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DB34DB34/T2404—2015猪丹毒杆菌检验规程Protocolofexaminationforswineerysipelas安徽省质量技术监督局发布I本标准起草单位：安徽农业大学、安徽省猪病监测工1GB/T14926.43-2001实验动物NY/T566猪丹毒诊断技术3.4冰箱：2℃~5℃。2检样显微镜检查显微镜检查直接涂片马丁肉汤血液或血清琼脂平板革兰氏染色选取可疑菌纯培养镜检猪丹毒杆菌直接涂片马丁肉汤血液或血清琼脂平板革兰氏染色选取可疑菌纯培养镜检猪丹毒杆菌病理变化染色镜检分离培养血清型鉴定6.1.1急性败血型猪丹毒可采取肾、脾、肝、心血、淋巴结；亚急性疹30.4×0.8～2.5μm，无芽孢，无荚膜，无鞭毛，常单独或经马丁肉汤37℃培养24h后，再转种于血液琼脂或血清琼脂培养新霉素（400μg/mL）或万古霉素（70μg/mL抑制其他6.3.3在血清琼脂上菌落特征细小、圆形、透明、凸起、灰白色、有6.3.4在血液琼脂上菌落特征同6.3.3，并形成绿色的狭窄溶血环(α溶血）。6.3.5在马丁肉汤中生长特征轻度混浊，振动试管呈现出云雾状，有6.5.2将肾、脾、肝、淋巴结和疹块部皮肤磨碎，用灭菌生理盐水制成1:5～1:10小鼠出现精神萎顿、拱背、毛乱、停食，3～7天死亡；死亡的小若需鉴定血清型时可按照NY/T566的4型触酶VP及甲基鸽α------+-β++++++-+8.1综合以上形态、结构与染色，培养特性，生化反应8.4符合8.1、8.2，且根据6.5培养基的配制A.1.1成分A.230％甘油缓冲盐水溶液A.2.1成分A.3.1成分A.4.1成分6将蛋白胨液与肉浸液混合，加热至80℃,加冰乙酸1mL，摇匀，再煮沸5min。加15％氢氧化A.5硫酸亚铁琼脂A.5.1成分硫代硫酸钠加热溶解，校正pH，分装试管，115A.6胰蛋白胨水A.6.1成分7PCR扩增仪、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管、水浴锅、高速冷冻离心P1：5′-CGATTATATTCTTAGCACGCACGCAACG-3′P2：5′-TGCTTGTGTTGTGATTTCTTGAC检测过程应同时做阳性和阴性空白对照。阳性对照模板为猪丹毒杆菌（G4T10），阴性空白对照为PCR反应体系：总体积为25µL，其中含有12.5µL的PCRMast8测结果电

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