复制酶复合物的结构和功能分析

1/1复制酶复合物的结构和功能分析第一部分复制酶复合物的亚基组成与相互作用 2第二部分复制酶活性位点结构与催化机制 5第三部分引物延伸反应的逐步解析 7第四部分复制酶复合物的校对机制 9第五部分复制酶复合物的转位活性 11第六部分复制酶复合物的抑制剂开发与抗病毒治疗 14第七部分复制酶复合物在DNA修复中的作用 16第八部分复制酶复合物在细胞周期调控中的角色 19

第一部分复制酶复合物的亚基组成与相互作用关键词关键要点复制酶复合物核苷酸聚合酶亚基

1.DNA聚合酶IIIα：主要负责复制领先链，具有5'→3'聚合酶活性、外切核酸酶活性（编辑/校正错误）和3'→5'外切核酸酶活性（编辑/形成尼克）。

2.DNA聚合酶IIIδ/ε：主要负责复制滞留链，具有5'→3'聚合酶活性、外切核酸酶活性（编辑/校正错误）和3'→5'外切核酸酶活性（编辑/形成尼克）。

复制酶复合物辅助因素亚基

1.解旋酶：负责解开双螺旋DNA，形成复制叉。

2.单链DNA结合蛋白（SSB）：与单链DNA结合，防止其重新形成双螺旋，为复制酶复合物提供模板。

3.滑环加载复合物（RFC）：将滑环（一种DNA夹）加载到DNA上，防止DNA聚合酶在复制过程中从模板上滑落。

复制酶复合物的夹装因子亚基

1.加载因子（γ复合物）：负责将DNA聚合酶IIIα和IIIδ/ε加载到DNA模板上。

2.滑环：一种环状蛋白质复合物，包围DNA模板，防止DNA聚合酶从模板上脱落。

复制酶复合物的剩余亚基

1.β复合物：参与复制酶复合物的组装和稳定。

2.δ复合物：与DNA聚合酶IIIδ/ε和SSB相互作用，调节复制酶复合物的活性。

复制酶复合物的相互作用

1.蛋白质-蛋白质相互作用：复制酶复合物中的亚基通过各种蛋白质-蛋白质相互作用相互作用，例如疏水相互作用、氢键和范德华力。

2.酶-底物相互作用：DNA聚合酶与DNA模板相互作用，形成酶-底物复合物。SSB与单链DNA相互作用，防止其重新形成双螺旋。

3.调控：复制酶复合物的相互作用受到多种因素的调控，例如细胞周期检查点和DNA损伤。复制酶复合物的亚基组成与相互作用

简介

复制酶复合物是一个高度复杂的多亚基蛋白机器，负责DNA复制过程。它包含多个亚基，每个亚基具有特定的功能，共同实现复制酶功能的协同作用。亚基之间的相互作用对于确保准确和高效的DNA复制至关重要。

