脑脊液检验（临床检验技术课件）

标本采集与处理脑脊液是一种细胞外液，是主要通过各脑室的脉络丛细胞对血浆的选择过滤，即超滤和分泌而产生的，它充满脑室系统以及脑和脊髓的蛛网膜下腔，通过蛛网膜粒绒毛吸收入而返回血循环。概述概述存在于：脑室、蛛网膜下腔流动与：脑和脊髓表面，通过脑穹隆面的蛛网

膜粒绒毛吸收入上矢状窦而返回静脉产生于：70%来自各脑室的脉络丛 30%来自室管膜和蛛网膜下腔超滤分泌脑脊液检验左、右侧脑室第三脑室第四脑室蛛网膜下隙中脑水管室间孔上矢状窦颈内静脉渗入第四脑室正中孔第四脑室外侧孔脑脊液的生成脑脊液检验脑脊液的生成左、右侧脑室第三脑室第四脑室蛛网膜下隙中脑水管室间孔蛛网膜颗粒上矢状窦颈内静脉渗入侧脑室室间孔第三脑室中脑水管第四脑室蛛网膜下隙蛛网膜颗粒上矢状窦窦汇窦汇→左右横窦→乙状窦上矢状窦第四脑室正中孔第四脑室外侧孔脑脊液检验血脑屏障：毛细血管内的血液与脑组织之间的一层选择性通透性作用的结构组成：毛细血管的内皮、内皮细胞之间的紧密连接、毛细血管的基膜和神经胶质细胞突起功能：可阻止多种物质进入脑，但营养物质和代谢产物可顺利通过，以维持脑部神经细胞内环境的相对稳定；脑脊液检验物质通过血脑屏障的难易程度最易：氯化物、钠、镁、乙醇其次：清蛋白、葡萄糖、钙、乳酸、氨基酸、尿素、肌酐极难：纤维蛋白原、补体、抗体、胆红素、胆固醇脑脊液检验缓冲保护作用：保护脑和脊髓调节：调节颅内压力和酸碱调节：调节神经系统碱储量，调节pH运输：供给脑、脊髓的营养物质,运走代谢产物参与神经内分泌调节01标本采集与处理1、标本采集◆有脑膜刺激症状时◆疑有颅内出血时◆中枢神经系统肿瘤◆不明原原因的剧烈头痛、昏迷、抽搐或瘫痪◆需行椎管内给药及手术前麻醉、造影等禁忌症适应症◆颅内高压者◆休克、衰竭或濒危状态者◆穿刺处局部皮肤有炎症者◆颅后窝有占位性病变或伴有脑干症状者01标本采集与处理1、标本采集穿刺部位：一般是腰椎穿刺特殊情况是小脑延髓池穿刺或侧脑室穿刺在第3和第4腰椎间隙穿刺时应尽量避免混入血液01标本采集与处理1、标本采集穿刺部位：一般是腰椎穿刺特殊情况是小脑延髓池穿刺或侧脑室穿刺注意事项：穿刺时应尽量避免混入血液；

穿刺后应做压力测定

正常成人卧位时脑脊液压力为80-180mmH2O；

儿童 40-100mmH2O）；若压力超过200mmH2O，则放出的脑脊液量不应超过2ml；若压力低于正常低限，可作动力试验。穿刺后将标本分别收集于3只无菌容器中，每管1～2ml

01标本采集与处理1、标本采集穿刺部位：一般是腰椎穿刺

特殊情况是小脑延髓池穿刺或侧脑室穿刺穿刺后将标本分别收集于3只无菌试管中，每管1～2ml，采集顺序如下：

第一管用于细菌学检查，

第二管用于生物化学和免疫学检查

第三管用于显微镜检查如疑为恶性肿瘤，再采集一管做脱落细胞学检查。标本采集后应在检查申请单上注明标本采集的日期和时间

01标本采集与处理2、标本运送

标本采集后，应立即由专人或专用的物流系统运送，一般不能超过1h。运送过程要保证标本的安全性，应用封闭的容器运送，避免过度震荡。若发生标本溢洒，应立即采用0.2%过氧乙酸或含2000mg/L有效氯的消毒液或75%乙醇溶液消毒污染区域。

