《药物分析与检验技术》课件-无菌检查

无菌检查法药典规定凡是直接进入人体血液循环系统、皮下组织、肌肉或者作用于烧（烫）伤、溃疡等部位的药品或要求无菌的材料，必须进行【无菌检查】。制剂包括各种注射剂、眼用及外伤用制剂、植入剂、可吸收的止血剂等。无菌检查法系用于检査药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法，可用于判断供试品是否被微生物污染。常用的无菌检查方法将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性对照试验的结果，判断供试品是否染菌。包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法。一、培养基的种类硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、中和或灭活用培养基、0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）、酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基。7种硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养。胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。一、培养基的种类二、培养基的适用性检查（一）无菌性检查每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，

应无菌生长。（二）灵敏度检查用以证明在作无菌检查时，所加的菌种能够在培养基中生长良好。菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白念珠菌和黑曲霉。三、方法适用性试验确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查，排除供试品是否具有抑细菌和抑真菌作用，避免假阴性结果。操作方法包括薄膜过滤法和直接接种法。结果判断：与对照管比较

如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计；

如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，需消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法适用性试验。消除供试品抑菌作用的方法：增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等。四、无菌检查法（一）检验数量及检验量“批出厂产品及生物制品的原液和半成品最少检验数量表”“上市抽验样品的最少检验数量表”“供试品的最少检验量表”四、无菌检查法（二）对照试验1阳性对照：应根据供试品特性选择阳性对照菌。阳性对照管培养72小时内应生长良好。阳性对照试验用以证明微生物确实可在应用的试验条件下生长。

阳性对照试验用于确认试验结果是否为假阴性。四、无菌检查法（二）对照试验不同特性的供试品阳性对照菌无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主金黄色葡萄球菌抗革兰氏阴性菌为主大肠埃希菌抗厌氧菌的供试品生孢梭菌抗真菌的供试品白色念珠菌四、无菌检查法（二）对照试验2阴性对照：阴性对照试验用于确认试验结果是否为假阳性。也就是确认无菌试验的环境、无菌操作及试验相关材料的无菌性，且对微生物生长及存活无影响。阴性对照不得有菌生长。四、无菌检查法（二）对照试验反复使用全封闭式薄膜过滤器薄膜过滤器（三联不带泵）四、无菌检查法（二）对照试验3检查方法：无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。薄膜过滤法直接接种法四、无菌检查法（二）对照试验薄膜过滤法开放式薄膜过滤法操作四、无菌检查法（二）对照试验薄膜过滤法开放式薄膜过滤法操作四、无菌检查法（二）对照试验直接接种法培养及观察培养基按规定的温度，培养14日逐日观察并记录新鲜培养物或划线接种培养培养液涂片，染色，镜检判断是否有菌浑浊五、无菌检查法结果判断1阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。2若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。3若供试