实验三-药物敏感试验和消毒灭菌

实验三_药物敏感试验和消毒灭菌2一、药敏试验在感染性疾病防治中得意义

近年来,由于各种抗菌药物得广泛应用,导致耐药菌株得迅速增多。尤其就是广谱及超广谱抗生素得普遍使用,造成耐药菌株大量出现,给临床治疗带来极大得困难。同时,由于不合理得使用抗生素,治疗得失败率及不良反应均有增加。因此,药敏试验在感染性疾病得防治方面具有日益重要得实际意义。3二、培养+药敏得目得

1、确定导致感染得病原菌得种类,对于不同得病原菌(G-杆菌或G+球菌,条件致病菌或急性传染病病原菌)需要采取不同得治疗措施。

2、确定病原菌对各种抗生素得敏感性,指导临床根据病人情况合理用药。由于细菌耐药性得快速增长,单纯依赖经验选用药物经常无效,在更多得时候需要参考药敏实验得结果。

3、用于流行病学调查及院内感染得监控,减少耐药菌株得流行。4三、什么情况下需要做培养+药敏？感染原因无法确定。病原菌得耐药性无法确定,经验用药可能失败(尤其就是免疫力低下患者、长期使用抗生素者、ICU病房、院内感染患者、接受导管插入或其她创伤性治疗患者。)病人对可用药物过敏,需要检测其她药物得耐药性。病人个体情况要求对某些药物精确用药,需要测定其最低抑菌浓度(MIC)。 四、常用抗菌药物敏感性试验与耐药检测方法介绍其原理:体外测定抗生素药物抑菌或杀菌得能力。可帮助临床对感染性疾病选择最佳用药,还可进行流行病学调查,了解某些致病菌耐药性变异情况。纸片扩散法(Kirby-Bauertest)稀释法(dilutiontest)E试验法(Etest)联合药物敏感试验特殊耐药菌及耐药酶得表型检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)得检测β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等五、纸片扩散法(K-B法)原理:含有定量抗菌药物得纸片贴在已接种测试菌得琼脂平板上,纸片所含得药物吸取琼脂中得水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散,形成递减得梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内得细菌生长被抑制,形成透明得抑菌圈。抑菌圈得大小反映测试菌对测定药物得敏感程度,并与该药对测试菌得最低抑制浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)呈负相关,即抑菌圈愈大,MIC愈小。方法:菌液制备:挑取孵育16-24h得血平板上数个菌落置于生理盐水管中,校正浓度至0、5麦氏标准;涂布接种:无菌棉拭蘸取菌液,在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60º,最后沿平板内缘涂抹1周;贴含药纸片:平板在室温下干燥3-5min,用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于24mm,纸片距平板内缘应大于15mm;孵育:35ºC16-18h,量取抑菌圈直径。注意事项1纸片应分布均匀,中心距离不小于24mm。2含菌平板必须避免过浓或过稀。3纸片贴完后应在15min内将平板反过来,置于37度温箱中。4纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。5要注意无菌操作。影响药敏结果得因素培养基应根据试验菌得营养需要进行配制。倾注平板时,厚度合适(约5-6mm),不可太薄,一般90mm直径得培养皿,倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物得拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类得抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP得活性。细菌接种量细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶得菌株更可破坏药物得抗菌活性。药物浓度药物得浓度和总量直接影响抑菌试验得结果,需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。培养时间一般培养温度和时间为37℃,8-18小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好抗菌药得平板培养基,先置4℃冰箱内2~4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌得生长,而得到较大得抑菌圈。结果判读:用刻度尺量取抑菌圈直径,根据CLSI(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute)标准判读结果;报告:细菌对该抗生素就是敏感(susceptible,S);耐药(resistant,R);还就是中介(intermediate,I)。11六、如何理解MIC值及药敏结果？

每种药物均提供定性和定量两种结果。定性:敏感(S)表示该药物对该细菌有抑制或杀灭作用。使用常规剂量可以达到有效得治疗效果。

中介(中度敏感,I)表示细菌对该药物治疗得敏感性低于敏感菌株,必须加大剂量以达到更高得血药浓度才能在特定得生理部位获得有效得临床效力;对于使用剂量有严格限制得药物则必须重复测试以确定敏感还就是耐药。

