微生物学检验技术 课件 33-5综合技能训练：尿液标本微生物检验

综合技能实训五尿液标本微生物检验学习目标1．掌握尿液标本的正确采集、运送和微生物检验程序。2．熟悉泌尿道感染的常见致病菌。3．了解尿液标本中常见致病菌的临床意义。4．具有正确采集尿液标本和进行尿培养操作的能力。5．能正确选择试验项目对尿培养标本进行微生物检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。综合技能训练五尿液标本微生物检验思维导图综合技能训练五尿液标本微生物检验一、尿液标本常见病原菌综合技能训练五尿液标本微生物检验1、球菌革兰阳性：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、B群链球菌、肠球菌革兰阴性：淋病奈瑟菌

综合技能训练五尿液标本微生物检验2、杆菌革兰阳性：结核分枝杆菌革兰阴性：大肠埃希菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌

综合技能训练五尿液标本微生物检验3、其他白假丝酵母菌、钩端螺旋体、支原体、衣原体

综合技能训练五尿液标本微生物检验二、检验方法与程序综合技能训练五尿液标本微生物检验尿液标本的检验操作程序见下图尿液涂片定量培养分离培养淋病奈瑟菌培养直接涂片革兰染色镜检离心沉淀涂片特殊细菌镜检菌落计数血琼脂平板和中国蓝或麦康凯琼脂平板TM/MTM琼脂平板观察菌落涂片、染色、镜检生化试验药敏试验报告结果综合技能训练五尿液标本微生物检验1、尿液标本的采集与运送中段尿采集法膀胱穿刺法导尿法集尿法

综合技能训练五尿液标本微生物检验2、尿液标本的运送和保存尿液标本采集后应立即置于无菌带盖容器中送检、及时接种，室温下保存时间不能超过2h，4℃冷藏时间不能超过8h，疑为淋病奈瑟菌感染患者的尿液标本不能冷藏保存。

综合技能训练五尿液标本微生物检验三、培养及鉴定1、涂片检查普通细菌检查：取沉淀物涂片行革兰染色镜检。如发现革兰阳性或阴性细菌，即可做出初步报告“找到革兰阳（阴）性杆菌或球菌”；见到革兰阳性，卵圆形的芽生孢子和管状假菌丝，报告“找到假丝酵母细菌，形似白假丝酵母菌”。综合技能训练五尿液标本微生物检验1、涂片检查淋病奈瑟菌检查：沉淀物涂片行革兰染色，镜检如查见白细胞内或白细胞外有革兰阴性双球菌、肾形，报告为“找到革兰阴性双球菌，疑似淋病奈瑟菌”。念珠菌检查：取沉淀物置于洁净玻片上，加盖玻片后用高倍镜观察，若沉渣太多，可滴加10%氢氧化钾，使之溶解后再镜检。同时制成薄片，干燥、固定、革兰染色后镜检。如发现卵圆形芽生孢子和管状的假菌丝，且革兰染色为阳性，可初步报告“检出念珠菌”。

综合技能训练五尿液标本微生物检验1、涂片检查结核分枝杆菌检查：尿液经4000r/min离心10min，取沉淀物制作2张涂片，分别用萋-尼抗酸染色和潘本汉抗酸染色，如两张均见红色杆菌，报告“找到抗酸杆菌”。如萋-尼抗酸染色见红色杆菌，而潘本汉抗酸染色未见红色杆菌，则为耻垢分枝杆菌。综合技能训练五尿液标本微生物检验1、涂片检查钩端螺旋体检查：取患者发病1W后的尿液5～10ml，以3000r/min离心10min。取尿液沉淀物滴于载玻片上，覆以盖玻片后于暗视野显微镜下检查，若发现一串细密亮珠、两端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，可报告“找到螺旋体”。如镜检未找到细菌可报告“未查见细菌”。

综合技能训练五尿液标本微生物检验2、分离培养与鉴定通常取患者中段尿作定量培养，用定量接种环取混匀尿液，连续均匀划线接种于血琼脂平板上，置35℃培养18～24h后计数菌落，再计算出每毫升尿液中的细菌数。除接种至血平板进行定量外，还需分区划线接种至麦康凯或中国蓝琼脂平板进行菌株筛查。第二日观察平板上有无细菌生长，如果有，确认是阳性或阴性菌后，选择相应的鉴定卡片，挑取菌落制成菌悬液，利用微生物鉴定仪，进行细菌药敏鉴定试验。综合技能训练五尿液标本微生物检验四、结果报告综合技能训练五尿液标本微生物检验阴性结果报告：应报告“接种1μl无菌生长（<1000CFU/ml，无临床意义的生长）”，或“接种10μl无菌生长（<100CFU/ml，无临床意义的生长）”，仅报告“无菌生长”不准确。阳性结果报告：尿液细菌培养检查必须报告细菌的种属、菌落计数及药敏试验结果。在有一些情况下也会出现无明确意义的阳性结果报告，例如：纯培养出革兰×性×菌生长，菌落计数×CFU/ml；三种或三种以上混合菌生长，菌落计数×CFU/ml。从泌尿系统感染患者的同份尿液中可同时检出两种致病菌，当检出三种或以上不同微生物，应认为标本采集或处理不当被污染。综合技能训练五尿液标本微生物检验五、临床意义综合技能训练五尿液标本微生物检验一般认为尿液细菌计数不应超过103CFU/ml，若革兰阳性球菌大于104CFU/ml，革兰阴性杆菌大于105CFU/ml，应考虑为泌尿系统感染。如尿液中细菌数少于104CFU/ml或介于104～105CFU/ml之间，反复培养均查出同一细菌时，一般也认为是病原菌。综合技能训练五尿液标本微生物检验临床表现白细胞尿≥104/ml菌尿（CFU/ml）病原菌种数解释是否做药敏试验有症状+大肠埃希菌或腐生葡萄球菌≥103其他菌种≥105≤2尿路感染、急性肾盂肾炎菌落计数≥104有意义急性前列腺炎菌落计数≥103有意义是有症状+<103有炎症但无菌尿，正在使用抗菌药物，慢生长或难生长病原菌感染，无病原菌感染不确定有症状+≥105≤2免疫功能正常患者：重复做尿液细菌学和细胞学检查（可能处于尿路感染的起始阶段）免疫功能缺陷患者（如化疗