DB37T 3531-2019 羊奶中羊、大豆源性成分的定性检测方法 实时荧光PCR法　　

DB37Identificationofcaprine，sheepandReal-timefluorescentPCRmet山东省市场监督管理局发布I 1 1 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 3 4 4 4 4 5 71羊奶中羊、大豆源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法本标准规定了羊奶产品中羊、大豆源性成分的实时荧光定性PCGB/T6682分析实验室用水规格GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测25.2材料103.4KPa蒸汽压（121℃)灭菌20min，降至室温，4℃保存备用。103.4KPa蒸汽压（121℃)灭菌20min，室温保存待用。0.5mol/L乙二胺四乙酸二钠（pH103.4KPa蒸汽压（121℃)灭菌20min，降至室温，4℃保存备用。6.4振荡型恒温金属浴：0℃~100℃。36.6低温冰箱：-20℃~4℃。6.9容量瓶：10mL，50mL，1将样品于4℃、2500g离心30min；弃去离心管的上层乳脂和中间层乳液，保留其底部沉淀，向底部加lmLpH7.4灭菌的PBS缓冲液，将底部沉淀吹打悬浮并转移至1.5mL的离心管中，离心力3500g，源性的特异探针，并加入内标质控体系。反应体系见附录A中表A43000g离心1min，取出PCR9试验数据处理9.2检测结果分析和表述需要加大模板量进行PCR反应。若再次扩增后的5A.1实时荧光定性PCR引物和探针序列CTCTACTCCACCCCCATCCAGAAAGAAGGCAAGCCCATCTGAAGACGAGAAGACCGTATGGAGGATTGCGCTGTTATCCCTAGGACCGTTACCGAGTCCAGGTG5’FAM-CGCCGCTTCCTTCAACTTCACGCGGCG-5’ROX-CCACCAAGGGATAACAACACTCTGGTG5’CY5-CGACGGTCCTTTCTAATGTTGCGTCA.2实时荧光PCR反应体系221-3ng/µL2A.3对各种样品检测结果的判定6+-+未检出大豆源性成分或含-+未检出羊源性成分或含量++检出大豆和羊源性成分未检出大豆和羊源性成分-->35，判定为未检出羊和大豆源性成分。---①如果同时进行的阳性对照实验结果正常，②如果同时进行的阳性对照实验结果不正常，7B.1大豆（Glycinemax）PCR产物序列（GenBank:NM_001354824.1）大豆（Glycinemax）PCR产物序列（GenBank:NM_001354824.1）CTCTACTCCACCCCCATCCACATTTGGGACAAAGAAACCGGTAGCGTTGCCAGCTTCGCCGCTTCCTTCAACTTCACCCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCAGATGGGCTTGCCTTB.2山羊（Caprahircus）PCR产物序列（GenBank:KY52351山羊（Caprahircus）PCR产物序列（GAAGACGAGAAGACCCTATGGAGCTTTAACTAACTAGTCCAAAAGAAATAAATTTAACCACTAAGGGATAACAACATCCTTTAACTAGCAGTTTTGGTTGGGGTGACCTCGGAGAACAAGAGATCCTCCGAGCGATTTTAAAGACTAGACTTACAAGTCAAATCAAATTGCTTATTGATCCAAAAAACTTGATCAACGGAACAAGTTACCCTAGGGATAACAGCGCAATCB.3绵羊（Ovisaries）PCR产物序列（GenBank:KP702285.绵羊（Ovisaries）PCR产物序列（GenBank:KP702AAGACGAGAAGACCCTATGGAGCTTTAACTAAGTAACTCAAGGAAAATAAATTCAACCACCAAGGGATAACAACACTCCTTAGTTAACAGTTTCGGTTGGGGTGACCTCGGAGAACAGAAAATCCTCCGAGCGATTTTAAAGACTAGACTAACAAGTCAAACCAGCTTATTGATCCAAAAACTTGATCAACGGAACAAGTTACCCTAGGGATAACAGCGACCGTTACCGAGTCCAGGTGAGACCACCAAATGCCCCTATCTTATCAACACTTCCGGACGACGGTCCTTTCTAATGTTGCGT