浆,在培育基的表面轻点,用未冷却的接种环沾取稀泥浆会杀灭菌种。6.(2024吉林模拟)下面关于土壤中分解尿素的细菌的分别与计数的叙述中,正确的是()A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.筛选分解尿素的细菌时,应以尿素作为培育基中唯一的养分物质C.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法D.在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂,若指示剂变蓝,则表明筛选到了分解尿素的细菌6.答案A只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,A项正确;筛选分解尿素的细菌的试验中,采纳的是以尿素为唯一氮源的培育基,B项错误;统计样品中的活菌数目一般用涂布平板法,C项错误;在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红指示剂,培育某种细菌后,假如pH上升,指示剂变红,这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素,D项错误。7.某探讨小组从有机废水中分别微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A.灭菌后的培育基要冷却到室温后才能倒平板B.本探讨相宜采纳稀释涂布平板法进行接种C.接种后的培育皿须放在光照培育箱中培育D.培育时要将培育皿倒置是防止空气中杂菌污染7.答案B灭菌后的培育基须要冷却到50℃左右后倒平板,再冷却到室温后将平板倒置保存。稀释涂布平板法可以保证尽可能多地接种各种菌种,有利于筛选,平板划线法接种适于分别纯化微生物,而涂布法适于筛选和计数。从有机废水中分别的微生物属于异养型生物,不须要放在光照培育箱中培育。在培育基保存和培育的过程中,平板都必需保证倒置,以防止培育基中蒸发水分落入培育基造成污染。8.下列是关于“检测土壤中细菌总数”试验操作的叙述,其中错误的是()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基,经高温、高压灭菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL,分别涂布于各组平板上C.将试验组和比照组平板倒置,37℃恒温培育24~48小时D.确定比照组无菌后,选择菌落数在300以上的试验组平板进行计数8.答案D首先要进行培育基的制备,用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培育基,经高温、高压灭菌后倒平板,A正确;取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL,然后将土壤稀释液涂布于各组平板上,B正确;将试验组和比照组平板倒置,37℃恒温培育24~48小时,C正确;确定比照组无菌后,选择菌落数在30~300的进行计数,求其平均值,再通过计算得出土壤中细菌总数,D错误。二、不定项选择题9.下列有关试验操作流程的叙述中,错误的是()A.制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的操作依次为计算→称量→溶化→倒平板→灭菌B.腐乳制作过程可表示为让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制C.制备固定化酵母细胞的步骤是酵母细胞的活化→配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液→配制海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合D.果酒制作的试验流程是选择葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒9.答案AC制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的操作依次为计算→称量→溶化→灭菌→倒平板,A错误;腐乳制作过程可表示为让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制,B正确;制备固定化酵母细胞的步骤是酵母细胞的活化→配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液→配制海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→固定化酵母细胞,C错误;果酒制作的试验流程是选择葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒,D正确。10.细菌须要从外界汲取养分物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列与此有关的说法错误的是()A.乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B.无机氮源不行能作为细菌的能源物质C.琼脂是细菌生长和繁殖中不行缺少的一种物质D.以尿素为唯一氮源的培育基上长出的不都是尿素分解菌10.答案ABC乳酸菌是异养型微生物,须要有机碳源,而硝化细菌是自养型微生物,须要的碳源是CO2,故A项错误;有些无机氮源也可以供应能量,如硝化细菌可以利用氧化氨释放的能量进行有机物的合成,故B项错误;培育基中的琼脂是凝固剂,不会被微生物利用,故C项错误;自生固氮微生物可以利用大气中的N2作为氮源,因此以尿素为唯一氮源的培育基上长出的不都是尿素分解菌,故D项正确。11.(2024山东模拟)生长图形法是一种测定微生物养分需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类,探讨小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需养分物质的培育基混合后倒成平板,然后在平板上划分数区,将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域,培育结果如图所示,下列说法正确的是()A.倒成平板后干脆培育可推断有无污染B.倒成平板后须要进行灭菌处理C.图示结果表明该菌须要生长因子乙或丙D.生长图形法还可用于某些菌种的筛选11.答案AD平板上不含任何生长因子,若倒成平板后干脆培育,出现菌落说明已被杂菌感染,因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培育基中生长,A正确;制备平板时,先灭菌再倒平板,B错误;图中菌落生活在乙丙区域之间,说明同时须要乙和丙,C错误;不同菌种所需生长因子不同,可利用生长图形法筛选菌种,D正确。三、非选择题12.在农业生产探讨上,常须要进行微生物的分别和计数。(1)下表为两种微生物的培育基配方:A组KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gB组纤维素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl酵母膏水解酪素5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g0.5g0.5g注:上述两种培育基中的物质溶解后,均用蒸馏水定容至1000mL。①从功能上来看,上述两种培育基均属于培育基。

②假如要对土壤中分解尿素的细菌进行分别,则须要选择(填“A”或“B”)培育基,该培育基中的碳源是。

③在分别尿素分解菌所用的培育基中可加入指示剂,依据指示剂的颜色可鉴定某种细菌能否分解尿素,若有分解尿素的细菌,培育基将会呈现。

(2)下图是某同学采纳的接种微生物的方法,请回答下列问题:①本试验采纳的接种微生物的方法是法,把聚集的菌种逐步分散到培育基的表面,为达到这一目的,操作上应留意: (至少答2项)。

②三位同学用涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量,在对应稀释倍数为106的培育基中,得到以下统计结果:甲同学涂布了两个平板,统计的菌落数是236和260,取平均值248;乙同学涂布了三个平板,统计的菌落数是210、240和250,取平均值233;丙同学涂布了三个平板,统计的菌落数是21、212和256,取平均值163;在三位同学的统计中,同学的统计结果是正确的。

12.答案(1)①选择②A葡萄糖③酚红红色(2)①平板划线稀释每次划线前要灼烧接种环;冷却后从上一次划线的末端起先划线②乙解析(1)①据题表中的培育基的配方分析可知,A组培育基中的氮源为尿素,是筛选尿素分解菌的选择培育基。B组培育基中的碳源是纤维素,是筛选纤维素分解菌的选择培育基。②对土壤中分解尿素的细菌进行分别时,须要运用以尿素为唯一氮源的选择培育基,故应当选择A组培育基,该培育基中的碳源是葡萄糖。③尿素分解菌可以用酚红指示剂进行鉴定。尿素分解菌产生的脲酶能够将尿素分解为氨而使培育基pH上升,使酚红指示剂呈红色。(2)①据图