DB21T 3241-2020 玉米转基因成分检测操作技术规程　

1DB21TechnicalspecificationfordetectionofgeneticallymodifiedcomponentsinMaize辽宁省市场监督管理局发布12玉米转基因成分检测操作技术规程SN/T4835实验室生物废弃3DNA提取试剂盒DNAExtractio4.2种子及其加工品4.2.1种子及其加工品抽样时，按照指定区域随机购买产品即可，每份样品抽取量不少于2Kg。4.2.2所需物品：抽样工作单、洁净无污染物的样品袋等。4.2.3抽样工作单根据实际情况，包含以下内容：样品名称、样品编号、商标、型号规格、生产日期生产单位情况（单位名称、通讯地址、联系人、电话）、抽样单位情况（单位名称、联系人、电话、通讯地址）、受检人签字、受检单位负责人签字、受检单位（公章）、抽样人签字、抽样单位（公章）、44.3.2根据实际需要，所需物品如下：GPS定位仪、采样信息表、自封袋、离心管、离心管架、塑料滴管、小烧杯、剪刀、称量纸、试纸条、玻县、乡）、GPS信息、试纸条检测参数及结果、抽样日5.1所送样品按照样品接收所规定的要求执行。玉米样品不能达到规定数量或重量，则应注明不能复检。其它限量时需要的样品数量可以按照农业部6.3样品处理的研磨过程需在负压或局部负压环境下“待检、在检和检毕”。正样和副样应妥善保管，用于复验和复检。57.1试剂包括：DNA提取试剂盒、引物、PCR反应体系相关试剂7.2每批试剂到货后均需进行验证，验证可以使用已知的转基因阳性样品，对新购试剂进行8.1.1DNA提取方法可以选用农业部1485号公告-4-2010中适合的方法进行，也可以选用经过验证的8.1.2样品DNA的提取纯度OD260/OD280值应在1.7～2.0之间，超出范围的应重新进行提取。提取好的DNA按照公式：加水量(µLDNA浓度ng/µL÷25-1）×吸取DNA量(µL稀释至25ng/µL，置于8.2.1试纸条检测可以按照GB/T19495.8转基因产品检测蛋白质检测方法中的方法进行。8.2.2商业化的试纸条在使用前需用已知转基因阳性样品进行验证，合格后再使用。8.2.3叶片进行试纸条检测时，可先将叶片剪成小块，装入离心管中，加入适量纯净水，使用研磨棒8.3.2引物需按现行有效的标准进行8.3.3引物一般采用外协的方式进行合成，应保留委托方提供的引物合成的质量记录，即在每批引物8.4.1PCR扩增体系的配制和DNA样品加入应在不8.4.3玉米样品的PCR扩增参数包括：CaMV35S启动子、NOS终止子、bar或pat基因和玉米内标准8.5.1根据选用参数的扩增片段，选择合适68.5.2配制的琼脂糖凝胶浓度为2%，即每100mL电泳液中加入2g琼脂8.5.4DNA向电泳的正极泳动，点样孔放置于负极方向。8.5.5电源控制在2V/cm～5V/cm9结果判定与复验9.1筛选因子检测结果为阴性的，即可判定为转基因阴性样品。筛选因子检测结果出现一个或多个因9.2复验结果与初检结果一致时，即可确认为阳性结果，并需进一步确认9.3复验结果与初检结果不一致时，需取正样进行第三次复验，9.4根据筛选因子的阳性结果，通过转基因玉米的分子特征，选择相对应的转化体进行确认。常见转基因玉米的分子特征及对应的转基因玉米品种态，样品重量，样品处理方法，样品保管人，申请处理时间，批准人，备注等项目。10.2.2超过保留期的阴性玉米样品，包括正样和副样，按照7进行无害化处理之后按照SN/T4835实验室生物废弃物管理要求进行11.3在进行琼脂糖凝胶电泳时，尽量避免使用EB（溴化乙锭）进行染色，如必需使用时，应将使用后的电泳液进行活性炭吸附过滤，进行无害化处理之后按照SN/T4835实验室生物废弃物管理要求进1CaMV35SNOSCaMV35SpatNOSP-CDPKcry1AbCaMV35SP-PPCcry1AbCaMV35SCaMV35SBarCaMV35SPractI/RuBiSCom-epspsNOSMON810CaMV35Scry1AbMON863CaMV35Scry3Bb1T-hspCaMV35SnptIINOSNK603eCaMV35SCp4-epspsNOSPractI/CTP2Cp4-epspsNOSCaMV35SpatCaMV35SUbiZm1cry1FORF25polyACaMV35SpatCaMV35SUbiZm1cry34Ab1PinIIP-peroxidasecry35Ab1pinIICaMV35SpatCaMV35SMON89034eCaMV35Scry1A.105Hsp17FMV35Scry2AbNOSCaMV35SNptIINOSMON88017CaMV35Scry3Bb1T-hspP-ract1/CTP2Cp4-epspsNOSMIR604Pmicry3ANOSUbiZm1mpiNOSMIR162ZmUbiIntvip3Aa19eCaMV35SZmUbiInt