DB14∕T 1510-2017 玉米镰孢穗腐病抗性鉴定牙签接种技术规程

DB14山西省质量技术监督局发布I 1 1 1 2 2 3 3 3 4 5 7本标准主要起草人：张作刚、王建明、李新凤、高俊明、胡春艳、曹挥、王春伟、王1玉米镰孢穗腐病抗性鉴定牙签接种技术规程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）2根据采用的技术标准判别植物寄主对特定病虫害反应程度和抵抗水平的以常规组织分离法从发病玉米籽粒中分离穗腐病致病镰孢菌。分离物经形态学鉴定确认为镰孢菌(Fusariumsp.)后，进行分离4.2致病性测定态学方法，必要时结合现代分子生物学技术确定5.1菌种准备无菌条件下将病原镰孢菌接种在直径9cm培养皿中的PDA平板培养基上5.2麦粒准备将100g麦粒放300mL三角瓶中，清水浸泡12h~24h，中间冲洗1~2次，水冲洗2~3次，然后篦去三角瓶中的水，盖上棉将清水洗煮过的牙签放在锅中，加清水浸过牙签，然后每1000m块和15g~20g葡萄糖制成营养液，一起煮20min~30min。将营养液中煮过的牙签捞出，趁牙签表面湿润时随即放入加有1%琼脂粉的小麦面粉中，搅拌使牙签表面均匀地沾满面粉。每800~1000根牙签需用小麦面粉30g~3将牙签菌袋与准备的麦粒高压蒸汽灭菌20min。5.5麦粒拌菌粒中，摇动三角瓶使菌种与麦粒混均，做成带菌麦粒5.6菌袋接种分粘着到牙签上以及麦粒均匀分散在牙签之间的缝隙中。每800~1000根牙签需用带菌麦粒30g~50g。5.7培养保存玉米吐丝10～15d，即乳熟期接种。先用直径3mm金属锥子或钻头在雌穗中下部较粗的左为经花丝通道接种后的发病模拟，图右为苞叶穿刺接种后的发病模拟.4135799抗性评价依据每份鉴定材料的平均病情级别确定其抗病级别，划分标准见表2。当设置的感病对照（B73）发病平均级别≥5.6时，该批次鉴定视为有效。对重复鉴定结果，以记载的最高病情级别为最终5A.1.1.1无性态Nirenberg，OosporaverticillioidesSacc.A.1.1.2有性态A.1.2形态特征A.1.2.1无性态在PSA培养基上气生菌丝绒状至粉状，白色、淡紫色，有时产生橙色分生孢子座；基物A.1.2.2有性态A.2禾谷镰孢A.2.1.1无性态禾谷镰孢，学名：FusariumgraminearumClade，异名：FusariumroA.2.1.2有性态玉蜀黍赤霉，学名：Gibberellazeae（Schwein.）Petch，异名：Botryosphaeriasaubinetii，Dichomerasaubinetii，Dothideazeae，Gibberasaubisaubinetii，Sphaeriasaubinetii，SphaeriazeA.2.2形态特征6A.2.2.1无性态A.2.2.2有性态子囊壳在禾本科植物基质上产生；子囊壳成堆，球形或卵形，表面粗糙，直径140mm～250mm；子囊棒状，大小为（60～85）mm×（8～刀状，两端钝圆，3隔，大小为（19～24）mm7表B.1玉米籽粒上常见镰孢菌种的特镰孢菌属Fusariumspp.AACTCCCAAACCCCTGTGAAC禾谷镰孢复合种F.graminearumCladeACAGATGACAAGATTCAGGC串珠镰孢F.verticillioidesAATTGGCCATTGGTATTATATAT禾谷镰孢复合种的TEF-1α基因扩增引物信息：TEF-F(5'-ATGGGTAAGGARGACAAGAC-3')，TEF-R(5'-GGARGTACCAGTSATCATGTT-3')。正向引物TEF-F位于TEF-1α基因序