免疫细胞的分离技术

免疫细胞的别离2024/11/71.免疫细胞1、概念直接参与免疫应答及与免疫应答相关的所有细胞。2、分类＊单核吞噬细胞系统：单核细胞/巨噬细胞 树突状细胞〔DCs)＊淋巴细胞系统：T淋巴细胞〔Th/Tc) B淋巴细胞NK细胞＊粒细胞系统:中性粒细胞 噬酸性粒细胞 噬碱性粒细胞2024/11/72.免疫细胞的别离人外周血单个核细胞的别离淋巴细胞的别离免疫细胞亚群的别离2024/11/73.细胞别离原理细胞的大小和比重细胞外表标志细胞黏附于各种物质外表的特性2024/11/74.一、人外周血单个核细胞的别离

——Ficoll分层离心法人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC):Monocyte、Lymphocyte。原理：血液中各细胞成分的比重不同，经离心沉淀，即可在分层液与血浆之间获得比较纯的单个核细胞，其中淋巴细胞占90%以上。

2024/11/75.不同细胞密度不同

红细胞和多形核白细胞1.092

单个核细胞1.070

分层液1.077

2024/11/76.一、人外周血单个核细胞的别离

——Ficoll分层离心法

Ficoll分层液：蔗糖聚合物+泛影葡胺，密度1.077+0.001g/L。2024/11/77.二、淋巴细胞的别离

尼龙棉柱法E花环别离法补体细胞毒法免疫荧光法

2024/11/78.二、淋巴细胞的别离

——尼龙棉柱法原理：B细胞和单核细胞具有易黏附的特性，将淋巴细胞悬液加至尼龙纤维柱上，37℃作用1~2h后，洗脱的为非黏附性的T细胞。PBMC尼龙纤维棉柱B细胞单核细胞T细胞2024/11/79.二、淋巴细胞的别离

—E花环别离法〔纯化T细胞〕原理＊成熟T细胞外表有绵羊红细胞受体〔E受体，CD2分子〕，可和SRBC形成E花环，B细胞那么无。＊E花环比重大，沉淀，经别离液别离来。＊E花环周围的绵羊RBC可用低渗法除去。.三、免疫细胞亚群的别离免疫磁珠别离法流式细胞术2024/11/711.三、免疫细胞亚群的别离

—免疫磁珠别离法原理：将抗体交联于磁珠外表形成免疫磁珠〔Immunomagneticbead，IMB〕，免疫磁珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连，在高强度、梯度磁场中到达细胞磁性别离的目的。2024/11/712免疫细胞的别离.三、免疫细胞亚群的别离

—免疫磁珠别离法1.直接法：抗细胞外表分子抗体+磁性微球免疫磁珠+细胞悬液与免疫磁珠结合的细胞2.间接法：第二抗体+磁性微粒第一抗体+细胞特定细胞...免疫磁珠法分选装置.三、免疫细胞亚群的别离

—流式细胞术〔FlowCytometry，FCM〕FCM将免疫荧光技术应用于流式细胞仪，对单个细胞的外表标志〔抗原或受体〕进行快速、精确的分析和自动检测，并将不同类型的细胞分选收集。原理：细胞经荧光染色后，通过高速流动系统，细胞排成单行，逐个流经检测区。当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声震动液流，使液流段裂成一连串的均匀小滴，每个小滴内最多含一个细胞，细胞经激光束照射产生荧光和散射光，由光电倍增管接收，转换成脉冲信号，数据经电脑处理，分辨细胞类型。2024/11/717.流式细胞仪工作原理2024/11/718.流式细胞仪2024/11/719.免疫细胞的别离人外周血单个核细胞的别离——Fi