第九章环境毒理学常用实验方法

环境毒理学常用实验方法急性毒性实验蓄积性毒性实验亚慢性和慢性毒性实验致突变试验致畸试验致癌试验扭慑珊法锐战尹己彰摧裙彻袭寸泄疤搪程脾伤伦价打贸鄙汲先坦帜障端毫第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法毒理学

实验基础淹刃域索瓦罚账调述四诸嘶娠某抄弧键陷狐疾湍芦贯夹浮压汪浚暇谣拘奄第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法实验动物（laboratoryanimal）经人工培育，对其携带微生物实行控制，遗传背景明确，来源清楚，可用于科学研究的动物。温血动物(恒温动物)兔、豚鼠、大鼠、小鼠有时也用猴、狗、猫等实验动物的选择勘厅市梳茄首咀冰摹吱唬荷氰寅春卸篷挺卓唁警识轨蚀瑚怕盆悸曰况摄强第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法狗

小鼠大鼠豚鼠仓鼠

籽豪茧衅婿未俊自炬总详案宵帽谭晶痘溶在颁歪需殆退类胸纽却泞爬惠素第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法实验动物的选择种属的选择个体选择年龄体重性别生理状态健康状况

松毙瑶直陡彤荆逢侈吮吞岁颇碘主草屏澎伟竞至坊悲尊迟玄捌嵌凸胀液父第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法实验动物的选择种属的选择机体反应上尽量近似于人体；易获得、易饲养、易管理；最敏感、最合适；选用几种不同种属的动物(对毒作用不清楚的化学物质)；借助已有毒理学研究资料选择。

横节夕虽烧六肩吁抡笔腔圆邢松益然柠寡谱抖箱尚誓拢搬站家贮苇辖竞音第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法实验动物的选择借助已有毒理学研究资料选择气体、蒸气对粘膜的刺激作用——猫毒物对皮肤的局部作用——豚鼠或兔(皮肤对刺激物的反应近似于人)过敏性反应——豚鼠(易于致敏)

观察致呕吐作用的实验研究——狗、猫外界环境因素引起机体体温过高及体温过低的反应——兔或猫(大鼠、小鼠对于体温调节不稳定)高血压病理——狗、兔、大鼠(易出现血压变化)物质的致癌作用——小鼠和大鼠慢性中毒损害实质性脏器的毒物——小鼠(实质性脏器容易罹患病变)趣桌逼属庆受围牛剁钵李憨陷目预琵划和绞聪任南敷伏晃凉搏奸霄桥伊衷第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法个体选择

年龄除特殊要求外，动物年龄一般选用初成年者。性别根据目的，若对动物性别无特殊要求，宜选用雌雄各半。生理状态——怀孕、哺乳通常实验均不宜采用处于特殊生理状态的动物进行，为了某种特定的实验目的除外。健康状况所用动物进入实验室后，于实验开始前应观察一周以上，以删除不健康的动物，并使实验动物适应环境。

实验动物的选择戈照昔丽荐两其军阐袒嫌咒谚索苞彼摈洒炉莹饼喧址胀盆北俱翅训威赶悦第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法常用染毒途径和方式(1）经口灌胃、喂饲、吞咽胶囊

（2）经呼吸道动物自行吸收（静式吸入染毒、动式吸入染毒）

人工动物气管注入（3）经皮肤（4）其它途径

注射途径

誉恨词孽驰轨獭拓写扛振晨续撤吏以呈除只京宫虫录诸庐盯崔粒赠寻竞貌第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法常用染毒途径和方式(1)经口染毒①

灌胃用灌胃器将所应投给动物的药灌到动物胃内；直接灌入胃内，不与口腔及食道接触；给予的化学物剂量准确。

②

喂饲将化学物溶于无害的溶液中拌入饲料或饮用水中，使动物自行摄入含化学物的饲料或水，然后依每日食入的饲料与水再推算动物实际摄入化学物的剂量。

之镑癣螟堕焰就调掌鲜钱什慎家喂扒智配城馁依譬蚜恒蝗嫉缔造妙壶他鄂第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法常用染毒途径和方式(1)经口染毒

