检验科腺苷脱氨酶测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-017版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第4页共4页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-01血清腺苷脱氨酶（ADA）测定标准操作规程1检验申请血清腺苷脱氨酶测定,体液生化测定,各种体液腺苷脱氨酶测定，应需要可以单独申请或作为生化组套的一个项目申请。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2体液腺苷脱氨酶：收集体液,EDTA-Na2抗凝。2.1.3检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.4急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.5标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.6下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。2.3.2血清或血浆标本均可，但现在主张一律用血清。如用血浆，多主张用EDTA-Na2(1mg／mL)抗凝。3、方法原理腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成黄苷。黄苷在PNP作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD）作用下转化为尿酸和过氧化氢（H2O2）。H2O2与EHSPT和氨基安替比林（4-AA）反应生成有色染料，产物的颜色与ADA活性成正比。4、试剂及其他用品4.1试剂：腺苷脱氨酶测定(连续监测法)试剂盒（货号AD7553），由北京利德曼生化技术有限公司出品。4.2试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定14天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀，表明试剂已变质，不能继续使用。4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：R1：Tris缓冲液50mmol/L，4-氨基安替比林4mmol/L，PNP100U/L，XOD700U/L，过氧化物酶2000U/L；R2：Tris缓冲液50mmol/L，腺苷10mmol/L，EHSPT2mmol/L。5校准品与校准模式校准品：不使用校准品，以有色醌的双波长（546/800nm）毫摩尔消光系数计算ADA活性。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。9主要分析参数参见说明书。10、结果计算计算公式：ADA(U/L)＝公式中ΔA/min即单位时间中吸光度降低的值，VT为总反应体积ml（试剂总量＋标本量），Vs为标本体积ml，l为比色皿光径cm，ε为有色醌的546/800nm测定的毫摩尔消光系数。仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：0～200U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12、操作性能12.1精密度：批内CV<5.0%，批间CV<6.0%。12.2线性范围：0～200U/L。12.3方法的有限性及干扰因素：内源性干扰物溶血为10g/L、脂血4.5mmol/L、黄疸513umol/L、抗坏血酸17mmol/L对测试结果无明显影响。12.4灵敏度：ADA浓度为：25U/L时，吸光度变化率ΔA546nm/min为0.009。13参考值及医学决定水平参考值：血清：4～18U/L14、临床意义本试剂盒用于检验血清和体液中ADA活性。ADA是催化腺苷脱氨基生成的鸟苷，该酶主要分布于人体淋巴组织，急性肝炎、酒精肝、慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者ADA活性明显偏高。因此，该项指标与ALT、GGT联用会在肝病诊断方面提供重要依据。ADA活性测定也用于结核性脑膜炎、结核性胸腹膜炎鉴别诊断具有很高的临床价值。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。16威胁生命的“紧急值”及报告规定通常无威胁生命的“紧急值”17有关引用程序与文件17.1Abbott全自动生化分析仪仪器标准操作规程。