01标本采集与处理3、标本的保存与接收接收后的标本应立即检验，若不能及时检验的，应2℃～8℃保存，并保证在小时内完成检验。合格的脑脊液标本：①标本容器标识清晰②无明显外溢情况；③

标本量符合检验项目要求。

01标本采集与处理4、标本的拒收标本信息不全；标本唯一性标识不清；标本外溢明显；标本量不足拒收的标本应做好记录，并将情况反馈给送检科室。

01标本采集与处理5、检验后标本的处理由于脑脊液内可能含有各种病微生物，必须视为有潜在感染性的物质。标本的采集、运送、接收、检验及检验后的处理等过程要符合实验室生物安全原则，实验过程中应注意个人生物安全防护。检验后的标本及容器、检测过程中接触标本的材料皆应按《病原微生物实验室生物安全管理条例》及《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的相关规定处理。

思考题

1.脑脊液标本采集和处理的要求是什么？（采集的三管标本分别做什么检查？）2.脑脊液标本在运送和接收过程中有什么要求？一般性状检验02化学检验1、一般性状检验02化学检验1、一般性状检验【颜色】通过肉眼观察。报告方式：直接用颜色进行描述性报告，

如无色、红色、黄色等◆正常：无色

脑脊液颜色正常，不能排除神经系统的疾病。◆病理：不同颜色常反映一定的疾病

常见的病理性改变红色、黄色、乳白色、绿色、褐色或黑色02化学检验1、一般性状检验02化学检验2、颜色红色：（出血）（1）穿刺损伤：

第一管为血性；

以后两管颜色逐渐变淡；

离心后红细胞沉于管底，上清液则为无色透明（2）蛛网膜下腔或脑室出血：

三管均吴血性，

离心后上清液为淡红色或黄色。02化学检验2、颜色穿刺损伤出血02化学检验2、颜色蛛网下腔或脑室出血02化学检验2、颜色检查内容新鲜出血陈旧性出血外观前后三管红色逐渐变淡前后三管红色均匀一致凝固性易凝固不易凝固离心后上清液颜色无色透明呈红色、淡红色或黄色红细胞形态无变化有皱缩上清液隐血试验多为阴性阳性白细胞计数不增高继发性或反应性增高表

-脑脊液新鲜出血和陈旧性出血的鉴别02化学检验2、颜色脑室出血蛛网下腔出血02化学检验2、颜色黄色（黄变症）：黄变症原因临床意义出血性红细胞破坏，胆红素增加陈旧性蛛网膜下腔出血或脑出血黄疸性胆红素增高黄疸性肝炎、肝硬化、钩端螺旋体病、胆管梗阻、新生儿溶血症梗阻性蛋白质含量显著增高髓外肿瘤等所致的椎管梗阻表

-脑脊液黄变症的主要原因及临床意义02化学检验◆黄色（黄变症）：陈旧性出血

1）陈旧性出血：（蛛网膜下腔出血）红细胞溶解→氧合血红蛋白2）高胆红素血症：血清中胆红素>256

脑脊液中胆红素>8.63）蛛网膜下腔梗阻：椎管阻塞多神经炎蛋白含量>1.5g/L

脑膜

少数因进食大师的黄色素、胡萝卜素等而呈黄色。2、颜色02化学检验◆乳白色：白细胞增多（化脓性脑膜炎）◆（微）绿色：绿脓杆菌引起的脑膜炎◆褐色或黑色：脑膜黑色素瘤2、颜色02化学检验【透明度】

正常----透明脑脊液中蛋白质增多报告等级：透明、微混、混浊等脑脊液中细菌、真菌增多脑脊液中蛋白质增多混浊的原因脑脊液细胞成分增多02化学检验◆正常----清晰透明◆白细胞>200×106/L