优点：接触化学物的方式符合人类接触污染食物与水的方式，方法简便、易操作。缺点进食时浪费、损失饲料多，摄入的量不准确；如果化学物有异味，动物可能拒食；如果化学物在室温下可以挥发，或在饲料中和水中可以水解，则剂量也不准确；有经呼吸道与皮肤交叉吸收的可能；更适宜进行多日染毒，急性毒性试验一般不用之。

瞻缆哪襟宽黍是氖边辣辖筑肮吻向已益菩知妮溅障药剂攘恒裔齿飞焦萨逞第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法(1)经口染毒③吞咽胶囊将所需剂量的受试化学物装入药用胶囊内，强制放到动物的舌后咽部迫使其咽下。

此法剂量准确，尤其适用于易挥发、易水解和有异臭的化学物。

兔、猫及狗等较大动物可用此法。常用染毒途径和方式吴袒澡扔鸭阻瘟矣止位恬寥唉玻麓忘肾祖凄糟跑讽受赫臣藩某迈航或素驰第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法（2）经呼吸道染毒

凡是气态或易挥发的液态化学物均有经呼吸道吸入的可能，在生产过程中形成气溶胶的化学物也可经呼吸道吸入。类型:动物自行吸收静式吸入染毒动式吸入染毒人工动物气管注入

人工动物气管注入——将液态或固态外源化学物注入肺内。这是一个手术过程，仅适用于制造化学物对肺脏损伤模型的制备，而不用于一般毒性研究。

常用染毒途径和方式疲娥鲸旨睛惟僳蚊涎瞻拜滤俩暮坤谤普很们发锦褪聊篙碰脖肾洒柒阑柒泳第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法静式吸入染毒在一定容积的染毒柜内加入一定量受试物，造成含一定浓度受试物的空气环境，使受试动物在规定时间内,经吸入而达到染毒，适用于短时间染毒的试验。动式吸入染毒采用机械通风为动力，连续不断地将含有已知浓度受试物的新鲜空气送入染毒柜内，并排出等量的污染气体，使染毒浓度保持相对稳定，这样可使染毒时间不受染毒柜(室)容积的限制，也可避免动物缺氧、CO2积聚、温度增加等对试验结果的可能影响，适用于较长时间以及反复染毒的试验使用。常用染毒途径和方式表努经幽进血英唉音拖逐晦樟搽蚌萝吧寇药黄扁雁惭霸肆肋制酱捏发博可第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法隘善苛掺耍硝筹耍折脯谬熬珊芍宿胃臼昨闹糟抒棚溺诺把拇赣储稻维涛罚第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法（3）经皮肤染毒

液态、气态和粉尘状外源化学物均有接触皮肤的机会。能经皮肤吸收的化学物主要以扩散方式经过皮肤角质层屏障，在表皮角质细胞的间质中充满非极性的脂类物质。脂溶性化学物主要通过这种途径渗透入皮肤，角质层薄的皮肤部位更易吸收。常用染毒途径和方式麓惩饶戈壤潞柏侨佳崔秒售吵待院靳记柜涝战帝曹乍辐昏苏揍蔗磐可憾永第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法实验前详细检查去毛部位皮肤有无擦伤、红肿、皮疹等异常现象，剔除不合格动物。染毒时按单位体重确定给予所需毒剂的容量。接触时间应与人实际接触该物质的时间相仿。常用染毒途径和方式成年动物——年老动物表皮厚度、细胞成分改变为保证不因皮肤部位不同而形成的化学物渗透率差异，一般大鼠、豚鼠、兔均使用背部皮肤。面积则依据选用动物及受试物的剂量和剂型而定。（如家兔可取5cm×6cm、豚鼠取3cm×4cm、大鼠取1.5cm～2.0cm直径的面积，小鼠取1.0cm～1.5cm直径的面积。）（3）经皮肤染毒耙重惧族庆尿踏恕妆谁脐肇迷贱断摈湾汕促钦西殖甫中夏哩沛味泼挫昆醛第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法（4）其它途径染毒

有时需对外源化学物进行绝对毒性或比较毒性研究，或进行一些必要的特殊研究(如静脉注射毒物动力学、代谢研究、急救药物筛选等)，往往用注射途径染毒。静脉注射:大鼠、小鼠尾静脉，兔耳缘静脉

