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文档简介
目录
实验室人员进出实验室
实验室检测样品采集
实验室检测样品包装和运送
实验室检测样品接收
样品检测操作规程
电气设备操作规程
实验室消毒剂配制标准操作规程
无菌间使用标准操作规程
实验室废弃物处理标准操作规程
实验室消毒标准操作程序
实验室意外事故处理
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
检验科实验室人员进出实验室
1目的
制定检验科实验室人员进出的标准操作程序,保障实验室生物安全。
2适用范围
适用于检验科实验室人员进出程序。
3职责
实验室工作人员执行本程序的规定。实验室负责人负责监督执行。
4规程要求
4.1进入程序
实验室人员需将外衣挂入(避免将外衣与工作服混放),穿上工作服,按要求戴手
套、口罩等防护用品方可进入实验室。
4.2退出程序
工作结束后,实验室人员在实验室将一次性口罩、手套、鞋套等放入指定容器。先
用0.5%新洁尔灭对手进行消毒,再用消毒肥皂洗手。在指定区域脱下工作服,必要时
进行紫外消毒。实验室人员退出实验室后,必须将实验室入口门关好,方可离开实验
室。
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
实验室检测样品采集
1目的
为保障检测实验的顺利进行,规范采样程序,防止病原微生物在实验室采样过程
中产生污染。
2适用范围
适用于实验室内采集、处理动物样品。
3职责
3.1采集检测样品的工作人员在采集过程中应当防止病原扩散,并对样本的来源、采
集过程和处理方法等作详细记录。
3.2检验人员必须严格按照本操作规程操作,不可擅自做出超出本规程的操作,所有
实验人员对所从事的工作负相应的责任。
4过程要求
4.1工作条件
4.1.1具有采集、处理样品所需要的生物安全防护设备;
4.1.2具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员;
4.1.3具有有效的防止病原扩散的措施;
4.1.4具有保证检测样品质量的技术方法和手段。
4.2实验材料
准备灭菌的解剖器械(剪刀、镜子、手术刀、大刀、斧头等)、灭菌试管、平皿
或自封袋、载玻片、棉签、营养肉汤、30%,50%甘油盐水缓冲液、加抗生素的PBS(病
毒保存液)、50%甘油磷酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL的离心管、1.5mLEP
管、记号笔、签字笔、防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、
75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消毒药品、采样单等。
4.3活畜样品的采集
4.3.1血清样品的采集4.3.1.1采血方法
对采血部位的皮肤先剃(拔)毛,碘酊消毒,75%的酒精消毒,待干燥后采血。
采血方法推行生猪站立式前腔静脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血,采血过程
严格无菌。
4.3.1.2采血数量
单一病种抗体监测的每头(只)采集2〜3mL全血,多病种抗体检测的每头(只)
采集5〜10mL全血。
4.3.1.3全血保存
采集好的全血转入盛血试管,斜面存放,室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱,
送实验室。从全血采出到血清分出的时间不超过10h。
4.3.1.4血清分离
凝固全血在室温2〜4h后,有血清析出时,用无菌针剥离血凝块,然后放入46
冰箱4〜8h后,待大量血清析出时,吸出血清。必要时经离心机3000rpm、30min离
心,吸出血清。分离的血清,一般不加防腐剂。血清若在1〜2周内即可检验,可放
在4c冰箱内保存;如果保存时间较长,应放在-20C〜-80C冰箱内保存。运送血清
时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送。
4.3.2全血样品的采集
全血采集后应直接注入盛有抗凝剂的试管中,立即摇动,充分混合。也可将全血
液注入盛有玻璃珠的灭菌瓶中,立即连续振荡脱纤维蛋白。
4.4活禽样品的采集
咽喉拭子的采集:将棉签插入喉头口及上颗裂处来回刮3〜5次取咽喉分泌液,
泄殖腔拭子的采集:将棉签插入取泄殖腔转2〜3圈并沾取少量粪便,再将咽喉拭子、
