第四章 抗体课件

第四章抗体学习内容第一节抗体的结构与功能第二节抗体的分类及其生物学功能第三节抗体的基因及表达第四节人工制备抗体学习要点掌握抗体的结构与功能；掌握单克隆抗体与多克隆抗体的特性。

第四章抗体第一节抗体的结构与功能一、抗体概念与分布1.抗体（Antibody，Ab）是机体B细胞在抗原刺激下产生的免疫球蛋白。2.免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。区别：

Ab都是Ig，Ig不一定是Ab。第四章抗体3.抗体分布1体液抗体2亲细胞抗体(体液,尤其是血清中)(细胞表面)第四章抗体二、抗体的基本结构结合抗原之前结合抗原之后TY第四章抗体二、抗体的基本结构第四章抗体V区内氨基酸残基组成和排列顺序极易变化区为高变区（CDR区）。3个高变区即可组成抗原结合区。高变区第四章抗体第四章抗体三、抗体的功能区Ig多肽链折叠后由二硫键连接成的球状结构为其功能区。VH-VL功能区---结合抗原；CH1-CL功能区---遗传标志区CH2功能区---结合补体；CH3功能区---结合某些细胞第四章抗体第二节抗体的分类及其生物学功能抗体的类抗体的亚类抗体的型抗体的亚型

korl一、抗体的类别重链抗原性与分子量铰链区组成和二硫键数目轻链抗原性氢链个别氨基酸第四章抗体抗体的类γ链α链μ链δ链ε链第四章抗体抗体的亚类第四章抗体二、各类抗体的特性与功能1.IgG（1）单体，血清中含量最高，半衰期最长；（2）是抗感染主要抗体，发挥抗细菌、抗毒素、抗病毒

作用。（3）唯一能通过胎盘的抗体，在新生儿抗感染中起作用。第四章抗体

J链膜型IgM,单体，存在B细胞表面，构成BCR。

B细胞膜BCR分泌型IgM(巨球蛋白),

五聚体，分子量最大，存在于血流中。免疫应答中最先出现的抗体，早期抗感染及早期诊断指标。2.IgM第四章抗体3.IgA血清型IgA---单体，分布于血清，主要起免疫调节作用

分泌型IgA(SIgA）---二聚体，分布于外分泌液中，可经初乳传给胎儿。

唾液

眼泪、乳汁

鼻黏膜分泌液

支气管分泌液

生殖道分泌物

前列腺液

小肠黏膜分泌液

SIgA是抗黏膜感染的重要抗体第四章抗体4.IgE（1）单体，最晚产生，主要存在于肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面，又称为亲细胞抗体。（2）介导Ⅰ型超敏反应和抗寄生虫感染。第四章抗体5.IgD（1）血清IgD---单体,血清中含量极低，功能不清。（2）膜型IgD（mIgD）---单体,表达于成熟B细胞表面，与

B细胞成熟有关。

第四章抗体第三节抗体的基因及表达Ig基因库V基因D基因J基因C基因基因定位染色体H链基因库（IGH）96（65）279（6）11（9）14κ链基因库(IGK)90（60）0512λ链基因库(IGL)60（30）077（4）22一、人Ig基因库及基因结构第四章抗体第四章抗体二、抗体的基因重排与表达第四章抗体三、抗体多样性（104）的机理（1）抗体基因库存储大量基因片段；（2）V-J和V-D-J重排时，基因片段进行随机组合；（3）VDJ连接过程中的核苷酸可能发生突变、缺失或插入；（4）L链H链之间随机配对组合；（5）抗原刺激后，B细胞中高频基因突变。第四章抗体第四节人工制备抗体根据制备原理不同分：1多克隆抗体2单克隆抗体PolyclonalantibodyPcAbMonoclonalantibodyMcAb第四章抗体一、PcAb概念抗原免疫动物后，由多个不同Ｂ细胞克隆产生的针对多个不同表位的异质性抗体。B1B2B3B4

Ag2341Ab1Ab2Ab3Ab4第四章抗体二、PcAb的制备---采用免疫动物法免疫原制备

免疫动物（3次）

测定抗体水平

动物采血分离血清

-20℃冻存12341231234B細胞第四章抗体免疫原制备即将抗原与佐剂进行充分研磨乳化。免疫佐剂是增强机体对抗原免疫应答的物质。常用的有氢氧化铝、蜂胶、弗氏佐剂等。第四章抗体Rabbit/2kgBALB/Cmouse/20gRat/200gGuineapigSheep、Goat、Horse免疫动物的选择第四章抗体1.免疫剂量：100-200ug/只2.免疫间隔时间:第一次和第二次间隔10-20d，三次及以后间隔7-10d3.免疫途径:皮内、皮下、肌肉、腹腔、腋窝淋巴结免疫程序第四章抗体三、McAb概念由单个B细胞克隆产生的针对单一抗原表位的同质性抗体。第四章抗体四、单克隆抗体与多克隆抗体特性比较

PcAb

McAb

特异性专一性

免疫动物获得淋巴细胞杂交瘤技术获得产量有限产量无限用于一般免疫诊断鉴别诊断、制备生物导弹治疗及免疫治疗肿瘤、抗原结构分析

第四章抗体五、McAb的制备1975年Kohler和Milstein创立了淋巴细胞杂交瘤技术用于生产McAb。原理:是B细胞是短寿细胞，在体外不能无限制增殖；骨髓瘤细胞可在体外无限增殖，但不能产生Ab。将免疫后具有分泌抗体能力的B细胞与骨髓瘤细胞融合形成B细胞杂交瘤，B细胞杂交瘤经克隆后成为单细胞克隆，则该克隆既可无限生长又可分泌McAb。第四章抗体第四章抗体

免疫BALB/C小鼠培养骨髓瘤细胞（缺乏TK，HGPRT）

收集免疫后B淋巴细胞收集骨髓瘤细胞

PEG细胞融合

HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞筛选分泌抗体的杂交瘤细胞

单克隆化培养（有限稀释法）

获得稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株

McAb的生产（杂交瘤培养上清或诱生腹水）

McAb

纯化及鉴定单克隆抗体的制备程序用已知抗原检测第四章抗体第四章抗体液体石蜡