亚基组成

真核生物的复制酶复合物由以下主要亚基组成：

*聚合酶δ(Polδ)：主要负责合成新DNA链。

*复制酶辅助蛋白(RFC)：将DNA聚合酶加载到DNA模板上。

*复制酶процессинга(PCNA)：为DNA聚合酶提供平台并稳定复制叉。

*复制因子C(RFC)：加载PCNA并调节复制过程。

*复制起始因子(ORC)：在复制起点处的DNA上组装复制酶复合物。

*辅助因子：包括PrimPol、FANCJ和REV1等蛋白质，辅助DNA复制并确保保真度。

相互作用

复制酶复合物亚基之间的相互作用通过多种机制介导，包括：

*直接相互作用：亚基直接相互作用，通过特定结构域或相互作用界面结合。例如，Polδ和RFC之间的相互作用涉及PCNA结合域。

*间接相互作用：亚基通过中间分子（例如PCNA）间接相互作用。PCNA充当支架，将Polδ、RFC和其他亚基聚集在一起。

*动态相互作用：亚基之间的相互作用是动态的，随着复制过程的变化而变化。例如，Polδ与RFC的相互作用在复制启动和延伸的不同阶段发生变化。

ORC-PCNA-RFC核心复合物

ORC-PCNA-RFC复合物是复制酶复合物的核心，负责复制起点处的组装和激活：

*ORC：六亚基起源识别复合物，识别复制起点并募集后续因素。

*PCNA：环形三聚体，为DNA聚合酶提供平台并促进复制叉稳定性。

*RFC：五亚基复合物，将PCNA加载到DNA上，促进Polδ的结合。

ORC与PCNA相互作用，PCNA又与RFC相互作用，形成一个环形结构，招募Polδ并启动DNA合成。

Polδ-RFC相互作用

Polδ-RFC相互作用对于DNA合成的准确性至关重要：

*Polδ3亚基：与RFC的大亚基相互作用，将聚合酶加载到DNA模板上。

*Polδ4亚基：与RFC的小亚基相互作用，协调聚合酶的合成和校对活性。

辅助因子

辅助因子与复制酶复合物相互作用，提供额外的功能：

*PrimPol：在引物合成的第一步中发挥作用。

*FANCJ：参与DNA链断裂修复，确保复制保真度。

*REV1：执行跨链转座合成，在DNA损伤位点维持复制叉进展。

结论

复制酶复合物亚基组成和相互作用的协同作用对于精确且高效的DNA复制至关重要。ORC-PCNA-RFC核心复合物负责复制的启动和激活，而Polδ-RFC相互作用协调聚合酶的功能。辅助因子提供额外的支持，确保复制保真度和处理DNA损伤。对这些相互作用的深入了解有助于阐明DNA复制的机制并识别对复制过程至关重要的靶标。第二部分复制酶活性位点结构与催化机制复制酶活性位点结构与催化机制

