第一节 红细胞检验课件

第一节红细胞检验骨髓造血干细胞---------红系祖细胞--------原红细胞----早幼----中幼----晚幼------网织红细胞--------成熟红细胞造血微环境Epo第一节红细胞检验

红细胞在正常情况下几乎占血容量的1/2，平均寿命是120天，每天约有8%的衰老和退化变性的红细胞经脾破坏，血红蛋白降解，可参与铁、胆色素、蛋白质代谢和血红蛋白的重新合成。红细胞外形：双凹圆盘形，平均直径7.2um，厚约2um，无核主要成分（除水外）：血红蛋白占34%----能结合多重气体，主要是O2和CO2，并协同维持酸碱平衡。第一节红细胞检验红细胞计数一、显微镜计数法

1.试剂Hayem稀释液：氯化钠---调节渗透浓度硫酸钠---调节渗透浓度，防止红细胞聚集氯化高汞---防腐剂，有毒缺点：如遇高球蛋白血症或自身凝集素增高患者，红细胞易凝集或形成串钱状，影响计数。第一节红细胞检验操作

a.取小试管一支，准确加入红细胞稀释液2.0ml。

b.毛细血管采血，取血10ul，稀释200倍。

c.混匀，充池，静置2min后以低倍镜计数中间大方格的四角和中央5个中方格内的红细胞计算红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5×10×200×106/L

或×1012/L5个中方格内红细胞数100第一节红细胞检验报告方式

RBC（/L）=.×1012/L注意事项

a.红细胞数量较多，在计数时应按计数原则计数

b.防止血液凝固，并要充分混匀正常参考值男性:（4.00-5.50）×1012/L女性:（3.50-5.00）×1012/L新生儿:（6.00-7.00）×1012/L第一节红细胞检验血红蛋白测定血红蛋白结构：由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。空间结构：每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链每条肽链包裹1个亚铁血红素，形成具有四级空间结构的四聚体。第一节红细胞检验分类：（每个珠蛋白分子含两条α链和两条非α

链）正常人：HbA（α

2β2）占90%成人主要血红蛋白

HbA2（α

2δ2

）占2%-3%成人次要血红蛋白

HbF（α

2γ2

）占2%以下胎儿主要血红蛋白注意事项：1.如α-链或β-链合成障碍，使三种正常血红蛋白比例异常，即各型地中海贫血；如多肽链发生氨基酸置换、丢失、加长，称为血红蛋白病。

2.病理情况下可出现硫化血红蛋白SHb第一节红细胞检验一、氧化高铁血红蛋白法

由国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐，并经WHO确认为血红蛋白测定的参考方法。

主要优点：操作简单，结果稳定可靠，试剂容易保存，能测定除SHb以外的所有血红蛋白，并易于建立质控。第一节红细胞检验原理除SHb外，Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CN-结合，生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白

HiCN，吸收峰为λ540nm毫摩尔消光系数为

44L·mmol-1·cm-1

。因此根据标本的吸光度，即可求得血红蛋白总量（不含SHb）。第一节红细胞检验器材和试剂

a.分光光度计、移液管、微量吸管、试管等

b.血红蛋白转化液操作

a.取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静置5分钟。

b.用分光光度计比色。波长540nm，以空白转化液调零，测定吸光度“A”。第一节红细胞检验计算

Hb（g/L）=A××251＝A×367.76445844×1000注意事项：

a.KCN为剧毒药品，要小心对待，实验完后要用次氯酸钠溶液处理后才能弃倒。

b.血红蛋白转化液不能贮存在塑料瓶中，否则CN-下降使结果偏低。

c.没有符合标准的分光光度计，应用HiCN参考液，绘制标准曲线，求出K值=∑A（理论值）/∑A（测定值）。第一节红细胞检验正常参考值成年男性：120-160g/L

成年女性：110-150g/L

新生儿：170-200g/L70岁以上老年男性：94.2-122.2g/L70岁以上老年女性：86.5-111.8g/L第一节红细胞检验红细胞计数和血红蛋

白测定的临床意义

红细胞与血红蛋白的增减不一定成比例，如大细胞性贫血患者的RBC往往较Hb减少显著；而小细胞性贫血患者则相反。一、红细胞和血红蛋白增高标准：成年男性RBC＞6.0×1012/L,Hb＞170g/L