红细胞>400×106/L

细菌、真菌等较多◆病毒性脑炎

中枢神经梅毒◆结核性脑膜炎→细胞数中度↑→轻度混浊（毛玻璃样）◆化脑性脑膜炎→细胞数大量↑→明显混浊（乳白色）◆腰椎穿刺损伤出血→轻度混浊（红色）混浊细胞数轻度↑→透明或微混常见脑脊液的透明度【透明度】2、颜色02化学检验可按“无凝块”“有凝块”“无薄膜”“胶冻状”等来描述◆正常：静置24h→不凝固、无沉淀无薄膜形成◆急性化脓性脑膜炎：静置1-2h→凝块沉淀物◆结核性脑膜炎：静置12-24h→表面有纤细薄膜◆蛛网膜下腔梗阻：黄色胶胨状◆神经梅毒、脊髓灰质炎：清晰透明或微混，可见絮状小凝块【凝固性】小结◆正常----无色清晰透明无凝块无薄膜◆病毒性脑炎中枢神经梅毒◆结核性脑膜炎→细胞数中度↑→轻度混浊（毛玻璃样）表面有薄膜◆化脑性脑膜炎→细胞数大量↑→明显混浊（乳白色）有凝块或沉淀◆腰椎穿刺损伤出血→轻度混浊（红色）无凝块无薄细胞数轻度↑→透明或微混有絮状小凝块表

-常见几种脑脊液的一般性状检查特征化学检验04化学检验1、蛋白质测定【定性试验】有Pandy试验、硫酸铵试验●Pandy试验：（>0.25g/L可呈弱阳性）①原理：球蛋白+苯酚（石碳酸）→蛋白盐（白色混浊或沉淀）②试剂：饱和苯酚溶液

③简要操作：取试剂2ml于试管中→垂直滴加标本1～2滴

→立即观察结果（在黑色背景下）

④结果判定：正常：阴性+:白色云雾状++：白色云雾状浑浊+++：白色絮状沉淀++++：立即形成白色凝块04化学检验1、蛋白质测定在生理状态下，由于血脑屏障的作用，健康人脑脊液蛋白质含量较血浆低，约为血浆的1%，主要为清蛋白。

在中枢神经系统发生病变时，脑脊液蛋白质种类和含量可有不同程度的变化。

脑脊液蛋白质检查可分为定性检查和定量检查。04化学检验1、蛋白质测定脑脊液蛋白质检查定性潘氏试验硫酸铵试验罗-琼氏试验诺-爱试验Lee-Vinson试验定量磺基水杨酸-硫酸钠比浊法邻苯三酚红钼络合显色法双缩脲法04化学检验（一）蛋白质：【定性试验】1.潘氏试验（Pandy试验）：（>0.25g/L可呈弱阳性）◆原理：蛋白+苯酚（石碳酸）→蛋白盐→混浊或沉淀

脑脊液中的蛋白质与苯酚结合，生成不溶性的蛋白盐而产生白色混浊，根据浊度进行结果判定。◆试剂：饱和苯酚溶液

◆操作：取苯酚试剂2ml于洁净试管中，垂直滴加脑脊液1-2滴，然后立即在黑色背景下观察结果，若出现白色混浊或沉淀，即判断为阳性。

◆结果判定：

--：清晰，无混浊±：稍呈白雾状，对光不易看到+：灰白色云雾状++：白色云雾状混浊+++：白色絮状沉淀++++：立即形成白色凝块状1、蛋白质测定04化学检验1、蛋白质测定【定性试验】潘氏试验（Pandy试验）硫酸铵试验：包括罗-琼氏试验和诺-爱试验，后者操作繁琐〖罗-琼氏试验〗◆原理：

球蛋白+半饱和硫酸铵→蛋白盐→混浊或沉淀利用半饱和硫酸铵沉淀脑脊液中的球蛋白，根据所出现的白色混浊或沉淀判定结果。◆试剂：半饱和硫酸铵溶液

◆操作：取试剂0.5ml于洁净试管中，沿管壁轻轻加入脑脊液标本0.5ml，勿混，先做环状试验◆结果判定：若3min内在两液现面间出现白色环，表示有蛋白质，若混匀白色混浊消失，则表示无球蛋