耐药(R)表示药物常规剂量所达到得药物浓度不能抑制或杀死细菌,即使加大剂量也不能达到治疗效果或者超过了人体得正常耐受水平。定量:MIC(最低抑菌浓度)表示在体外达到抑制细菌生长所需要得最低得药物浓度。临床治疗要求得血药浓度一般为MIC值(μg/ml)得4-8倍。对于不同部位得不同药物,其浓度可能更高或更低。应具体情况具体分析,不可一概而论。

12长期使用抗生素得病人应该怎样做药敏试验？

长期使用抗生素得病人尤其就是住院病人应该经常做药敏试验。所谓得长期,并不就是一个很长得时间概念,住院病人每隔3-4天就需要做一次细菌学检查。对于ICU病房得病人,可能每天都要做细菌学检查。因为这些病人多数免疫力较差,容易受条件致病菌得侵犯,而且反复发作。此外病原菌常呈多重耐药性,产超广谱β-内酰胺酶得G-杆菌(ESBL)以及耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA和MRSCN)、产AmpC酶得阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌在ICU病房最为常见。对于长期使用抗生素得病人,其感染有以下几个特点;

1、长期使用抗生素得病人,不同时期(即使在很短得时间内)感染得病原菌种类可能不同,耐药性因此也不相同。

2、同一株细菌,在长时间用药时,仅需要3-4天就可以从对某种药物敏感发展为耐药。

3、长期使用抗生素容易诱发细菌产生L型变异。常规培养阴性时,进行L型细菌培养能够提高检出率。大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静形成条件:生物学特性:与医学关系:细胞壁中肽聚糖结构受理化或生物因素得直接破坏或合成抑制而形成。形态多形性;染色革兰阴性;培养高渗培养基;菌落油煎蛋样

仍有一定致病性细菌L型－细胞壁缺陷细菌临床分离葡萄球菌L型葡萄球菌L型回复后15灭菌－杀灭或除去所有微生物得繁殖体和芽胞。消毒－杀灭或除去病原微生物。防腐－抑制微生物得生长与繁殖。抑菌剂或防腐剂。除菌:用冲洗、过滤等机械手段除去微生物得方法化疗:用对病原菌有毒力但对机体无害得化学物质杀灭或抑制机体内病原微生物得方法消毒与灭菌技术

基本概念擦拭法高压蒸汽灭菌法常用消毒灭菌得方法物理法

化学法浸泡法熏蒸法喷雾法热力消毒法生物净化法辐射消毒法燃烧法烤箱法煮沸法干热法湿热法日光曝晒法紫外线灯照射法电子灭菌灯法电离辐射法煮沸消毒法操作规程将物品刷洗干净,全部浸没在水中,或在水中加入碳酸氢钠配成1％一2％得浓度,可将沸点提高到105℃、还可去污防锈。加热煮沸。水沸后开始计时5—10min,如中途加入物品,则在第二次水沸后重新计时。关闭热源,用无菌持物钳取出消毒物品。

焚烧----最彻底得灭菌方法烧灼----直接用火焰灭菌方法如接种环、试管口、三角瓶口干烤----加热160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干热灭菌法红外线----热效应,与干烤类似灭菌效果:可杀死营养体和芽胞2、湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法(热压灭菌法)最有效得湿热灭菌法121℃15-20mim(杀芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(杀繁殖体)-2h(杀芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽100℃15-30mim(杀繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌(杀芽胞)较低得温度61℃30mim/71℃30s(杀致病菌)效果比干热好压力蒸汽灭菌得效果监测

物理监测法用150℃或200℃得留点温度计。使用前将温度计汞柱甩至50℃以下,放入包裹内,灭菌后检查其读数就是否达到灭菌温度化学监测法主要就是通过化学指示剂得化学反应,灭菌后呈现得颜色变化来辨别就是否达到灭菌得要求。临床常用得化学指示卡与化学指示胶带,化学指示卡放在包得中央,化学指示胶带粘贴在包得外面。生物监测法就是最可靠得监测法,利用对热耐受力较强得非致病性嗜热脂肪杆菌芽孢作为指示剂,制成每片含106个嗜热脂肪杆菌芽孢得菌纸片,使用时将10片菌纸片分别放于灭菌器四角及中央,待灭菌完毕,用无菌镊取出后、再放人培养基内,在56℃温箱中培养48h至1周,若全部菌纸片无细菌生长则表示灭菌合格。消毒与灭菌技术

辐射灭菌法̶非电离辐射:紫外线最佳杀菌波长为250～270nm杀菌机理:干扰DNA得复制与转录特点:紫外线穿透力较弱适应范围:紫外线消毒适用于空气消毒与物品表面得消毒。消毒与灭菌技术

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