DNA聚合酶的结构组成

真核生物复制酶是一种多亚基蛋白复合物，由多个亚基组成。其中，DNA聚合酶δ和ε是负责领先链和滞后链合成的两个主要亚基。

*DNA聚合酶δ：负责领先链的连续合成，由4个亚基组成：Polδ1（催化亚基）、Polδ2、Polδ3和Polδ4。

*DNA聚合酶ε：负责滞后链的断续合成，由3个亚基组成：Polε1（催化亚基）、Polε2和Polε3。

活性位点结构

DNA聚合酶的活性位点位于催化亚基的核心中，呈手指状结构。它由两个亚域组成：

*пальма亚域：负责与模板DNA结合和底物选择。

*手指亚域：负责催化磷酸二酯键的形成。

活性位点包含几个关键残基，它们在催化机制中发挥重要作用：

*模板识别残基：与模板DNA的碱基配对，确保正确碱基配对。

*催化残基：催化磷酸二酯键的形成，包括两个天冬酰胺残基和两个镁离子。

*底物识别残基：与入核苷三磷酸的末端磷酸基团结合，确保正确的底物选择。

催化机制

DNA聚合酶的催化机制遵循一个两步反应过程：

第一步：底物结合和模板识别：

*入核苷三磷酸与活性位点的底物识别残基结合。

*模板DNA的末端碱基与活性位点的模板识别残基配对，确保正确的碱基配对。

第二步：催化磷酸二酯键形成：

*活性位点的两个镁离子协调入核苷三磷酸的α-磷酸基团和模板DNA的3'-羟基。

*催化残基（天冬酰胺）通过质子传递机制促进磷酸二酯键的形成。

*产生的新磷酸二酯键将入核苷三磷酸连接到模板DNA链上，延长了DNA链。

完成磷酸二酯键形成后，复制酶会释放新合成的DNA链，并继续沿模板DNA合成新的链。

准确性保证：

DNA聚合酶在复制DNA时具有很高的准确性。这归功于以下机制：

*碱基配对：活性位点的模板识别残基确保只有与模板DNA互补的底物才能被结合。

*底物选择：底物识别残基也确保只有正确的底物（与模板DNA匹配的入核苷三磷酸）才能被结合。

*校对活性：DNA聚合酶都具有校对活性，允许它们识别和修复合成中的错误。第三部分引物延伸反应的逐步解析关键词关键要点主题名称：引物延伸反应的起始和模板定位

1.引物结合酶（Polα-primase）复合物合成RNA引物，为DNA聚合酶延伸提供模板。

2.DNA聚合酶δ与修复酶PCNA结合，识别并结合模板DNA，定位延伸起始位点。

3.鸟巢蛋白（RFC）介导PCNA形成环状结构，稳定聚合酶与模板的结合。

主题名称：复制叉支架形成和稳定

引物延伸反应的逐步解析

引物延伸反应是复制酶复合体(replisome)的核心过程，涉及一系列精细协调的步骤，确保DNA复制的准确性和效率。以下是引物延伸反应的逐步解析：

1.引物结合

复制酶复合体识别并结合到DNA模板上的引物，引物是短的RNA或DNA片段，为新的DNA链的延伸提供了一个起点。

2.dNTP对齐

复制酶随后识别和对齐下一个互补的脱氧核苷三磷酸(dNTP)到引物末端的3'羟基基团上。正确的dNTP配对由沃森-克里克碱基配对规则决定。

3.磷酸二酯键形成

复制酶催化磷酸二酯键的形成，将新dNTP共价连接到引物链上。这个键的形成会释放焦磷酸，作为反应的副产物。

4.核苷酸添加

在磷酸二酯键形成之后，新添加的dNTP成为延伸DNA链的一部分。复制酶循环执行步骤2-4，逐个添加dNTP，根据DNA模板合成新的DNA链。

5.校对和校正

复制酶复合体包含校对机制，以确保延伸DNA链的准确性。如果错误的dNTP被加入，复制酶可以将其水解并将其从链中移除。这个过程称为校正。

6.伸长

引物延伸过程继续进行，直到合成一个与模板链互补的新DNA链。该过程由DNA聚合酶相关因子(PCNA)和其他辅助蛋白辅助完成。

7.Okazaki片段连接

在真核细胞中，引物延伸反应以约200个核苷酸的片段（称为Okazaki片段）进行。这些片段随后由DNA连接酶连接在一起，形成连续的DNA链。

8.引物去除

在引物延伸完成后，引物序列通过水解或替换被去除。在真核细胞中，这涉及RNaseH的作用，它降解RNA引物。

复制酶复合体参与

引物延伸反应由复杂的多蛋白复制酶复合体完成。该复合体包括：

*DNA聚合酶：主要酶，催化dNTP添加和磷酸二酯键形成。

*PCNA：一个环形蛋白质，增加DNA聚合酶的processivity。

*辅助因子：如RPA、SSB和RFC，辅助引物结合、dNTP加载和复制酶装配。

调控和准确性

引物延伸反应受到复杂的调控网络的调节，以确保准确性和效率。关键的调控机制包括：

*阻滞剂：抑制DNA聚合酶活性，防止复制错误累积。

*检查点：监测复制过程，并在检测到损伤或错误时暂停复制。

*DNA修复：修复DNA复制过程中发生的任何损伤。

通过逐步解析引物延伸反应，我们深入了解了复制酶复合体的机制、调控和对DNA复制准确性的至关重要的作用。第四部分复制酶复合物的校对机制关键词关键要点【校对机制】：

1.复制酶复合物中的校对机制对于维持基因组完整性至关重要。

2.复制酶复合物利用多个校对机制，包括聚合酶活性中心、外切酶活性、搭档酶和错误核苷酸结合位点。

3.校对机制可以更正插入错误、缺失错误和替换错误，确保新合成DNA序列的高准确度。

【聚合酶活性中心】：

复制酶复合物的校对机制

复制酶复合物（replisome）在DNA复制过程中发挥着至关重要的作用，其校对机制确保复制的高保真度。该机制涉及多个步骤和参与因子，共同合作以检测和校正复制错误。

核酸外切酶活性

复制酶复合物包含核酸外切酶活性，例如：

*3'→5'外切酶：位于聚合酶活性中心后方，去除新合成链的3'端不匹配碱基。

*5'→3'外切酶：催化新合成链5'端不匹配碱基的去除。

核苷酸选择性

聚合酶活性中心具有严格的核苷酸选择性，优先结合与模板链互补的核苷酸。当错误的核苷酸结合时，外切酶活性被激活以去除它。

脱氧核苷三磷酸酶活性

复制酶复合物还具有脱氧核苷三磷酸酶活性，可水解错误结合的三磷酸核苷酸，从而将其从聚合酶活性中心释放出来。

复制暂停

当检测到错配碱基时，复制酶复合物会暂停复制。该暂停是由一个夹蛋白和一个螺旋酶复合物共同协调的。

*夹蛋白：环状蛋白复合物，环绕DNA并将聚合酶固定在模板链上。

*螺旋酶复合物：解旋DNA双螺旋，暴露模板链以供复制。

错配修复

一旦复制暂停，错配修复机制就会启动：

*错配修复酶：识别并结合错配碱基，将其从新合成链中去除。

*DNA聚合酶δ/ε：在正确碱基配对的指导下合成新的核苷酸，替换被去除的错配碱基。

终产物释放和重新启动

错配修复完成后，复制酶复合物会释放新合成的DNA链，并重新启动复制。

校对机制的效率

复制酶复合物的校对机制非常高效，可以将复制错误率降低到每个10^9-10^11个核苷酸一个错误。这些机制共同作用，确保DNA复制的保真度，从而维持基因组稳定性和细胞健康。第五部分复制酶复合物的转位活性关键词关键要点【复制酶复合物的转位活性】