白；若白色沉淀不消失，则表示球蛋白阳性。04化学检验1、蛋白质测定【定性试验】潘氏试验（Pandy试验）硫酸铵试验：包括罗-琼氏试验和诺-爱试验Lee-Vinson试验：

●原理：

磺基水杨酸和氯化高汞均能沉淀脑脊液蛋白质，根据沉淀物的比例不同，可鉴别化脓性和结核性脑膜炎。04化学检验1、蛋白质测定方法优点缺点Pandy试验操作简便、标本量少、易于观察、灵敏度高假阳性率高罗-琼氏试验检测球蛋白，特异性高灵敏度低诺-爱试验检测球蛋白和清蛋白，特异性高操作繁琐Lee-Vinson试验检测球蛋白和清蛋白操作繁琐、特异性低蛋白质定性试验方法学评价04化学检验1、蛋白质测定蛋白质定性试验方法学评价方法优点缺点比浊法（磺基水杨酸-硫酸钠比浊法）操作简便、快速，无需特殊仪器标本用量大、重复性差、影响因素多染料结合比色法（邻苯三酚红钼络合显色法）操作快速、灵敏度高、标本用量少、重复性好（常用）要求高、线性范围窄双缩脲法操作简便、受蛋白质种类影响小灵敏度较低、特异性差04化学检验1、蛋白质测定【参考值】（1）定性试验

阴性或弱阳性（2）定量试验正常成人：腰池穿刺参考区间为0.20～0.40g/L，

小脑延髓池穿刺参考区间为0.10～0.25g/L，

脑室穿刺为0.00～0.15g/L04化学检验1、蛋白质测定（1）标本：若标本混浊或含有大量细胞时，须离心沉淀，吸取上清液进行检测，否则可引起潘氏试验假阳性，脑脊液蛋白定量测定结果偏高。（2）器材：所用的器材均应洁净没有污染，以免出现假阳性，或使结果偏高。（3）试剂：潘氏试验中所用的苯酚试剂如饱和度降低会出现假阴性，应定期检查更换试验，特别是室温较低时。（4）结果观察：潘氏试验观察结果时，应注意在黑色背景下进行，否则易引起假阴性。（5）其他：脑脊液蛋白定量测定时，若标本蛋白质浓度过高，应用生理盐水稀释后再重新测定。【质量保证】04化学检验1、蛋白质测定【临床意义】病变临床意义脑组织炎性病变脑组织感染时脑膜和脉络丛毛细血管通透性增加，先有清蛋白增高,随后球蛋白和纤维蛋白也增高。蛋白增高程度:化脓性脑膜炎>结核性脑膜炎>病毒性、真菌性脑炎神经根病变梗阻性脑积水Guilain-Barre综合征常有蛋白-细胞分离现象椎管内梗阻脑与蛛网膜下腔互不相通，血浆蛋白质由脊髓静脉渗出，脑脊液蛋白质含量显著增高(有时达30~50g/L),如脊髓肿瘤、转移癌、粘连性蛛网膜炎等其他早产儿脑脊液蛋白含量可达2g/L,新生儿为0.8~1.0g/L,出生2个月后逐渐降至正常水平04化学检验1、蛋白质测定