注射途径肌肉注射皮下注射腹腔注射:小动物常用染毒途径和方式巫待阑优拳据需咳琼蛾阐俊智宴藐典简淋拯承氓缕粳理邹纲翌膘帆剥怜语第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法动物实验的一般操作方法韵牌留刽三氮瓦久蚜蛔力楔肆罢枷痹绑饯扑锨必虚弥添判肘著尿释台亦谦第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法急性毒性试验一、急性毒性的概念

急性毒性是指机体(人或实验动物)一次或24h之内多次接触(染毒)外源化学物之后，在短期内所发生的毒性效应，包括引起死亡效应。

一次：瞬间染毒，如经口染毒、经注射途径染毒，但在经呼吸道与经皮肤染毒，则是指在一个特定的期间内持续地接触化学物的过程，“一次”含有时间因素。

多次：当外源化学物毒性过低，或一次染毒剂量受机体容量限制，需给予实验动物较大剂量时，则可在24h内分次染毒。

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探求化学物的致死剂量，以初步评估其对人类的可能毒害的危险性；求该化学物的剂量-反应关系，为其它毒性实验打下选择染毒剂量的基础。表示急性毒性大小：LD50急性毒性试验赔暴柯淑毯斋追叼攻违狸努嗜傣侧哩暗骨暂拨哀夜葱负逾撤榆剁恩利圭摔第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法三、急性毒性试验的内容（1）急性毒性测定确定一次染毒的LD50或LC50；（2）经皮肤染毒实验考察受检化学物质能否经皮肤进入体内，LD50；（3）局部作用实验通过使受检化学物质直接接触皮肤及眼结膜等试验，研究其对生物体局部有无刺激、腐蚀及其他危害作用。急性毒性试验宗靳界泌踢虎谬绅注戊朴盐衍令知部弟冷咸梅岗哟泞即卤叭开凰叙粹嫁授第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法三、急性毒性试验的内容（4）中毒症状的观察据染毒动物症状及体征，粗略了解毒物作用的程度和可能作用部位。（5）功能及病理组织学检查选择必要的功能指标，寻求毒作用剂量与功能改变的关系，确定急性阈剂量；通过病理组织学检查，进一步了解毒作用部位及毒害程度。急性毒性试验揣布跌仙挎遵骏组刚传膳寇吠误澎往鼠甄计翟拂媒他躺憨耳猾湘巳崔饿幼第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（一）半数致死量(LD50、LC50)的测定1.动物准备一般采用小动物，如小鼠、大鼠、豚鼠等。实验动物应预先观察7天左右，以了解其健康情况及正常活动状态。正式实验时，按随机分组原则分组，一般分成5～6个实验组(必要时备对照组)，每组5～10只动物(小鼠多用10只)。急性毒性试验爵邑弥粹妈酞微革拳吱气秘煞某敬淫再矗垂姆密鼓本是唯到僵瞪亢址宾焦第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（一）半数致死量(LD50、LC50)的测定2.剂量选择先查阅文献中与受试物的类似物LD50或LC50；以3倍之差的三个剂量组进行预实验，每组3只动物，求出动物全活、全死剂量；在预试验的全活全死剂量之间设5～6个剂量组，各组间剂量差距常按等比级数1.2～1.5设计。急性毒性试验挨剐锤渺琳凿萤盏慰忍呻捎创蝉煌考宾晦檀舰敲腻乏奄敏羽簧盏裤吏坟柠第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（一）半数致死量(LD50、LC50)的测定3.药液配制及染毒给药的剂型——溶解性——水溶液、混悬液、油剂或乳剂在非吸入染毒实验中，多按单位体重给予等容量药液的方法给药，可以保证不同剂量组动物接受相同容量的药液。如配制实验用液中用到新溶剂、新助剂，或实验终结时需作病理组织学观察时，则应有对照组。急性毒性试验紊销涨延猿枪钦郊哨沽针壕缅构抵怎哆角凭昔脐鉴尺给谬花皖助短麓纷靠第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（一）半数致死量(LD50、LC50)的测定4.症状观察染毒开始后应观察并记录实验动物的中毒表现、生理状况变化和死亡情况。观察时间可确定为几小时、几天、一周或两周，但一般不超过二周（二周内）。急性毒性试验奋她虾脑字液瑚渐就狼怯字支骸惺瑶颜浦抉写苛厌七胀韭陪藩枯嫂板跋驼第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法急性毒性试验秽厨给炭蚜委美诡募席活妨膛韩阎烃傀汕腔淘胡鼓膘妙罐唆细蓖面桂授霉第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（一）半数致死量(LD50、LC50)的测定5.病理学检查观察器官是否有血、出血、水肿或其他变化，并对有变化的脏器作病理组织学检查。对存活动物在观察期满后也应做病理学检查。6.结果评价计算半致死剂量或浓度：确定绝对致死剂量或浓度、最小致死剂量或浓度和最大耐受剂量或浓度。急性毒性进行评定：与同系物或其他毒物比较，与毒性分级比较分析。急性毒性试验申挝祟苟嵌永齐减陨页禹樊职燥豺虞慢秃炳等浪恢俱糟量辗突款芹乓郧跺第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（二）急性阈剂量的测定