泄殖腔拭子一并放入盛有0.8〜1.0mL加有抗生素PBS的EP管中,加盖,编号。
4.5病死(屠宰)畜禽样品的采集
4.5.1解剖前检查
急性死亡的牛、羊、猪、马等动物,解剖之前应作临床检查,疑似炭疽病的应采
血、镜检,排除炭疽病时,方可解剖。动物死亡后应在6h内进行剖检。解剖人员要
做好自我防护工作。
4.5.2肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏样品的采集
在肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏有病变的部位各采取2〜3cm的小方块,
分别置于灭菌的试管或平皿中。其他畜禽采集整个心脏,置于自封袋中。细菌分离样
品的采集可用烧红的刀片烫烙脏器表面,在烧烙部位刺一孔,用灭菌后的伯金耳伸入
孔内,取少量组织或液体,作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。
4.5.3脑、脊髓样品的采集
取脑、脊髓2〜3cm3浸入50原甘油盐水中或将整个头部(猪、牛、马除外)害U下,
用消毒纱布包裹,置于不漏水的容器中。
4.5.4肠、肠内容物及粪便样品的采集
肠样品的采集:选择病变最严重的部分,将其中的内容物弃去,用灭菌的生理盐
水轻轻冲洗后,置于试管中。肠内容物样品的采集:烧烙肠壁表面,用吸管扎穿肠壁,
从肠腔内吸取肠内容物,放入盛有30%甘油盐水中或者直接将带有粪便的肠管两端结
扎,从两端剪断。粪便样品的采集:用棉签插到直肠黏膜表面采集粪便,然后将拭子
放入盛有30%甘油盐水中。
4.5.5液体病料样品的采集
采集胆汁、脓、粘液、关节液、水泡液等样品时,用药物或烫烙法消毒采样部位,
用灭菌吸管(毛细吸管、注射器)经消毒部位插入,吸取内部液体,然后将病料注入
灭菌试管中,加盖。也可用接种环经消毒部位插入,提取病料直接接种在培养基上。
4.5.6胎儿样品的采集
取流产后的整个胎儿,装入自封袋或不透水塑料薄膜中。
4.5.7皮肤样品的采集
用清水清洗病变皮肤后,取病变皮肤3〜5g放入灭菌小瓶中,加适量50%甘油磷
酸盐缓冲液(PH7.4),加盖密封。
4.5.8死(屠宰)禽样品的采集
死(屠宰)禽样品的采集除按上述方法采集,也可将整个死禽装入不透水塑料薄
膜袋或自封袋中或其他容器内。
4.6组织样品采集完后的无害化处理
活畜禽、病死畜禽组织样品采集完后,应做好样品外包装和环境消毒以及病死畜
禽及其产品的无害化处理。
4.7样品编号、抽样单填写
4.7.1样品编号
每头动物的不同部位的组织样品应单独包装。包装好后,在样品袋或平皿外贴上
标签,标签注明样品名、样品编号、采样日期等。采集好不同部位的样品后,同一动
物的样品集中包装。
4.7.2采样单填写
可根据具体要求填写。
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
实验室检测样品包装和运送
1目的
维护检测样品的质量,防止病原的泄漏和扩散,保障样品检测的顺利开展。
2适用范围
适用于检测样品的包装和运送。
3职责
3.1操作者必须严格按照本程序操作,不可擅自做出超出本程序的操作,所有实验人
员对所从事的工作负相应的责任。
3.2实验室负责人负有对样品包装、运输的监督和管理职责,并监督检查相关工作人
员的安全工作程序和行为。
4过程要求
拟运输的样品,要求严密包装,外表加以消毒,编号、登记后,贴上“生物危险”
标识,并严防标识脱落。样品必须经三层包装。
4.1样品的包装
4.1.1内包装
4.1.1.1必须是不透水、防泄漏的主容器,保证完全密封。
4.1.1.2必须是结实、不透水和防泄漏的辅助包装。
4.1.1.3必须在主容器和辅助包装之间填充吸附材料。吸附材料必须充足,能够吸收
所有的内装物。多个主容器装入一个辅助包装时,必须将它们分别包装。
4.1.1.4主容器的表面贴上标签,注明样品类别、编号、名称、数量等信息。
4.1.1.5相关文件,例如毒种或样本数量表格、危险性声明、信件、毒种或样本鉴定
资料、发送者和接收者的信息等应当放入一个防水袋中,并贴在辅助包装的外面。
4.1.2外包装
4.1.2.1外包装的强度应当充分满足对于其容器、重量及预期使用方式的要求。
4.1.2.2外包装应当印上生物危险标识。4.1.3包装要求
4.1.3.1液体或者固体样品
在辅助包装周围必须放置冰、干冰或者其他冷冻剂,或者按照规定将冷冻剂放在
由一个或者多个完整包装件组成的合成包装件中,内部要有支撑物,干冰或者干冰消
