【免疫学实验】流式CBA多因子检测详解

【免疫学实验】流式CBA多因子检测详解CBA原理详细介绍CytometricBeadArray（CBA），即细胞因子微球检测技术。是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。BD公司利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性，将受检的可溶性因子附着于一些具有近似细胞直径的微粒上，即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检测。CBA的基本原理近似于ELISA的检测，即利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。详细原理介绍每个CBA微球大小一致，具有特定的荧光强度，包被有适用于特定分析（如其它抗体或者可溶性蛋白）的特异性捕获抗体（CaptureAntibody），提供了类似ELISA孔板的捕获表面。当微球和待测样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品（血清、血浆或者细胞培养液）中相应的抗原或蛋白结合，然后加入荧光标记的检测抗体，就会形成“三明治”夹心复合物。最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。CBA的每种微球携带有不同强度的红色荧光，在流式细胞仪的FL3通道通过检测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性；检测抗体带有PE荧光素标记，在流式细胞仪的FL2通道检测，通过检测抗体的PE荧光强度定量目的蛋白。CBA技术特点CBA具有FCM的宽范围荧光检测特点，对样本需求量更少，检测更快速、更准确。下面我们介绍一下CBA主要的技术特点:1、轻松实现多重检测。最多可同时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量。2、样本需要量小。仅需要50μL溶液就可进行一次检测。3、更高的灵敏度。分析灵敏度高达2.8pg/mL。4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml，所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白定量，排除了ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。5、检测对象的灵活组合—BDCBAFlexSet。CBAkit是同时检测试剂盒配好的6个指标，形式比较固定。为满足不同客户的实际需要和研究兴趣，BD于2005年初推出了CBAFlexset。它改变了CBAkit的固定形式，成为自由组合、灵活搭配的“自助餐”。您可以根据需要组合不同的捕获微球来检测多个指标，最多能同时检测75个指标。除了拥有CBAkit的优势外，FlexSet还配有独立的软件分析系统（CBAFlexSetAnalysisSoftware），并且可以在BDFACSArrayBioanalyzer上，直接用96孔和384孔板进行操作。CBAFlexset赋予研究者更灵活、更自由，更大的选择空间，而且进一步丰富了CBA产品线。种类涉及免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等许多领域的蛋白定量分析。6、操作简单，省时省力。CBA技术采用芯片式集成测定，所有检测只需一组标准曲线，就可计算出每种待测蛋白浓度；操作简单，整个流程只需要3.5小时，对待测样本可做实时分析，缩短检测了时间，提高了检测效率。7、强大的软件分析系统。BDCBA软件具有强大的数据处理能力，直接将目标蛋白的检测结果换算成标准浓度；除了为用户提供待测物的计数结果外，还能提供可视轮廓或信号图形以帮助用户获得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系统两种版本供您选择。和传统的液相蛋白定量技术相比，CBA技术是一种“多元”和“同步”的检测技术。革新的CBA技术与传统的蛋白定量相比有下列优点：CBA检测对象血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、细胞裂解物等。CBA应用领域▶炎症因子的水平的分析▶肿瘤研究及肿瘤疾病的辅助诊断、疗效和预后监测▶凋亡相关蛋白分析▶系统性红斑狼疮（SLE）和新生儿脓血症等免疫疾病的监控▶干细胞研究和干细胞治疗监测▶免疫学研究和免疫疾病的辅助诊断和监控▶感染疾病的研究及辅助诊断和疗效评价▶免疫功能监测▶药效评价，药物