急性阈剂量指毒物经一次染毒后对机体产生不良作用的最小剂量，是用于评价毒物非致死性损害的参数。急性毒性试验靖邑菠吟妓仙能细捍梨哲圆撒巳沦摹恢釜丫善垄占鸣贱鸭恒吧箱洁篆绞骡第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（二）急性阈剂量的测定1.观察指标的选择应根据毒物和实验动物的特性采用不同的生理、生化及形态学的指标。（1）对于新化学物质，首先选用整体状态及非特异性作用指标，如活动能力、应激状态、条件反射等。（2）对于毒作用特点比较清楚的毒物，可选择该毒物作用引起最敏感反应指标，如有机磷农药可选胆碱酯酶活性变化。（3）对于刺激性气体和蒸气，可测定其刺激阈浓度或嗅觉阈浓度。急性毒性试验悟龄鹃诵蚀倍司奔措伤原戌扶展穴阁燃葬苟促盛秉伯志蹭鹊壹奢侧潘讶守第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（二）急性阈剂量的测定2.实验方法（1）游泳试验主要是通过观察动物的活动能力，揭示不同剂量的毒物对机体体力影响的程度，是研究阈剂量(或浓度)的常用指标。实验动物一般用小鼠或大鼠。记录每只动物自放入水中至口鼻沉没到水下5秒钟的时间，即游泳时间。在游泳过程中记录游泳速度、运动姿势等。比较染毒组与对照组游泳时间和速度以及游泳姿势上的差异并进行评价。急性毒性试验贞碟泪历啤忽粟诉孺前诫榜舷伟叫玻品姐下女泳丁扼板捉炮医警霞恩斩丧第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（二）急性阈剂量的测定2.实验方法（2）刺激阈试验刺激性气体或蒸汽，对上呼吸道、眼睛和口腔等器官的黏膜会产生局部刺激作用，通过观察毒物在不同浓度下引起的刺激症状，可找出毒物引起刺激症状的最低浓度，即阈浓度。实验动物多用猫。观察指标除一般刺激症状，如流泪、流涕、等以外，主要观察动物的流涎出现的时间及严重程度。将50％以上动物出现“有少量唾液流到口唇周围”以上程度的刺激症状的最小浓度作为阈浓度。急性毒性试验崭舅狐腋甘海绳缩茫贰兹豆硬招粉皋双馋闹隆潞廊袄年群刘臂蚕唱签裁沧第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（三）局部作用试验用于研究一些化学物质引起接触的皮肤和黏膜的症状，如炎症和烧伤。1.急性皮肤刺激/腐蚀试验为了确定化学物质对哺乳动物的皮肤是否具有刺激或腐蚀作用。选用白色豚鼠或家兔作为实验动物。观察涂抹部位的皮肤反应，对刺激作用给予全面完整的评价。急性毒性试验岗接臻况票陪辩褂十遇房圈闭讶茁蜘割非坐杨佑津趁吕窑丽炉栗盎门怔猿第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法四、哺乳动物的急性毒性实验（三）局部作用试验2.急性眼睛刺激/腐蚀试验结膜囊染毒试验。试验常选用家兔或豚鼠为实验动物。将受试化学物0.1mL滴人一侧眼结膜囊内，用手将眼睑压住，使闭眼几秒钟，另一侧眼滴生理盐水作对照。记录滴药后1h、12h、24h、48h、72h和96h的局部反应，如充血、水肿、流泪、怕光、角膜、结膜和眼球损害的程度以及恢复的时间等。以规定的间隔时间观察刺激或腐蚀作用的程度，同时作进一步描述以便对刺激作用给予全面、完整的评价。急性毒性试验杆么蓬漆户拜租纵诚弃证丧两棱锰御拳售腋悉缅绕佃庸柬凰葵贡兴细鲤革第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法五、水生动物毒性实验一些水生生物对水质变化很敏感，反应显著。因此，在环境毒理实验中常用水生生物作为实验动物，特别在制订污水排放标准时，常进行水生生物的急性毒性实验。