耗掉以后,仍可以把辅助包装固定在原位置上。如果使用冰,包装必须不透水;如果
使用干冰,外包装必须能排出二氧化碳气体;如果使用冷冻剂,主容器和辅助包装必
须保持良好的性能,在冷冻剂消耗完以后,仍能承受运输中的温度和压力。
4.1.3.2冻干样品
主容器必须是火焰封口的玻璃安甑或者是用金属封口的胶塞玻璃瓶。在辅助包装
周围还必须放置冰、干冰或者其他冷冻剂。
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
实验室检测样品接收
1目的
规范接收检测样品,保证生物安全。
2适用范围
适用于送检样品的交接管理。
3职责
专人负责接收样品和接样的生物安全。
4过程要求
4.1检测样品由专人接收,在接收送检样品时应作好样品登记,填写《样品接收登记
表》,并对样品进行符合性检查,检查包括:
(1)样品包装、标志及外观是否完好;
(2)对照抽样单核查样品的名称、采样地点、样品数量、性状等信息;
(3)样品是否损坏、污染或已过有效期。
4.2接样人进行样品登记、保存后,报告实验室负责人安排检测工作。
4.3检验后的剩余样品,由样品保管人负责留存。
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
样品检测操作规程
1目的
为规范样品的检测,特制定本规程。
2适用范围
适用不同待检样品的检测。
3职责
3.1实验室工作人员严格依照本规程进行样品的检测。
3.2实验室负责人负责监督实验室工作人员样品的检测工作。
4过程要求
样品的检测方法应采用《作业指导书-检测标准》(GTCADC-ZYBZ-2016)规定的方
法。
5.相关文件
《作业指导书-检测标准》(GTCADC-ZYBZ-2016)
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
电气设备操作规程
1目的
为规范实验室电气设备的使用和维护,特制定本规程。
2适用范围
适用于电气设备的操作和维护。
3职责
实验室工作人员严格依照本规程进行使用电气设备。
4过程要求
4.1实验室工作人员必须熟悉仪器的性能、用途、使用方法,严格按照说明书使用,
遵守仪器操作规程。
4.2仪器使用过程中发生故障必须立即停止使用,并报告实验室负责人,及时查找原
因,尽快排除,并登记。
4.3使用完毕必须对使用过的仪器设备按相关要求去除污染,以减少污染风险。
5相关文件
《作业指导书-仪器设备操作规程》(GTCADC-ZYGC-2016)
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
实验室消毒剂配制标准操作规程
1目的
规范实验室消毒剂配制,保证消毒液的有效性和实验室生物安全。
2.适用范围
适用于检验科实验室常用消毒剂的配制。
3.职责
实验室工作人员负责常用消毒剂的配制。
4.过程要求
4.1消毒剂配制
4.1.1配制前,实验室工作人员应洗净配制容器及量具,自然晾干。按试剂配制的配
方和配质量量取所需药品。按配制要求的先后顺序加入药品,搅拌均匀配制试剂。
4.3配制过程产热的试剂待自然冷却后分装,并将填写好品名、浓度、配制时间、有
效期的标签贴于盛装容器上。做好配制记录。常用消毒剂的配方及注意事项见下表lo
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
实验室消毒剂配制标准操作规程
表1常用消毒剂种类和配制方法表
消毒剂名称用途配制方法备注
手消毒,仪器表面消量取5%新洁尔灭溶液100mL置于配制容器
0.2%新洁尔灭
毒等中,加入2400mL纯化水搅拌混匀。
称取20gNaOH固体,缓慢加入纯化水定容到强碱pH值大
2%NaOH溶液原位消毒
1000mLo于13
75%乙醇手表面消毒取750mL无水乙醇加纯化水定容到1000mLo
配制好的过
氧乙酸需室
冰醋酸:H2O2:浓H2s04按体积比
温放置48h后
140.0:60.0:2.1配制。根据需要量分别量取所
15%~18%过氧乙使用。超过
实验室薰蒸消毒需的过氧化氢、冰醋酸和浓硫酸。置于配制容
酸20%的过氧乙
器中搅拌均匀。使用时可加入催化剂高锯酸钾
酸会发生爆
或加热。
炸。一周内用
一
兀O
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
无菌间使用标准操作规程
1目的
确保无菌室环境的无菌状态。
2适用范围
适用于无菌间空气微生物监测。
3职责
