兽用生物制品中支原体检验的影响因素

在社会现代发展的新阶段，兽用生物制品质量不断提升，很多企业在生产中重视兽用生物制品中支原体检验，利用现代化各种检验手段，分析各种相关组织，获得生物材料制备药品，制定相应的兽用疫苗，有效预防相应疾病产生，也可以应用在兽类病症治疗中。本文主要分析对兽用生物制品中支原体检验的影响因素，结合当前的发展问题，探讨有效的兽用生物制品中支原体污染的有效预防策略和目前常用的检验方法，切实提升兽用生物制品支原体检验的准确率。1影响兽用生物制品中支原体检验的因素1.1原材料对兽用生物制品中支原体的检验需要按照相关检验标准和利用培养法进行。兽用生物制品中支原体可以在无细胞培养基中逐渐生长，但其有一定的营养需求，而且条件比较苛刻。在对兽用生物制品中支原体检验时，利用培养法需要选择综合性培养基，我国专用的兽药典指出，在对兽用生物制品进行支原体检验时，主要用两种实验培养基，即液体培养基和固体培养基，且培养基中包含多种营养物质。而进行支原体检验的培养基中的营养物质都是从动物体内提取的物质，这些营养物质会因生产厂家的不同而有所差异，即使是同一厂家生产的，批次不同也会有所差异，所以在实际应用前需要就厂家资质进行全面了解。培养基的敏感性还受相关物质影响，特别要注意蛋白水解物的质量。由于兽用生物制品中支原体的检验需要利用培养法，所以要选择合适的培养基，加强对培养基原材料的严格把控，在检验前提前做好各项测试，如培养基中需要各种试剂和附加成分，应该选择纯度较高的。同时培养基中所用的各种培养液，必须按照要求进行制备储存，要重点防控避免中污染。1.2培养基制备量在检验兽用生物制品中支原体时，很多检验人员会考虑成本问题，因此在利用培养法检验过程中培养基制备量较少，此时很可能会导致兽用生物制品受到支原体污染。如果在培养基中存在无机盐类，则具有一定的缓冲作用，无机盐类可以使培养基内的液体渗透压和pH值得以维持，使支原体能在培养基中有效生存。但是如果培养基内的液体较少，会导致相应参数与支原体的需求存在差异，相关数值如果过高或过低都会导致支原体群体出现膨胀萎缩，此时会改变原有的支原体代谢路径，严重时会直接导致死亡。同时，培养基内的各种无机盐在有一定的拮抗作用，需要保证无机盐类各离子有合适的配比，才能使培养基内支原体保持其生理平衡，维持生长检验符合要求。除此之外培养基内的氨基酸含量也会对支原体生长产生一定影响，氨基酸含量主要是影响支原体的代谢，如果添加量控制不好，会导致培养基内缓冲作用达不到要求，氨基酸含量不足很容易出现支原体培养失败。在实际操作制备培养基中，应该按照要求，严格按照标准完成各项步骤，根据配方要求配备各种物品，控制好添加的顺序，制备中把各物品进行溶解后，然后按照要求混合。1.3培养基灭菌方法1.3.1液体培养基利用液体培养基对兽用生物制品中支原体的检验，需要考虑某些成分不能耐受加热，所以对培养基中的血清等物质进行过滤除菌。1.3.2固体培养基利用固体培养基则需要考虑到有些成分对加热消毒有不同的耐受力，所以应该根据各种成分的特性，选择合适的方法进行消毒除菌，并保证严格按照规范操作。制备固体培养基需要严格把控两个步骤，（1）要对基础固体培养基进行高压灭菌，此时主要考虑到固体的耐热性比较好，通过设定好具体参数的高压灭菌器进行灭菌消毒，时间控制在20min左右，后续在设备温度有效降低后，及时打开设备盖子取出培养基。（2）固体培养基制备中的其他成分，如果不耐热，需要按照液体培养基的制备方法，通过过滤方式进行除菌操作。1.4培养器皿及容器检验兽用生物制品中支原体时，对培养基的要求非常高，为了达到合适的支原体培养要求，需要选择合适的器皿和容器。如果利用玻璃器皿制备培养基，必须保证选用的玻璃容器是清洁无污染的，在制备培养基前需要放入高压设备进行灭菌，还要对器皿进行干烤消毒。如果使用的器皿及容器则会导致支原体培养失败。不能达到要求，因此需要重视培养器皿及容器的准备，在应用前特别重视对玻璃器皿或容器的洗涤，以保证符合检验兽用生物制品中支原体的要求。清洗玻璃制品用的清洗剂可能会在内表面或瓶盖等部位存留，如果不重视，会影响培养基质量。为了保证兽用生物制品中支原体培养和检验顺利进行，应该对检验所用的各种培养器皿和容器的洁净程度进行检测。很多厂家由于忽视培养基制备中的玻璃器皿及容器洁净度问题，在后续开展相应兽用生物制品中支原体检验时，检验工作会受到很大的影响，导致检验质量不符合要求。目前很多厂家会利用玻璃器皿制作检验兽用生物制品中支原体的培养基，如果使用塑料制品，可能在生产中会有一定的毒素残留，而且不同的材质是需要使用不同的生产工艺，培养基器皿表面的吸附能力也会有所差异，因此，应该在培养器皿及容器各方面多加关注。2预防支原体污染兽用生物制品的有效策略2.1加强原材料的控制在兽用生物制品生产中，会利用到细胞、血清等多种原材料，这些原材料都有利于支原体生存。