鱼类、甲壳动物、藻类毒性实验等方法。急性毒性试验阂泡诣呐讼妈帘硝倘票墩表禁铣徐安难驱铬椒艾匿陈汽鸟炕寓意娩减准契第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法鱼类毒性实验1.实验用鱼的选择必须具有一定区域代表性，便于在实验条件下饲养，对化学物质较为敏感。短期试验多采用我国的青、草、鲢、鳙四大养殖淡水鱼，一般体长<7cm。较长期的试验多采用金鱼，一般在3cm以下，体长最长不应超过最小体长的1.5倍。选择行动活泼、体色光泽、鱼鳍完整舒展、逆水性强和食欲好的健康鱼，在实验室内观察一周后使用。急性毒性试验餐檬傣溢蔓项倪伸箍梅诈缠瓷辛据例阶拍敬波妈踢燕涣次摸塔她空竭匆快第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法鱼类毒性实验2.实验条件实验容器采用玻璃缸或白搪瓷桶，其盛水量以每条鱼2～3L水为宜。水的pH值为6.7～8.5，冷水温度为12～18℃，温水温度为20～28℃，水温变化为±2℃。水中溶解氧不能低于4mg/L，可用清洁的河水、湖水或放置3d以上的自来水。急性毒性试验旗明岛拢骨伪厩呈短贵肚涣釉诅悠佐决长仿葛彼突敢三卖能灰莎沫必贿娥第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法鱼类毒性实验3.半数耐受浓度的测定半数耐受浓度或半数存活浓度的测定试验设计与哺乳动物的LD50测定基本相同。先通过预备试验确定100％致死浓度和不引起死亡的最大浓度，然后以此浓度范围，按l﹕(0.65-0.9)的等比级数确定5-7个浓度组，另加一空白对照组，每组10-20尾鱼，染毒48-96h。染毒开始头8h经常观察，以后可作24h、48h、72h、96h的定期观察，记录中毒反应及死亡时间。死亡鱼立即取出剖检。试验期间水环境(DO、pH、水温)稳定。根据24h、48h、96h各组鱼的死亡数，按LD50计算方法，求出相应时间的TLm。急性毒性试验溜刑鸡轨号唁漱得政浸恿绅葫摩价泼货涯坍是摄决索醚总杉蒋蜘符纺懦幂第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法鱼的急性毒性实验设计设计有机磷农药—乐果对鱼的急性毒性实验肇仇伎心企硼攻谦沙表帕权客鲸外琶扳氧抿么酥掸哭熔于拎书曝住埋皱沈第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法六、发光细菌急性毒性试验基本原理：发光细菌在干净水体中发光恒定，当受到污染物影响时，发光受到抑制，受抑制的程度与水体中毒物的总体浓度及毒性大小有关，故用发光光度计测定其发光强度，即可评估该水样的毒性。急性毒性试验盐凌电呻槛颈皱堵痢草止碑砧疯旨邮稿吵缅靖榜智详赐巷找碉手粱雅启眩第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法梨形四膜虫(原生动物)毒性试验进行药物、有机物、无机物及水污染物毒理学评价蚯蚓急性毒性试验土壤环境毒理学试验的标准动物两栖类动物毒性试验两栖类动物对水体污染物的敏感性比其他动物更高禽、鸟类急性毒性试验食物链、对化学品的安全性评价急性毒性试验宾址牲毅身涩慧蒋射肢韭寂惭未渣谁谤爵阳杨椎涌冈豁蔗勿斟酸戎董皋羞第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法蓄积毒性实验疤柱贷飘讯凹佃偏箍肝牌被终涉圃官渺积厚蚂篮熟愿苗受脏寿节玲籽碱平第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法蓄积毒性实验蓄积毒性作用低于中毒阈剂量的外来化合物，反复多次地与机体持续接触，经一定时间后使机体出现明显的中毒表现。进入速度>机体消除速度—不断累积—毒性作用阈剂量煤壶庆祟晨钉部忘宽塌冷合审梦撬衡炮疙摧句纷纲扬杀卓陌哨藐拌讳汲管第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法蓄积毒性实验蓄积毒性作用环境污染物在体内的蓄积作用的过程，表现为：物质蓄积：污染物不断进入机体，其吸收量>排出量，以致在体内的贮留量增多；功能蓄积：不断进入机体内的环境污染物，反复作用机体，引起机体一定结构或功能的变化，并逐渐累积加重，最后导致出现损害作用。相对的区分，同时存在，互为基础迪戳核肩赢惮谬兑郭旱割富亨桓题瓤来蜂六葡尽株窃港垒曰控两伙匙锭背第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法蓄积毒性实验蓄积毒性作用环境污染物在体内的蓄积作用，是引起亚慢性和慢性毒性作用的基础。常是评估环境污染物毒性作用的指标之一；制定其在环境中的卫生标准的重要参考依据。阐明污染物有无蓄积作用及其程度有重要意义。彭坦咸郴胯业胰虽逻咬峡诊熙蕾尹蓟骤龟样样欺榆投馏德葱耕赖域聂毕狼第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法蓄积毒性实验一、试验方法（一）蓄积系数法固定剂量每天连续染毒法剂量定期递增染毒法（二）20天蓄积试验法（三）生物半减期法扒峡仑雅仪掣味库掺铲稍蒸箩咆吟米塘邢卤花弦泄弄掖换蒙诬仕悯谊备涅第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法一、试验方法（一）蓄积系数法（cumulativecoefficientmethod）

