蔬菜、水果农药残留快速检测操作指南

PAGE15-附1：扬州市蔬菜、水果农药残留快速检测操作指南（试行2011）本指南仅适用于蔬菜、水果有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测。一、抽样及预处理1、抽样同一批次同一品种随机抽取适量样品作为检样，其中叶菜类取不同植株叶片（至少8片～10片叶子）为样本，瓜果类、根类、茎类从表皮至果肉1厘米～1.5厘米处取样。一份检验，一份备查。2、预处理（1）、检样应做好标记，并及时记录；（2）、取待检样，擦净表面泥土，切或剪成1厘米左右碎片。二、检测方法——丁酰胆碱酯酶抑制率法或乙酰胆碱酯酶抑制率法1、试剂、器具及仪器（1）缓冲液、显色剂、底物、丁酰胆碱酯酶等试剂按说明书的要求进行配置和贮存。（2）样品杯、试管、滴管、洗瓶、移液枪或移液管、不锈钢剪刀、比色皿、擦镜纸。（3）农药残留快速检测仪。（4）天平或台秤（精确度0.1g）。（5）冰箱。（6）恒温装置按仪器使用说明书要求配备。2、仪器性能（1）稳定性：仪器预热10分钟后，数字显示值漂移在3分钟内不超过0.04(V)。（2）透射比准确度:±1.0%。（3）工作环境温度:5～40℃。（4）测定精度：≤5%。（5）检测通道：8通道。（6）测量范围：0.00%～100.00%（抑制率）。（7）检出下限：0.1～3.0mg/kg。（8）检测时间：30分钟以内（含前处理）。3、操作步骤（1）开机后设置或检查仪器工作（显色反应时间3分钟），并校准预热仪器。（2）称取处理好的2g（非叶菜类称取4g）样品放入样品杯中，加入20mL缓冲液，振荡1~2分钟进行提取，静置3~5分钟后取出上清液待用。（3）空白对照：在小试管内加入50uL酶液、3mL缓冲液、50uL显色剂，于37~38℃下放置30分钟后再加入50uL底物，立即倒入比色皿中上机测试。（4）样品测试：在小试管内加入50uL酶液、3mL样品提取液、50uL显色剂，于37~38℃下放置30分钟后加入50uL底物，立即倒入比色皿中上机测试。（5）3分钟显色反应后仪器自动显示或打印酶抑制率，同一条件下应作一个空白对照。4、结果判定当样品提取液对酶的抑制率小于说明书规定值时，样品为阴性结果；当样品提取液对酶的抑制率大于或等于说明书规定值时，样品为阳性结果，表示产品中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在。阳性结果的样品应重复检测2次以上。5、注意事项（2）试剂切勿冷冻至结冰，使用前请摇晃均匀。用完再取，应防止其它物质的污染，未用完的试剂可放在清洗干净的瓶中并用封口膜封口，在0℃～4℃环境条件下保存。（3）葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。样品不宜剪切过碎，浸提时间不宜过长，以免渗出叶绿素等物质，影响显色结果。

附2：扬州市食用菌中荧光增白剂快速检测操作指南（试行2011）1、抽样随机抽取同一批次同一品种鲜食用菌或干食用菌适量作为检样，并用不含荧光物质的包装材料盛装样品，及时检测。2、试剂、器具及仪器（1）台式紫外分析仪：具备254纳米和365纳米的紫外光；（2）数码照相机；（3）培养皿。3、操作步骤（1）戴上一次性手套，除去食用菌外包装，将菌形完整的样品放入洁净的培养皿中，再将培养皿摆放在铺有深色绒布的紫外分析仪台面上，在避光的条件下打开254纳米和365纳米的紫外灯，观察样品表面是否有可见的紫色或蓝紫色荧光。（2）必要时可用数码相机记录下样品在紫外灯下的真实影像。4、结果判定在254纳米和365纳米的紫外光下，样品表面无可见的紫色或蓝紫色荧光，样品为阴性结果；如果样品表面有可见紫色或蓝紫色荧光，则判定该样品含有荧光物质，样品为阳性结果。阳性结果的样品应重复检测2次以上。5、注意事项（1）抽取样品时，须戴一次性手套（不含荧光增白剂），每抽取一个样品，须更换一次性手套，避免样品产生交叉污染。（2）应用不含荧光物质的包装材料盛装样品，以免污染样品。（3）对某些采用荧光增白剂处理过的包装纸包装的食用菌，易造成污染，因此须除去所有沾在食用菌上的小纸屑，以免由于纸屑产生的荧光而影响对样品检测结果的判断。