成年女性RBC＞5.5×1012/L,Hb＞160g/L第一节红细胞检验相对增高因脱水血液浓缩所致。如严重腹泻、大面积烧伤等绝对增高组织缺氧骨髓幼红细胞有丝分裂

RBCEpo刺激肾第一节红细胞检验生理性升高高原生活和剧烈运动，新生儿病理性升高严重的慢性心肺疾病继发性红细胞增多症真性红细胞增多症为原发性红细胞增多症，属造血干细胞疾病长期组织缺氧第一节红细胞检验二、红细胞和血红蛋白减低生理性贫血妊娠中晚期：血容量增加，血液稀释

6个月至2岁：血容量增加速度大于RBC与Hb的生成有些老年人：摄取、利用营养和造血功能减退病理性贫血红细胞的丢失、破坏，造血原料不足，骨髓造血功能障碍等原因分级：轻度贫血：成年男性＜120g/L成年女性＜100g/L

中度贫血：Hb＜90g/L重度贫血：Hb＜60g/L

极度贫血：Hb＜30g/L第一节红细胞检验红细胞比积测定定义：红细胞比积（Hct、PCV）：又叫红细胞体积分数，指在一定条件下经离心沉淀压紧的红细胞在全血标本中所占体积的比值。第一节红细胞检验温氏（Wintrobe）法材料和试剂

Wintrobe管：长110mm，内径3mm，自下到上有0-100mm刻度

Pasteur吸管：吸管下端细长，上部膨大，顶端配有橡皮乳头帽。可用带长穿刺针的注射器代替。离心机

EDTA盐干燥抗凝管第一节红细胞检验操作

a.采静脉血标本2ml，立即放入抗凝管中，混匀。尽量用空腹血。

b.充分混合血标本2分钟以上，使RBC分布均匀，Hb安全氧合。

c.将吸管尖端深入Wintrobe管管底，自下而上慢慢将血放入管内到100mm刻度处。要避免充入气泡。

d.以3000r/min的速度离心半小时。离心后血液分为五层（从上至下）：最上层为血浆；白色乳糜层主要使血小板；灰红色层为白细胞和有核红细胞；呈黑色一薄层为被白细胞代谢还原成的还原血红蛋白层；最下层为含氧血红蛋白层。

e.读取以黑色红细胞层为准的红细胞柱高，除以100。第一节红细胞检验正常参考值成年男性：0.40-0.50成年女性：0.37-0.48临床意义

a.红细胞比积增高生理性增高：高原生活、剧烈运动、新生儿病理性增高：原发性和继发性红细胞增多症、脱水、烧伤

b.红细胞比积减低各种贫血

c.根据Hct了解血液浓缩程度

d.Hct是计算MCV、MCHC的基础数据之一

e.Hct是影响全血粘度的决定性因素之一第一节红细胞检验红细胞的其它参数

通过红细胞比积、计数红细胞、测定血红蛋白量这三个数据，间接计算出平均红细胞容积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC），以便分析病人红细胞形态特征，有助于贫血的分类与鉴定。第一节红细胞检验一、平均红细胞容积（MCV）指红细胞群体中各个红细胞体积的平均值单位：fl（10-15L）

MCV=×1015flHctRBC二、平均红细胞血红蛋白量（MCH）指红细胞群体中各个红细胞血红蛋白含量的平均值单位：pg（10-12g）

MCH=×1012pgHb(g/L)RBC（L-1）第一节红细胞检验三、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）指测Hct时被压紧的RBC的血红蛋白浓度（g/L）

Hb(g/L)MCHC=Hct三种平均值的正常参考值见书66页三种平均值的临床应用见书66页第一节红细胞检验四、红细胞体积分布宽度（RDW）定义：是反映周围血红细胞间体积差异的参数，通过变异系数定量的表示红细胞体积分布的离散程度。原理：血细胞自动分析仪通过电阻的改变，产生脉冲信号的强弱。正常参考值：成人：≤15.0%