神经系统感染性疾病颅内和蛛网膜下腔出血蛛网膜下腔梗阻颅内占位性病变损伤性腰椎穿刺增加见于脊液更新加快损伤或腰穿引起的脊液漏颅内压增加甲亢

减少见于04化学检验2、葡萄糖测定血糖浓度血脑屏障通透性糖酵解速度葡萄糖膜转运系统的功能脑脊液中葡萄糖含量影响因素脑脊液葡萄糖的方法-（同血糖）葡萄糖氧化酶法己糖激酶法04化学检验2、葡萄糖测定方法评价定量测定氧化酶法氧化酶法中一些还原性物质可产生竞争性抑制作用，造成测定结果偏低，使反应的特异性减低。己糖激酶法①基本不受溶血、高脂血、黄疸、尿酸、维生素C及药物的干扰；②特异性和准确性均高于葡萄糖氧化酶法。半定量测定五管糖法（班氏法）特异性、准确性较差葡萄糖测定方法学评价04化学检验2、葡萄糖测定血糖浓度血脑屏障通透性糖酵解速度葡萄糖膜转运系统的功能脑脊液中葡萄糖含量影响因素参考值成人2.5～4.4mmol/L儿童2.8～4.5mmol/L脑脊液/血浆比0.3～0.9健康人脑脊液葡萄糖含量仅为血糖的50%～80%。04化学检验2、葡萄糖测定变化临床意义脑组织炎性病变①急性化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、真菌性脑膜炎，葡萄糖含量越低，预后越差；②急性化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、真菌性脑膜炎，葡萄糖含量越低，预后越差脑肿瘤，尤其是恶性肿瘤；③神经梅毒④低血糖椎管内梗阻①饱餐或静脉注射葡萄糖后，血糖增高②脑出血③影响到脑干的急性外伤或中毒④糖尿病【临床意义】04化学检验3、氯化物测定血氯浓度血浆pH值血脑屏障通透性脑脊液中蛋白质含量脑脊液中氯化物含量影响因素脑脊液高于血浆氯化物脑脊液氯化物测定方法与血清氯化物测定方法相同04化学检验3、氯化物测定◆目前临床常用的方法有：硝酸汞滴定法、硫氰酸汞比色法、离子选择电极法、电量分析法、干化学分析法等。其中，离子选择电极法变异系数小，准确度和精密度良好，易于自动化，是目前使用最广泛的常规方法。04化学检验3、氯化物测定方法评价硝酸汞滴定法①为手工检测法，操作繁琐，以目测判断滴定终点；②精密度低，影响因素多硫氰酸汞比色法①可手工操作，又可自动化分析；②准确度、精密度良好；③为常规方法离子选择电极法①变异系数小；②准确度、精密度良好，易于自动化；③为目前使用最广泛的常规方法电量分析法①准确度、精密度高；②为参考方法常用脑脊液氯化物测定方法的方法学评价04化学检验3、氯化物测定减低①化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎和真菌性脑膜炎氯化物降低，其中结核性脑膜炎氯化物显著降低，比葡萄糖降低出现更早，对化脓性脑膜炎和结核性脑膜炎的鉴别诊断有一定价值；②非中枢神经系统疾病，如呕吐、腹泻、摄入氯化物过少等造成血氯降低时，脑脊液中的氯化物可随之降低；③其他中枢神经系统疾病，如病毒性脑膜炎、脊髓灰质炎、脑脓肿、神经梅毒等氯化物多属于正常或轻度减低增高慢性肾功不全、肾炎、尿毒症、脱水、心力衰竭和浆液性脑膜炎等成人120～130mmol/L；儿童111～123mmol/L【参考值】【临床意义】04化学检验4、其他测定项目临床意义化学检查酶及乳酸测定（1）天门冬氨酸氨基转移酶(AST)＜20

/L活性增高见于脑梗死、脑萎缩、、中毒性脑病、急性颅脑外伤、血管病变、中枢神经系统转移癌（2）乳酸脱氢酶(LDH)：3～40

/L(具有鉴别意义)①细菌性脑膜、脑血管疾病、脑肿瘤、脱髓鞘病，病情进展时②病毒性脑膜炎：多正常或轻度③颅脑外伤：LDH正常④病情缓解时，LDH降低（3）肌酸激酶(CK)：CK-BB0.5～2

/L①增高见于：化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、进行性脑积水、脑血管疾病、脑肿瘤②正常或轻度增高见于：病毒性脑膜炎（4）溶菌酶：