附3：扬州市畜产品（尿样）中瘦肉精快速检测操作指南（试行2011）本指南仅适用于畜产品（尿样）中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇残留量的快速检测。一、抽样及预处理1、抽样用干燥、洁净的离心管或适当容器采集50mL左右尿液。如果不立即检测，尿样在2-8℃冷藏可保存24小时，要注意避免腐败造成失效或污染。2、预处理（1）检样应做好标记，并及时记录；（2）检测前将样品溶液恢复至室温。二、检测方法——快速检测试剂卡法1、试剂、器具及仪器（1）快速检测试剂卡。（2）冰箱。（3）一次性吸管。（4）离心管或样品瓶。2、试剂卡技术指标（1）盐酸克伦特罗、莱克多巴胺检测下限为3ng/mL，沙丁胺醇检测下限为5ng/mL。（2）不同浓度下检测线的梯度显著。（3）平行样的重现性好，基本无差异。（4）检测时间在5分钟以内。（5）必须设立质量控制线。（6）检测结果显示在30分钟之内无原则性改变。（7）保质期2年。3、操作步骤（1）测试前将未开封的检测卡及尿样恢复至室温。（2）从原包装中取出检测卡，打开后应在一个小时内尽快地使用。（3）将检测卡平放，用一次性吸管吸取待检样品溶液，垂直滴加3滴于加样孔中，加样后开始计时。（4）反应3～5分钟后观察结果，30分钟后的结果无效。4、结果判定当C线显色，而T线不显色时判为阳性；当C线显色，同时T线也显色时判为阴性；当C线不显色时，则无论T线显色与否，该试剂卡判为无效。阳性结果的样品应重复检测2次以上。5、注意事项（1）检测卡在室温下一次性使用，注意未使用产品的防潮保护，确保封口的紧密度，否则会产生错误或者不确定的结果。（2）自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性结果。若需直接检测标准品，请用阴性猪尿溶液进行配制。（3）滴加样品的过程在一定程度上影响产品的有效判断，因此，请务必严谨操作，滴加样液速度均匀。（4）一次性吸管不可混用，以免交叉污染。（5）检测时避免阳光直射和空调、风扇直吹。（6）阳性样品应重复检测2次以上。

附4：扬州市水产品中孔雀石绿及结晶紫快速检测操作指南（试行2011）本指南仅适用于水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫残留量的快速检测。一、抽样及预处理1、抽样同一批次同一品种随机抽取适量样品作为检样，具体数量视品种而定。实际操作中需根据所取样品的个体大小，在保证最终检样量的基础上，抽取样品。2、预处理（1）鱼类：清洗后，去头、骨、内脏，取肌肉等可食部分绞碎混合均匀后备用，试样量为100g。（2）虾类：清洗后，去虾头、虾皮、肠腺，得到整条虾肉绞碎混合均匀后备用，试样量为100g。（3）蟹类：清洗后，取可食部分(肉及性腺)，绞碎混合均匀后备用，试样量为100g。（4）龟鳖类产品：清洗后，取可食部分，绞碎混合均匀后备用，试样量为100g。二、检测方法——快速检测试剂盒法1、试剂、器具及仪器（1）试剂按说明书的要求进行配置和贮存。（2）快速检测试剂盒。（3）天平或台秤（精确度0.1g）。（4）冰箱。（5）洗耳球、不锈钢剪刀、食品搅拌机。2、试剂盒技术指标（1）检测下限为1ug/kg。（2）可进行多残留分析。（3）平行样的重现性好，基本无差异。（4）检测时间在60分钟以内（含前处理）。（5）检测结果显示在30分钟之内无原则性改变。（6）保质期1年。3、操作步骤（1）称取约10g样品于研钵中,加入样品提取液后研磨约3~5分钟，用滤纸过滤后挤干残渣,收集滤液10mL于100mL量筒中，用蒸馏水定容至30mL。（2）层析柱激活：层析柱在使用前依次加入2mL洗脱剂、5mL蒸馏水，吸耳球上加压，废液舍弃。（3）过层析柱：将50mL注射器与层析柱连接，将步骤⑴中收集到的样液倒入注射筒里，用注射塞加压，加快流速，建议30mL样本通过柱子的时间为5~8分钟，待样液完全流干，弃去流出液，然后依次加2mL洗涤剂及2mL蒸馏水于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃。（4）观察结果：观察层析柱中吸附剂颜色变化，若吸附剂逐渐形成绿色环带，可初步判断样本中含有孔雀石绿；若吸附剂逐渐形成紫色环带，可初步判断样本中含有结晶紫；加0.8mL洗脱剂于层析柱中，吸耳球上加压，用离心管1收集流出液,看液体颜色来判断。（5）衍生化：依次用2mL洗脱剂及2mL蒸馏水于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃，将衍生化试剂加入层析柱中，加入2mL蒸馏水用吸耳球从上口加压挤干，弃去流出液；将步骤⑷中离心管1的洗脱剂加入柱中,吸耳球上加压，用离心管2收集流出液,再加0.8mL洗脱剂于层析柱中，吸耳球上加压，用此离心管2收集混匀。（6）萃取：取步骤⑸中的离心管2，加入0.5mL蒸馏水后,再加入0.5mL萃取剂，扣上管塞混匀静置,离心管2下层若有明显的绿色或紫色则可判断样品中含有孔雀石绿或结晶紫，若无明显的绿色或紫色需进一步的判断。（7）检测：用1mL注射器取步骤⑹中离心管2中的下层的萃取液(注意不要吸到上层的液体),加到白色点滴板的一个孔上，样液渐渐挥干，若在孔上形成绿色斑环说明样品中含有孔雀石绿，形成紫色斑环样品中含有结晶紫。4、结果判定萃取液加到点滴板上后，若在孔上形成绿色斑环或紫色斑环说明样品中含有孔雀石绿或结晶紫，判定为阳性；若在孔上未形成绿色斑环或紫色斑环说明样品中不含有孔雀石绿或结晶紫，判定为