1.复制酶复合物能够进行转座，将一段DNA序列从一个位置转到另一个位置。

2.转座依赖于转座酶的活性，转座酶是一种催化转座反应的酶。

3.转座可能导致基因组重排和突变，在进化和疾病中发挥作用。

【转座酶的结构和功能】

复制酶复合物的转位活性

复制酶复合物，特别是真核细胞内的复制酶复合物，除具有复制DNA的基本功能外，还表现出转位活性，即在没有序列同源性的情况下，将DNA从一个基因组位置转移到另一个位置的能力。

转位机制

复制酶复合物通过一种称为“复制-转座”的机制实现转位。在复制-转座过程中，新合成的DNA链与复制酶复合物一起从亲本DNA上移除，并随后整合到非同源性区域。该整合过程涉及以下步骤：

*识别靶位点：复制酶复合物识别并结合到称为转座位点的特定DNA序列。

*末端加工：复制酶复合物加工转座位点的末端，产生粘性末端。

*整合：复制酶复合物催化粘性末端的连接，将新合成的DNA链整合到靶位点。

转位酶亚基

复制酶复合物的转位活性归因于其含有专门的转位酶亚基。这些亚基包括：

*逆转录酶：负责新合成的DNA链的合成和转移。

*整合酶：催化整合过程。

*解旋酶：解开靶位点周围的DNA双链。

转位调节

复制酶复合物的转位活性受到多种机制的调节，包括：

*转位酶亚基表达：转位酶亚基的表达水平影响转位活性。

*转座位点可用性：转座位点的可用性限制了转位事件。

*DNA甲基化：DNA甲基化可以抑制转位。

*表观遗传修饰：复制酶复合物本身以及靶基因组区域上的表观遗传修饰可以影响转位活性。

转位的生物学意义

复制酶复合物的转位活性在多个生物学过程中发挥着重要作用，包括：

*基因组重组：转位介导的基因组重组产生新的基因排列，促进遗传多样性。

*逆转录病毒的复制：逆转录病毒利用复制酶复合物的转位活性将复制的病毒RNA整合到宿主基因组中。

*转座子插入：转位子是能够自身转移的DNA序列。复制酶复合物的转位活性可以促进转座子的插入和扩增。

*基因表达调控：转位可以中断或激活基因表达，影响发育和其他生物过程。

实验技术

研究复制酶复合物的转位活性已通过多种实验技术实现，包括：

*转座位点测序：确定转座发生的位点。

*染色质免疫沉淀：鉴定与转座位点相关的蛋白质。

*转座子陷阱检测：检测转座子插入导致的基因中断。

*荧光显微镜成像：可视化转位事件。

数据

大量研究已提供了有关复制酶复合物转位活性的见解。例如：

*在人类细胞中，复制酶复合物已检测到在超过10万个位点进行转位。

*转位酶亚基的敲除会显着降低转位活性。

*DNA甲基化可以抑制复制酶复合物的转位。

*转位在发育、疾病和进化中起着至关重要的作用。

结论

复制酶复合物的转位活性是一种高度受调控的机制，在多个生物学过程中发挥着重要作用。了解复制酶复合物的转位机制对于理解基因组重组、病毒复制和基因表达调控等基本生物学过程至关重要。第六部分复制酶复合物的抑制剂开发与抗病毒治疗关键词关键要点主题名称：核苷类逆转录酶抑制剂（NRTIs）

*NRTIs是通过干扰病毒逆转录酶的功能而发挥作用的抗逆转录病毒药物。

*NRTIs与天然脱氧核苷酸类似，但缺乏3'-羟基，这会阻止DNA链的延伸，从而抑制病毒复制。

*常见的NRTIs包括齐多夫定、拉米夫定和替诺福韦。

主题名称：非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTIs）

复制酶复合物的抑制剂开发与抗病毒治疗

复制酶复合物是逆转录病毒生命周期中的关键成分，负责病毒RNA基因组的复制。开发靶向复制酶复合物的抑制剂是抗病毒治疗领域的重要策略。

HIV-1复制酶抑制剂

HIV-1复制酶抑制剂主要有两种类型：

*核苷/核苷酸类似物（NRTIs/NtRTIs）：这些类似物与复制酶的活性位点竞争，导致DNA链终止。常见的NRTIs/NtRTIs包括齐多夫定、拉米夫定和替比夫定。

