医学产淀粉酶芽孢杆菌的筛选专题课件

产淀粉酶芽孢杆菌的筛选淀粉酶的作用及来源目前生产应用的淀粉酶主要来源于微生物，并集中在几种细菌和真菌中，尤其以芽孢杆菌所产的淀粉酶较多。其原因首先芽孢杆菌属(Bacillus)中能产生淀粉酶的菌种较多;其次，芽孢杆菌属产的淀粉酶有较好的应用价值，如凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌产的淀粉酶具有耐热性;再次，芽孢杆菌应用历史悠久，广泛用于饲料添加剂，其安全性有保证。2※实验材料1、实验仪器：磁力搅拌器、水浴锅、移液枪、恒温箱、超净工作台、摇床、涂布棒、接种环、枪头200μL、显微镜、牙签（需灭菌）2、实验试剂：无菌水、淀粉、酵母膏、蛋白胨、MgSO4·7H2O、Na2HPO4、琼脂、卢戈氏碘液、NaCl、碘、碘化钾3※实验方法采用初筛、复筛得到理想的菌种。4※实验步骤1、土样采集从面粉厂附近采集土壤表层土样，去除表层土，在表层土下５到10ｃｍ处取样，用无菌器具采样并装入袋中，记录采样时间，地点，环境等，带回实验室。2、产淀粉酶菌株的初筛（1）称取土样1g，放于300mL无菌水中打散，制成菌悬液，将菌悬液置于80℃水浴20min，梯度稀释至10－5。取200μL10-3、10-4和10－5菌悬液涂布于筛选培养基上，37℃培养48h。（2）根据菌落形态筛选：待长出菌落后，先进行菌落形态观察，有芽孢的细菌往往长出外观粗糙、“干燥”、不透明且表面多褶的菌落。从而去除放线菌、真菌等杂菌的影响。5※实验步骤（3）根据是够产生淀粉水解圈筛选：在菌落周围滴加卢戈氏碘液，观察菌落周围是否出现透明水解圈，（如果担心碘液会将菌种杀死，则采用点种法将菌种接种到另外一个培养基上）并测定菌落及水解圈直径，计算其比值(HC比值)。挑取HC比值较大的8个不同的单菌落，进行斜面培养，作为初筛菌种编号保藏。（斜面培养基依然采用淀粉筛选培养基）6※实验步骤3、产淀粉酶菌株的复筛将初筛得到的8个菌株在筛选培养基上划线分离，37℃培养24~48h，长出单菌落后，选择直径为1mm的单菌落，滴加卢戈氏碘液，观察是否有透明水解圈，选取HC值较大的菌种作为复筛菌株即实验菌株，进行菌种鉴定。4、菌种的鉴定对所筛选的菌种进行革兰氏染色、芽孢染色，通过显微观察及菌落形态进行鉴定，得到最终的目的菌种。具体实验方法参考微生物实验课本。7※菌种保藏5、菌种保藏将初步鉴定好的菌种接种在sday斜面培养基上，在37℃的恒温培养箱中培养，待其长满菌丝后。放在4℃冰箱中进行菌种保藏。8※培养基配方培养基的配方：筛选培养基:淀粉20.0g，酵母膏5.0g，蛋白胨10g，Na2HPO45.0g，MgSO4·7H2O0.1g，NaCl0.1g，琼脂20.0g，水1000mL，pH7.0－7.4。Sday培养基配方：葡萄糖、酵母浸膏、琼脂9※注意事项采样时应该尽可能保持相对无菌。所采集的样本必须具有某种代表性。采好的样必须完整地标上样本的种类及采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等；注意采样的季节性和时间因素；及时处理采好的样，暂时不能处理的应该贮藏4℃下，但贮存时间不宜过长。10※参考文献参考文献：［1］唐丽江，王振华，王迪．高产淀粉酶芽孢杆菌菌株的筛选［J］．安徽农业科学，2009，(12)．［2］张双民．土壤中淀粉酶高产菌株的分离及产酶条件的优化［J］．土壤肥料，2006，(2)．［3］刘雅琴，陈海魁，孔令全．α－淀粉酶产生菌的分离筛选与诱变选育［J］．畜牧与饲料科学，2010，(9)．［4］徐琛．产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离［J］．齐鲁师范学院学报，2011，26(5):144-