新生儿：男≤15.9%女≤16.2%第一节红细胞检验临床意义：

a.与MCV联合应用于贫血的形态学分类

b.用于缺铁性贫血的筛选诊断

c.用于缺铁性贫血与轻型珠蛋白生成障碍性贫血鉴别诊断。第一节红细胞检验红细胞形态检验一、正常形态在良好的血涂片上，正常红细胞的大小、形态较为一致，平均直径7.2um，呈桔红色圆盘状。向心性浅染。二、大小异常

1.红细胞大小不均红细胞直径相差一倍以上，常见于各种重症增生性贫血，尤其见于重症巨幼细胞贫血。第一节红细胞检验小红细胞直径小于6um者称为小红细胞，正常人偶见。提示血红蛋白合成障碍，可能由于缺铁和珠蛋白代谢异常所致。见于缺铁性贫血和珠蛋白生成障碍性贫血。常伴有中心浅染区扩大。大红细胞直径大于10um，见于溶血性贫血（由于不全成熟的红细胞增多）及巨幼红细胞性贫血（是由于叶酸或维生素B12缺乏，DNA合成障碍，血红蛋白合成过剩，脱核后形成大红细胞或巨红细胞）。第一节红细胞检验巨红细胞直径大于15um，见于巨幼细胞贫血。细胞中心浅染区消失。三、形态异常

1.球形红细胞球形红细胞直径小于正常，厚度增加常大于2um，无中心浅染区，似球形。常见于遗传性球形红细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病及红细胞酶缺陷所致溶血性贫血等。第一节红细胞检验椭圆形红细胞椭圆形红细胞呈卵圆形、杆形，长度可大于宽度3-4倍，是细胞膜缺陷所致，在遗传形椭圆形红细胞增多症病人血涂片中此细胞可在25%以上。靶形红细胞中心区和细胞周缘染色深，其间为不染色的苍白环。是由于Hb含量不足而且分布不均。见于低色素性贫血，尤其是珠蛋白生成障碍性贫血。第一节红细胞检验棘状红细胞红细胞表面有刺状突起，大小不一、形态各异。常见于遗传性β脂蛋白缺乏症及脾切除、酒精中毒性肝病、尿毒症。5.其它异形红细胞第一节红细胞检验四、染色异常

1.低色素性红细胞：血红蛋白含量低，中心浅染区扩大。常见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁粒幼细胞贫血。

2.高色素性红细胞：血红蛋白含量高，染色深，中心浅染区缩小或消失。见于巨幼细胞贫血。

3.嗜多色性细胞：属于尚未完全成熟的红细胞，细胞较大，由于胞浆中含有多少不等的嗜碱性物质RNA而被染成灰蓝色。见于白血病、溶血性贫血。

第一节红细胞检验五、结构异常

1.嗜碱性点彩红细胞：指在瑞氏染色下，胞浆内存在嗜碱性黑蓝色颗粒的红细胞，属于未完全成熟红细胞，颗粒大小不一、多少不均。常作为铅中毒诊断筛选指标。

2.染色质小体：位于成熟或幼红细胞的胞浆中圆形，1-2um，紫色，为核残余物，常见于巨幼细胞贫血、溶血性贫血等。

第一节红细胞检验3.卡波氏环：在成熟或幼稚红细胞胞质内，呈紫红色线圈状或8字形，可能是胞浆中脂蛋白变性，见于巨幼细胞性贫血和铅中毒。

4.有核红细胞：即幼稚红细胞，出现在外周血为病理现象，见于各种溶血性贫血、白血病。

第一节红细胞检验网织红细胞计数一、定义：是未完全成熟的红细胞，是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞之间的过渡型细胞。其胞浆内还残存多少不等的嗜碱性物质（RNA），经灿烂甲酚蓝、新亚甲蓝等活体染色法染色，嗜碱物质凝成颗粒，其颗粒又联缀成线，而构成浅蓝或深蓝的网织状结构，称网织红细胞。第一节红细胞检验二、染色原理网织红细胞内RNA的磷酸基（带负电荷）能与灿烂甲酚蓝、新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基（带正点荷）结合，形成核酸与碱性染料复合物的多聚体，凝成颗粒，其颗粒又联缀成线，而构成浅蓝或深蓝的网织状结构，凡含有两个以上深染颗粒（后具有线网状结构）的无核红细胞，即为网织红细胞。第一节红细胞检验三、器材和试剂

1.标准生物显微镜、试管、Miller窥盘（直径19