*非核苷抑制剂（NNRTIs）：这些抑制剂与复制酶的非活性位点结合，导致构象变化并抑制酶活性。常见的NNRTIs包括奈韦拉平、洛匹那韦和依非韦伦。

HBV复制酶抑制剂

乙型肝炎病毒(HBV)复制酶抑制剂主要靶向病毒聚合酶活性，抑制HBVDNA的复制。常见的HBV复制酶抑制剂包括：

*恩替卡韦：一种核苷类似物，通过与复制酶的活性位点竞争导致DNA链终止。

*替诺福韦：一种核苷酸类似物，可整合到病毒DNA中，导致链终止和阻断复制。

*贝克替韦：一种Cap-dependent启动子转录抑制剂，可抑制病毒RNA转录为DNA。

其他病毒的复制酶抑制剂

其他病毒，如丙型肝炎病毒(HCV)和寨卡病毒，也有针对其复制酶复合物的抑制剂：

*丙肝病毒复制酶抑制剂：这些抑制剂主要靶向病毒NS5B聚合酶（例如索磷布韦），导致RNA复制终止。

*寨卡病毒复制酶抑制剂：这些抑制剂通过抑制NS5复制酶活性来阻断病毒RNA复制。

抑制剂开发策略

复制酶抑制剂开发遵循以下策略：

*基于结构的药物设计：利用复制酶复合物的结构信息来设计抑制剂，与酶活性位点或非活性位点互补结合。

*高通量筛选：筛选大规模化合物库，以识别对复制酶有抑制作用的候选抑制剂。

*构效关系研究：优化候选抑制剂的结构和活性，以提高其效力和选择性。

临床应用

复制酶复合物的抑制剂在抗病毒治疗中取得了显著进展。HIV-1复制酶抑制剂的联合使用实现了高度有效的抗逆转录病毒疗法(ART)，显着降低了HIV相关死亡率。HBV复制酶抑制剂有助于抑制病毒复制和改善肝功能，为慢性乙型肝炎患者提供了长期治疗方案。

展望

复制酶复合物抑制剂的不断开发和优化是抗病毒治疗的重点领域。随着对病毒复制机制的深入了解以及计算建模技术的进步，有望开发出更有效、更安全的抑制剂来应对包括HIV、HBV和HCV在内的病毒感染。第七部分复制酶复合物在DNA修复中的作用关键词关键要点主题名称：复制酶复合物在DNA损伤位点合成跨损伤的聚合

1.当DNA双链受损时，复制酶复合物能够在损伤位点进行合成，形成跨损伤(TLS)聚合物，帮助维持基因组稳定性。

2.TLS聚合物的准确性较低，但它对于复制受损DNA至关重要，因为它允许复制继续进行，防止细胞死亡或基因组不稳定。

3.TLS聚合物的合成速率和准确性受到多种因素的影响，包括损伤的类型、复制酶复合物的组成和细胞的修复机制。

主题名称：复制酶复合物在核苷酸切除修复中的作用

复制酶复合物在DNA修复中的作用

复制酶复合物是一种多亚基蛋白质机器，负责真核细胞染色体DNA的复制。在DNA修复过程中，复制酶复合物发挥着至关重要的作用。

基础修复通路

在基础修复通路中，复制酶复合物参与以下过程：

*错配修复(MMR)：MMR是纠正复制过程中发生的碱基配对错误的一条途径。当识别到错配时，MMR蛋白会募集复制酶复合物。复制酶复合物随后在错误位置处重新合成DNA链，从而替换错配碱基。

*碱基切除修复(BER)：BER是修复氧化或烷基化损伤的途径。在BER过程中，受损的碱基被DNA糖苷酶去除，产生无碱基位点。复制酶复合物随后在无碱基位点处合成新DNA，替换丢失的碱基。

*核苷酸切除修复(NER)：NER是修复大块DNA损伤（如紫外线诱导的二聚体）的途径。在NER过程中，受损的核苷酸被内切酶去除，产生缺口。复制酶复合物随后在缺口处合成新DNA，填充缺失的区域。

