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22TechnicalcodeofpracticeonisolationandpurificationofcommonpathogenicbacteriaofintestinalbacteriaforfreshwaterfishI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件主要起草人：张东鸣、陈玉珂、王秋举、郭志欣、蔺丽丽、刘洪健、赵云龙、吴振1淡水鱼肠道常见致病菌分离与纯化技术规程GB4789.28食品微生物学检验培养基和试剂的质量SN/T2632—2010微生物菌种常注：淡水鱼肠道中常见的致病菌有：金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、嗜水气单胞菌（Aeromonas和温和气单胞菌（Aeromonassobria）等。24789.28的规定。序号1胰蛋白胨2酵母提取物3氯化钠4琼脂5蒸馏水菌20min。将LB培养基置于锥形瓶中经高压蒸汽灭菌(121℃灭菌20min)后放置于提前灭菌的无菌操作3制备悬液（见7.3）接种（见7.4）培养（见7.5）纯化（见7.6）检验纯度（见7.7）保种（见7.8）记录（见8）后，打开腹腔，再用75%酒精棉球7.3.1用约2倍肠道内容物体积的无菌生理盐水将肠7.3.2将7.3.1的细菌悬液在无菌条件下涂布在倍数的稀释菌液。建议稀释倍数为：10-3、10-4培养基上，至液体全部被培养基吸收,每个浓度的菌液做4在培养皿上盖表面标注样品名称、日期和采样地等信息。置于恒温培养箱中28℃~37℃倒置培养24h。表面进行连续划线分离。在培养皿上盖表面做好标注，置于恒温培养箱中28℃~37℃培养24h。重复7.6.1操作2～3次。待培养基上均匀的长出颜色和形态相同的单个菌落时便可以进行细品名称、日期和采样地等信息，然后将试管置于恒温振荡器中，在温度28℃~37℃,转速每分钟120转的条件下，培养16h～18h。培养结束后按照7.4和7.5的方法再进行分离培养，若新平板中长出

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