无或含量极微结核性脑膜炎增高的程度明显高于细菌性脑膜炎且与病情变化相一致04化学检验4、其他测定项目临床意义化学检查蛋白电泳①前白蛋白增高→见于退行性变，如脑积水、舞蹈病，帕金森病前白蛋白减少→见于神经系统炎症，如脑膜炎，脑肿瘤，脑萎缩②清蛋白增高→见于脑血管病，如脑瘤、脑梗阻、脑出血等清蛋白减少→见于外伤急性期③a1球蛋白增高→见于脑膜炎、脊髓灰质炎④a2球蛋白增高→见于脑肿瘤，转移癌，胶质瘤⑤β球蛋白增高→见于退行性变，如帕金森病、外伤后偏瘫等⑥r球蛋白增高→见于脑胶质瘤、重症脑外伤、癫痫等04化学检验4、其他测定项目临床意义免疫学检查免疫球蛋白测定IgG增加→多发性硬化，亚急性硬化性全脑炎，结核性脑膜炎，梅毒性脑膜炎IgA增加→各种脑膜炎、脑血管疾病IgM出现→近期中枢神经系统有感染，脑肿瘤，多发性硬化IgE增高→见于脑寄生虫病等其他项目测定髓鞘碱性蛋白：多发性硬化症的急性期显著增加，主要作为观察多发性硬化症患者疾病活动的指标；神经性梅毒、脑外伤、脑血管意外时也增高C反应蛋白：在细菌和非细菌性脑膜炎鉴别诊断中有价值，前者升高程度明显大于后者S-100：中枢神经系统损伤特异和灵敏的化学指标IgE增高→见于脑寄生虫病等显微镜检验04显微镜检验1、显微镜计数法1．细胞总数计数●直接计数法：适用于比较清亮或微浑的脑脊液标本【操作】吸取标本（用微量吸管吸取少量混匀脑脊液）→充液（充入计数池）→静置（2-3分钟）→计数用低倍镜计数10个大方格（两个计数池内四角和中央大）→计算

04显微镜检验1、显微镜计数法1．细胞总数计数●直接计数法：【计算】脑脊液细胞数=N×106=■.■■×109/L

N：10个大方格的细胞数04显微镜检验1、显微镜计数法1．细胞总数计数●直接计数法：适用于比较清亮或微浑的脑脊液标本●稀释计数法：适用于细胞过多、混浊或血性的脑脊液标本【操作】

稀释（用微量吸管吸取少量混匀的脑脊液+生理盐水或红细胞稀释液）

→充液（充入计数池）→静置（2-3分钟）→计数用低倍镜计数10个大方格（两个计数池内四角和中央大）→计算04显微镜检验1、显微镜计数法1．细胞总数计数●稀释计数法：【计算】脑脊液细胞数=N×稀释倍数×106=■.■■×109/LN：10个大方格的细胞数04显微镜检验1、显微镜计数法2．白细胞计数●直接计数法：适用于非血性的脑脊液标本【操作】

标本预处理

（用微量吸管吸取少量冰乙酸，全部吹出，使微量吸管内壁黏附少量冰酸，再吸入混匀的脑脊液，数分钟后，再次混匀脑脊液标本）→充液（充入计数池）→静置（2-3分钟）→计数用低倍镜计数10个大方格（两个计数池内四角和中央大）→计算

04显微镜检验1、显微镜计数法2．白细胞计数●直接计数法：适用于非血性的脑脊液标本●稀释计数法：适用于混浊或血性的脑脊液标本【操作】

稀释（用微量吸管吸取少量混匀的脑脊液+白细胞计数稀释液）

→→充液（充入计数池）→静置（2-3分钟）→计数用低倍镜计数10个大方格（两个计数池内四角和中央大）→计算

04显微镜检验2、细胞计数1．细胞总数计数

【方法】（1）仪器计数法：体液细胞分析仪（2）显微镜计数法：①直接计数法

②稀释计数法04显微镜检验2、细胞计数1．细胞总数计数2．白细胞计数

【方法】（1）仪器计数法：同细胞总数计数，体液细胞分析仪（2）显微镜计数法：直接计数法：同细胞总数计数稀释计数法04显微镜检验2、细胞计数【方法学评价】（1）仪器计数法：