跨链修复通路

在跨链修复通路中，复制酶复合物参与以下过程：

*同源重组(HR)：HR是一种高保真的修复途径，用于修复双链断裂。在HR过程中，复制酶复合物合成新DNA链，使用同源染色体或姐妹染色单体作为模板。

*非同源末端连接(NHEJ)：NHEJ是一种较不精确的修复途径，用于修复双链断裂。在NHEJ过程中，复制酶复合物合成短的填补序列，连接断裂的DNA链。

保守机制

复制酶复合物在DNA修复中的作用受到保守机制的调控，可确保复制酶复合物在不同类型损伤位点靶向正确。这些机制包括：

*PCNA修饰：PCNA（增殖细胞核抗原）是一种环形多肽，与复制酶复合物相互作用。在DNA损伤处，PCNA的特定赖氨酸残基可被泛素化或SUMO化，这有助于募集特定修复因子。

*Rad18复合物：Rad18复合物是一组非催化性蛋白，与复制酶复合物相互作用。Rad18复合物有助于靶向复制酶复合物到受损DNA位点，并与其他修复蛋白相互作用。

*损伤传感器：损伤传感器是识别DNA损伤并募集修复因子的蛋白质。在DNA修复过程中，复制酶复合物与损伤传感器相互作用，确保准确靶向。

数据

*在MMR缺陷的细胞中，复制酶复合物的活性降低，导致错配积累。

*BER缺陷的细胞对氧化和烷基化剂更敏感，表明复制酶复合物在这些损伤的修复中至关重要。

*NER缺陷的细胞对紫外线辐射更敏感，这表明复制酶复合物在修复DNA双链断裂方面发挥着作用。

*HR缺陷的细胞对双链断裂更敏感，这表明复制酶复合物在同源重组中发挥着作用。

*NHEJ缺陷的细胞对双链断裂更敏感，这表明复制酶复合物在非同源末端连接中发挥着作用。

结论

复制酶复合物在DNA修复中发挥着至关重要的作用。它参与基础和跨链修复通路，并受到保守机制的调控。复制酶复合物的功能缺陷会导致DNA损伤累积，从而增加突变和癌症的风险。第八部分复制酶复合物在细胞周期调控中的角色关键词关键要点【复制酶复合物的细胞周期调控】：

1.复制酶复合物与细胞周期检查点蛋白相互作用，确保DNA复制在合适的时间点进行。

2.复制酶复合物在G1-S期和S期边界处被激活，启动DNA复制起始。

3.复制酶复合物在S期中被持续激活，以维持DNA复制进程的稳定性。

【复制酶复合物与DNA损伤反应】：

复制酶复合物在细胞周期调控中的角色

复制酶复合物在细胞周期调控中发挥至关重要的作用，确保DNA复制的准确性和有序进行。

G1/S检查点

*复制酶复合物的激活受到G1/S检查点的调控。

*丝裂原激活因子(MAPK)信号通路促进细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的活性，CDK磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)，导致其失活。

*失活的Rb释放转录因子E2F，启动细胞周期进入S期的基因转录，包括复制酶复合物组分的转录。

S期入口

*复制酶复合物的组装在S期入口发生。

*MCM蛋白helicase首先在预复制复合物(pre-RC)上加载到DNA上。

*CDK和GINS蛋白随后结合MCM蛋白，形成活跃的复制酶复合物。

S期进展

*活跃的复制酶复合物沿DNA移动，打开双螺旋体，从而使DNA聚合酶能够合成两条互补链。

*DNA合成由复制叉上的多种蛋白质协调，包括质粒连接酶、DNA聚合酶ε和δ、以及复制叉蛋白A(RPA)。

S/G2检查点

*S/G2检查点监测DNA复制的完整性。

*如果检测到DNA损伤或复制错误，细胞周期蛋白依赖性激酶1(Chk1)和Chk2会被激活。

*Chk1和Chk2磷酸化CDC25A磷酸酶，导致其失活，从而阻止细胞周期进入G2期。

G2/M检查点

*G2/M检查点确保在进入有丝分裂之前完成DNA复制。

*如果检测到未复制的DNA，细胞周期蛋白依赖性激酶1(Wee1)会被激活。

*Wee1磷酸化细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)，导致其失活，从而阻止细胞周期进入有丝