实验室工作人员负责实验室空气微生物监测和实施。
4过程要求
4.1实验室工作人员在进无菌间之前,应先用2%石碳酸或来苏尔对手进行浸泡消毒。
4.2缓冲间在每次使用前,应先打开紫外灯,紫外照射30min;工作人员在进入无菌
室前,必须于缓冲间内更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。检验用的有关器材(待
检品除外),搬入无菌室前必须分别进行灭菌消毒。
4.3将无菌间和生物安全柜的紫外灯打开照射30min后,才能进行工作。
4.4实验完毕后,用0.2%新洁尔灭消毒液擦拭生物安全柜台面,打开生物安全柜内紫
外灯,照射30min。同时无菌间和缓冲间的紫外灯一并打开,照射30min。
4.5工作人员在缓冲间脱下工作服、工作帽及工作鞋。
4.6适时应对无菌间进行熏蒸消毒。
4.7每月应对无菌间进行一次无菌检查记录
4.7.1营养琼脂平板的制备
按营养琼脂说明书配制营养琼脂,120℃15min高压灭菌后,冷却到50℃左右倾
倒于9cm的平板。待琼脂凝固后,放37℃48h培养,无菌生长,方可以使用。
4.7.2沉降菌数测定
先打开无菌室内紫外灯照射30min后,将备妥的营养琼脂平板5个。以无菌方式移入
操作间,置四个角落和中央各1个,开盖,暴露30分钟后将盖盖上。在37c培养箱
内倒置培养48h,取出检查。分别数出5个平板的生长菌落数并得出5个平板的平均
菌落数。
4.7.3结果判定
无菌室内的洁净级别应达到10000级,即在进行沉降菌数测定时,平均菌落数应
小于或等于3个(690mm,0.5h)。如所测得的平均菌落数小于3个,则证明该无
菌室无菌程度符合要求,否则该无菌室的无菌程度不符合要求,需要对无菌间进行彻
底消毒,直至重复检查符合要求为止。
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
实验室废弃物处理标准操作规程
1目的
制定实验室废弃物安全处理操作规程,保障实验室生物安全。
2适用范围
适用于实验室废弃物的处理。
3职责
3.1实验室工作人员严格遵守本规程,并对所从事的工作负有生物安全责任。
3.2实验室负责人负有监督和管理责任。
4过程要求
4.1实验室工作人员做好个人防护。穿好工作服、戴好手套、口罩和帽子等。
4.2实验室废弃物使用防渗专用包装容器(袋)或者防锐器穿透密闭容器收集,及
时进行无害化处理,并做好实验室废弃物处理记录。
4.3废弃物分类处理
4.3.1感染性废弃物处理
培养基、标本和菌(毒)种保存液、血液、血清、临床标本等感染性废弃物须进
行压力蒸汽灭菌。用过的一次性实验用品(包括手套、口罩、帽子等)及试管、吸管、
移液器吸头等感染性废弃物可进行压力蒸汽灭菌或消毒液浸泡24h。
4.3.2损伤性废弃物处理
针头、缝合针、解剖刀、手术刀、备皮刀、手术锯,试验玻片、玻璃试管、玻璃
安甑等能够刺伤或割伤人体的废弃的实验利(锐)器等损伤性废弃物需放入符合要求
的利器盒里,容器装满3/4后封盖,进行高压蒸汽灭菌处理。
4.3.3药物性废弃物处理
过期、淘汰、变质或者被污染的诊断试剂可采用压力蒸汽灭菌处理。
4.3.4病理性废弃物处理
动物组织及动物尸体使用两层防渗专用包装容器(袋)包装好(外包装进行彻底
的消毒处理),按要求进行焚烧、深埋或送往无害化处理场处理。做好废弃物处理记
录。
4.3.5化学品废弃按组分收集后,倒入专用化学废弃物收集桶内,集中处理。
实验室生物安全标准操作规程(SOP)
—
实验室消毒标准操作规程
1目的
保护实验室的生物安全,防止病原逃逸。
2适用范围
实验室日常清洁,实验过程中产生的污染废弃物、使用过的防护装备及设施设备
等的消毒。
3职责
实验室工作人员按照本标准进行日常消毒。
4过程要求
4.1仪器设备表面:用0.2%新洁尔或0.1%~0.2%有效氯消毒液擦拭,30min后再用清
洁的湿抹布擦拭2次。
4.2废弃的病毒材料和操作过程中使用的一次性耗材先置于2%NaOH溶液浸泡2h,按
照废弃物的处理程序处理。
4.3生物安全柜台面:用0.5%新洁尔、0.1%~0.2%有效氯等消毒液浸湿的无纺抹布擦
拭,30min后再用清洁的湿抹布擦拭2次。使用生物安全柜前后,要用紫外线照射消
毒30min,,
4.4个人防护装备:工作鞋、橡胶手套可用0.1%〜0.2%有效氯消毒液浸泡2h,工作
衣帽和口罩高温高压消毒后清洗。
4.5手消毒:用75%乙醇进行消毒。
4.6地面及墙壁:用
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