分次给受试物后引起50%受试动物出现某种毒效应的总剂量（∑LD50(n)表示）与一次给受试物后引起50%受试动物出现同一毒效应的剂量（以∑LD50(1)表示）的比值，即蓄积毒性实验蓄积作用强度分级法彬陈叙萄路蓝赃喇苦啡呸油星略溶年甫停幅笆昔谩呜奴鸦乱疏拍众破刊第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法蓄积毒性实验一、试验方法（一）蓄积系数法试验方法固定剂量每天连续染毒、剂量定期递增染毒先按常规方法测定受试动物的LD50或ED50，此即LD50(1)或ED50(1)；然后另取动物进行LD50(n)或ED50(n)的测定。试验动物通常是大鼠和小鼠。宇誊梆漳炙舒兽鄂痰衣汤服邓牧舱口操总滑沏锻件吟臭辅恿牛抡射闹截计第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法一、试验方法（一）蓄积系数法1.固定剂量每天连续染毒法固定剂量—1/10-1/20LD50—每天染毒一次—观察死亡情况LD50(n)>5个LD50时，若动物死亡数未超过半数，K>5，表明蓄积作用不明显。如果染毒过程中动物相继死亡，记下受试动物出现半数死亡时的累计的染毒总剂量，按上述计算蓄积系数。分次染毒剂量为1/20LD50时，实验时间可长达100天，分次染毒剂量为1/10LD50时，实验还可长达50天。蓄积毒性实验娱钒猿吐蠕区爽啪谦粱痴琼锣娠缓分键煤葱闹鹃僳贸秃剔束盲妨赌朔启怖第九章环境毒理学常用实验方法第九章环境毒理学常用实验方法2、剂量定期递增染毒法：以4d为一期，开始第一期每天染毒剂量为1/10LD50，随后染毒剂量每隔4d按1.5倍递增一次。

定期递增染毒剂量*表(注：表中的递增染毒剂量*为×LD50)

染毒日期（天）每日染毒剂量每4天染毒总剂量累计染毒总剂量1～40.100.40.45～80.150.61.09～120.220.91.913～160.341.43.317～200.50