该法精密度高、速度快、报告及时；但对于异常细胞形态识别有偏差。若仪器出现形态学报警，必须进行显微镜计数法复查。（2）显微镜计数法：虽然操作繁琐，但可作为校正仪器的参考方法。04显微镜检验2、细胞计数【质量保证】●及时送检。

为避免脑脊液标本凝固，应尽快送检，应在标本采集后1小时内完成，以免放置过久，使细胞变形、破坏或脑脊液凝固，导致细胞计数不准。●准确预处理标本。

直接计数时吸管内的冰乙酸要尽量除去，否则结果偏低血性标本的白细胞计数的校正：混有血液的脑脊液标本混匀后，用1%的冰乙酸溶液稀释后计数。●准确校正。04显微镜检验2、细胞计数【质量保证】●及时送检。●准确预处理标本。●准确校正。

穿刺损伤导致的血性脑脊液，计数细胞总数无意义。白细胞计数须经校正。为了排除因出血而带来的白细胞，可用以下公式进行校正：04显微镜检验2、细胞计数【质量保证】●及时送检●准确预处理标本●准确校正●注重形态

细胞计数时，若发现较多的皱缩或肿胀的红细胞，应在报告中予以描述，以帮助临床鉴别陈旧性或新鲜出血。●鉴别成分：计数时注意鉴别红细胞、白细胞、新型隐球菌。04显微镜检验2、细胞计数【质量保证】●及时送检●准确预处理标本●准确校正●注重形态●鉴别成分：计数时注意鉴别红细胞、白细胞、新型隐球菌。红细胞加酸后溶解白细胞加酸后细胞核和细胞质更加明显新型隐球菌具有“出芽”现象；滴加0.35mol/L冰乙酸后，仍保持原形；加优质墨汁后可见不着色的荚膜。04显微镜检验2、细胞计数【质量保证】●及时送检。●准确预处理标本●准确校正●注重形态●鉴别成分●保护器材：

检查完毕，采用75%乙醇消毒计数板60min。勿用苯酚消毒，以防损伤计数室的刻度。04显微镜检验2、细胞计数【参考区间】●红细胞：无●白细胞：成人（0～10）×106/L，儿童（0～15）×106/L；新生儿（0～30）×106/L04显微镜检验3、细胞分类计数【方法】脑脊液细胞学检查常采用：玻片离心法、沉淀室法、微孔薄膜筛滤法、纤维蛋白网细胞捕获法等采集细胞，并进行染色。04显微镜检验3、细胞分类计数【方法】（1）仪器分类法：体液细胞分析仪（2）显微镜分类法：即直接分类法（3）染色分类法04显微镜检验3、细胞分类计数【方法】（1）仪器分类法：体液细胞分析仪（2）显微镜分类法：即直接分类法①白细胞直接计数后，在高倍镜下根据细胞形状和细胞核的形态进行分类。②

分别计数“多个核细胞”（即粒细胞）、“单个核细胞”（包括淋巴细胞、单核细胞和内皮细胞），共计数100个有核细胞③

分别计算单个核细胞和多个核细胞所占的比例④

以百分数表示04显微镜检验染色分类法取离心后的脑脊液沉淀物制备涂片（均匀薄膜）干燥行瑞特或瑞-吉复合染色油镜下分类计数（分类方法同血液白细胞分类计数方法）结果以百分率表示（如有内皮细胞，需要另作描述并报告）04显微镜检验3、细胞分类计数04显微镜检验3、细胞分类计数【质量保证】（1）若脑脊液标本陈旧、细胞变形时，白细胞直接分类法误差较大，应改用染色分类法。（2）染色分类法时，离心速度不宜过快、固定时间不宜过长，以减少脑脊液细胞的破坏和变形。细胞涂片应均匀集中，以利于观察。（3）进行染色分类时，如见到内皮细胞、室管膜细胞，应计入分类百分比中；（4）若见到肿瘤细胞，则另行描述报告。（5）直接分类时，若白细胞总数少于100个，则直接写出单个核细胞和多个核细胞各自的具体数字。04显微镜检验3、细胞分类计数【参考区间】●直接分类法：