兽用生物制品生产中的各种原材料会受到多种支原体污染，所以在兽用生物制品中，必须保持原材料处于无菌状态，此时应该加强对原材料的污染控制，提前采取有效策略，有效阻止出现支原体污染。另外，在细胞培养时，工作人员必须保持良好的个人卫生状态，在操作中严格按照要求，以有效避免兽用生物制品被支原体污染。要在发展中逐渐建立并完善其相应管理制度，通过制度规范构建完善的检验体系，对各项细胞进行多次的严格检验，保证所有的细胞都是没有支原体污染状态。最后，在现代化发展中，需要引进新型的细胞等，需要利用各种新设备进行隔离培养，在生产制作前要进行严格检验，保证检验符合质量要求，才能进入车间。2.2加强对兽用生物制品生产环境的控制在生产车间内必须要建立完善的管理制度，日常应该按照计划进行清洁消毒，负责人员需要对内部环境进行定期检测，保证检测各项数据在合格数值范围内。日常生产中必须对各个环节进行细化管理，加强生产中的设备、物品以及人员把控，明确具体的出入路线，避免各项在发展中出现交叉感染。如果对生产车间的设备进行消毒必须要严格彻底，在对设备进行消毒时需要参考相应资料，并且提前了解生产设备使用特性，通常是通过高压灭菌方式来消毒，适用时可以对一般设备进行消毒水浸泡，必须使所有生产设备在投入生产前进行彻底消毒。进入生产环境内的所有物品，需要提前做好表面消毒，或者是把相应物品放置在紫外线灯罩区照射后，才可进入生产车间。2.3加强对人员的管理平时要规范对兽用生物制品中支原体检测的生产流程，工作人员上岗前要提前进行专业培训，要求所有进入生产车间的工作人员都必须更换符合要求的衣物，保证自身没有裸露皮肤，如果相关人员存在呼吸道症状或有皮肤病必须严格禁止进入，特别是不能让其进入的车间重点关注区域。同时，日常生产要求所有工作人员必须按照要求规范操作，保证个人操作的规范性，避免出现细节上的操作误差。比如在手术台操作中，如果手离开操作台，需要使用器皿，需要及时对各项器械进行消毒，否则很容易出现支原体污染问题。如果工作人员在操作台操作中出现流汗问题用手擦，或相应设备与人体裸露皮肤相接触，都会导致支原体出现污染。2.4加强对消毒灭菌环节的管理有效预防兽用生物制品的支原体污染，需要重视消毒灭菌环节，严格按照要求进行消毒灭菌，避免各种生物制品出现污染物，减少微生物的滋生。在兽用生物制品生产过程中所用的各项器械和物品，都必须按照要求进行消毒灭菌，在投入生产前，需要提前做好无菌测试，达到要求的才可使用，这样可从源头上控制支原体污染事件。此外，需要加强对消毒灭菌环节的重视，了解日常使用的消毒灭菌方式的有效性，如果在消毒灭菌中高压锅或相关设备堆积过多的物品，很容易出现加热不均匀，导致消毒灭菌不彻底。或在消毒灭菌中设定的循环时间比较短，特别是消毒灭菌的液体含量过高，此时可能存在一定的固体成分或胶状物质，在消毒灭菌中时间过短也会影响有效性。所以，在消毒灭菌环节必须提前就实际材料进行详细分析，记录各方面参数，从多方面进行把控，保证能够达到理想效果。2.5合理使用抗生素，有效预防污染根据相关研究可知，预防兽用生物制品的支原体污染可以通过抗生素发挥一定的抑制作用，所以在兽用生物制品生产过程中，可以合理使用抗生素来有效预防，避免出现支原体污染问题。但是很多支原体对抗生素的敏感性比较差，而且有些抗生素在使用中会存在一定的抗药性，所以预防兽用生物制品的支原体污染时，需要选择合适的抗生素种类，同时控制好抗生素的使用剂量，避免细胞等相关原材料的正常功能受到影响，同时能够达到较好的污染预防效果。3常用的检验兽用生物制品中支原体方法3.1一步法试剂盒兽用生物制品支原体检验方法在不断推陈出新，目前多家公司在研究中研究出了一步法试剂盒，该法主要是通过专业扩增等温技术，使支原体得检验操作非常简单，选取很少的样本量，就可以判定支原体检测结果。根据曹媛媛等人的专业实验室牛支原体检验来看，结合利用多种方法进行鉴定，每一种鉴定方法中都可以明确支原体物质的存在，利用此些方法与培养法相比较，使用一步法可以快速了解检验结果，检测周期非常短。与PCR检验方法相比，一步法在操作中更为简单快速，但是检验结果存在一定的特异性问题，不能针对研究的支原体种属进行判别，根据此项研究可知，利用一步法试剂盒可以与其他检测方法相结合，以此增强准确性。3.2PCR检验方法PCR检验方法相对来说检测过程中灵敏性比较高，而且检验的概率准确性高，利用此种检测方法，可以快速了解检测结果，目前结合各项设备利用PCR检测方法，可以逐渐实现自动化发展，在检测过程中并不需要标本有过高的纯度，因此该法在兽用生物制品中支原体检验的优势非常明显。但也存在一定的问题，即检验结果存在假性状态，需要根据兽用生物制品支原体各项条件进行多次摸索，在研究中需要对各项操作熟悉。3.3分离培养法此项检验方法主要是通过培养基使支原体能够出现典型菌落，具体应用中检测结果比较准确。但具体应用中需要较长的时间，敏感性比