有核细胞分类：多为淋巴细胞及单核细胞（7∶3）；偶见内皮细胞。●染色分类法：成人：淋巴细胞40%-80%，单核细胞15%-45%，中性粒细胞0-6%新生儿：淋巴细胞5%-35%，单核细胞50%-90%，中性粒细胞0-8%04显微镜检验细胞计数与分类计数【临床意义】脑脊液细胞数增多见于中枢神经系统病变，其增多程度及细胞种类与病变的性质及转归有关。04显微镜检验临床意义（1）病毒性脑炎、脑膜炎：

轻度增加，数十

106/L；淋巴细胞为主（2）结核性性脑膜炎：

轻到中度增加，<500

106/L；

初期以中性粒增多为主，好转后以淋巴细胞为主。（3）真菌性性脑膜炎：

中度增加，数百

106/L（新型隐球菌性）

常以淋巴细胞为主。（4）化脓性脑膜炎：

明显增多，数千

106/L

中性粒细胞为主，病情好转中性粒急剧下降（5）脑寄生虫病：升高，<100

106/L，以淋巴细胞和嗜酸细胞为主（血吸虫、

阿米巴原虫、弓形体、旋毛虫幼虫）（6）脑室或蛛网膜下腔出血：可见大量红细胞，白细胞中以中性粒细胞为主，2-3天可发现

吞噬细胞吞噬红细胞04显微镜检验表-中枢神经系统病变时脑脊液细胞分类计数的变化04显微镜检验4、病原生物学检查方法●细菌检查：显微镜检查法，细菌培养法，ELISA法●真菌检查：显微镜检查法，真菌检查法●寄生虫检查：显微镜检查法，免疫学检查法

04显微镜检验表–常用

细菌生物学检查方法及评价04显微镜检验表–常用真菌、寄生虫生物学检查方法及评价检查内容检查方法真菌检查显微镜检查法离心取沉淀进行墨汁染色，若发现新型隐球菌可确诊新型隐球菌性脑膜炎真菌培养法排除污染因素，若培养出真菌可确诊，同时可确真菌的种类及进行药敏试验。缺点：耗时长，不能及时确诊寄生虫检查显微镜检查法离心取沉淀涂片，若检出寄生虫虫卵即可诊断脑寄生虫病。优点：该法简单、快速，可确诊；缺点：阳性率较低免疫学法ELISA法对诊断脑囊虫病有高度的特异性；梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验对神经梅毒的诊断有较高的灵敏度和特异性临床应用05临床应用1、在中枢神经系统感染性疾病诊疗中的应用正常脑脊液：外观无色、清晰、透明，放置24小时无凝块，蛋白定性试验(潘氏试验)阴性或弱阳性，罗琼氏试验阴性葡萄糖正常:2.5-4.4mmol/L氯化物正常:120-130mmol/L细胞计数（0-10）*109/L，细胞分类计数以淋巴细胞为主细菌05临床应用1、在中枢神经系统感染性疾病诊疗中的应用1．病毒性脑膜炎2．结核性脑膜炎3．病毒性脑膜炎4.真菌性脑膜炎05临床应用1、在中枢神经系统感染性疾病诊疗中的应用疾病外观凝固性蛋白质葡萄糖氯化物细胞分类细胞计数细菌化脓性脑膜炎混浊有凝块↑↑↓↓↓↓以中性粒细胞为主明显升高化脓菌结核性脑膜炎混浊可见薄膜↑↓↓↓以中性粒细胞为主中度升高结核杆菌病毒性脑膜炎透明或微混无↑正常正常早期以中性粒细胞为主，后期以淋