蛋白质研究技术

关于蛋白质研究技术蛋白质的两性电离

蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。蛋白质的等电点(isoelectricpoint,pI)

当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。第2页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质的胶体性质

蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。*蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜第3页,共126页，星期六，2024年，5月+++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜++++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉第4页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质的紫外吸收

由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。第5页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质的分离纯化方法

透析(dialysis)

利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。第6页,共126页，星期六，2024年，5月

丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀*丙酮沉淀:

低温进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。

*盐析(saltprecipitation)：将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。*免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。

第7页,共126页，星期六，2024年，5月第8页,共126页，星期六，2024年，5月电泳

蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳(elctrophoresis)。第9页,共126页，星期六，2024年，5月几种重要的蛋白质电泳SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-polyacrylamidegelelectrophoresis，SDS）：常用于蛋白质分子量的测定。第10页,共126页，星期六，2024年，5月第11页,共126页，星期六，2024年，5月第12页,共126页，星期六，2024年，5月等电聚焦电泳（isoelectricfocusing，IEF）通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。pH梯度以两性电解质ampholyte（脂肪族多胺和多羧同系物）在外电场作用下自然形成。第13页,共126页，星期六，2024年，5月

双向凝胶电泳two-dimensionalelectrophoresis

第14页,共126页，星期六，2024年，5月第15页,共126页，星期六，2024年，5月层析(chromatography)

原理待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。第16页,共126页，星期六，2024年，5月层析的主要设备第17页,共126页，星期六，2024年，5月常见色谱柱第18页,共126页，星期六，2024年，5月自动分步收集器第19页,共126页，星期六，2024年，5月离子交换层析ionexchangechromatography

离子交换层析法是利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。电荷不同的蛋白质，对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能依次从层析柱中分离出来。

第20页,共126页，星期六，2024年，5月离子交换层析法大致分为5个步骤

离子扩散到树脂表面

离子通过树脂扩散到交换位置

在交换位置进行离子交换；被交换的分子所带电荷愈多，它与树脂的结合愈紧密，也就愈不容易被其它离子取代

被交换的离子扩散到树脂表面

冲洗液通过，被交换的离子扩散到外部溶液中

第21页,共126页，星期六，2024年，5月离子交换层析的原理第22页,共126页，星期六，2024年，5月凝胶过滤(gelfiltration)凝胶过滤色谱亦称凝胶色谱、排阻色谱或分子筛，是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法。凝胶色谱的机理是分子筛效应，凝胶颗粒在合适的溶剂中浸泡，充分吸胀后装入色谱柱内，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱。在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部，而沿凝胶颗粒间的空隙最先流出柱外；而小分子可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构，路径长、流速慢，以至最后流出柱外。因此，混合样品如同“过筛”一样，因分子大小的不同得以彼此分开。

第23页,共126页，星期六，2024年，5月凝胶过滤的作用机制第24页,共126页，星期六，2024年，5月

凝胶过滤的过程第25页,共126页，星期六，2024年，5月超速离心

超速离心法(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。高速：25000rpm超速：50000-120000rpm第26页,共126页，星期六，2024年，5月第27页,共126页，星期六，2024年，5月CsCl密度剃度离心第28页,共126页，星期六，2024年，5月蔗糖密度剃度离心第29页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质研究技术平台第30页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质相关技术蛋白质样品的制备蛋白质浓度的测定蛋白质免疫印迹（westernblot)蛋白质相互作用研究第31页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质样品制备单层贴壁细胞总蛋白的提取：(1)收集细胞（1*106以上）(2)加入适量含蛋白酶抑制剂的裂解液(3)冰上裂解(4)4℃下12000rpm离心5min,取上清，-20℃保存组织中总蛋白的提取(1)取组织块（约0.1g)剪碎,加液氮磨碎、匀浆、超声处理(2)4℃下12000rpm离心15min,取上清，-20℃保存(3)膜蛋白需用更剧烈的方法抽提，低丰度膜蛋白可能还要超滤(4)组织中的蛋白酶活性更强，需要注意抑制蛋白酶的活性第32页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质样品制备试剂RIPA裂解配方：50mMTris-HClpH7.4、150mMNaCl、1mMPMSF、1mMEDTA、1%Tritonx-100、1%脱氧胆酸钠、0.1%SDS蛋白酶抑制剂：1mMPMSF,Aprotinin1μg/ml,Leupeptin5μg/ml,pepestatin1μg/ml,AEBSF50μg/ml,Bestatin10μg/ml,E-641μg/mlPMSF储存液：溶于异丙醇1.74mg/ml(10mmol/L)或17.4mg/ml(100mmol/L),分装后保存于-20℃，使用时稀释至1mmol/L，现用现加。第33页,共126页，星期六，2024年，5月各种细胞裂解液比较第34页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质测定方法比较第35页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质浓度测定Bradford法测定蛋白质浓度试剂G250考马斯亮蓝溶液：0.15mol/LNaCl：

1mg/ml牛血清白蛋白（BSA）标准曲线

R2=0.999第36页,共126页，星期六，2024年，5月Bradford蛋白浓度测定试剂盒1.完全溶解蛋白标准品，取10

l稀释至100

l

，使终浓度为0.5mg/ml。可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。2.将标准品按0,1,2,4,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加标准品稀释液补足到20微升。3.

加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液到20微升。4.

各孔加入200微升G250染色液，室温放置3-5分钟。5.

用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。6.

根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。第37页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质核酸测定仪第38页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质免疫印迹(WB)原理protein/id/protein/western-blot/第39页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质免疫印迹（WB)过程Figure1.SDS第40页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质免疫印迹（WB)过程Figure2.WesternBlot第41页,共126页，星期六，2024年，5月SDS所需仪器蛋白质电泳仪第42页,共126页，星期六，2024年，5月SDS聚丙烯酰胺凝胶（SDS)的有效分离范围第43页,共126页，星期六，2024年，5月配胶所需材料第44页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质转印槽半干转印槽浸渍转印槽第45页,共126页，星期六，2024年，5月半干法转移槽使用说明膜滤纸胶滤纸正极负极第46页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot所需材料还原型5×SDS上样缓冲液

5×电泳液缓冲液浸渍式转移缓冲液或半干式转移缓冲液TBST或PBST缓冲液封闭液（抗体稀释液）

洗脱抗体缓冲液化学发光试剂（ECL）显影液和定影液抗体Mark第47页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot操作流程配胶：根据蛋白质分子量配制相应浓度的SDS电泳：以5－100µg蛋白量上样，电泳至溴酚兰跑到底部。转印：剪下适当大小的PVDF膜，把胶铺在负极滤纸上，上面小心覆盖泡好的PVDF膜，夹好后倒入电转缓冲液，加入冰格，100V转移1小时。封闭：膜加封闭液（5％脱脂牛奶inTBS-T）,室温1h.抗体孵育：加一抗（1：1000）4℃孵育过夜，TBST洗三次，3x10min；加二抗（1：20000）室温1h，TBS-T洗三次，3x10min；显影：膜上加同体积ECLA，B液（100µl/cm2),依照荧光强度而定曝光时间，显影1、5、15min,定影10min.保存：X-胶片干后，将分子量和加样顺序标记上，把日期，抗体名称，孵育时间写上。把膜保存在－20℃以备以后使用。第48页,共126页，星期六，2024年，5月SDS常见问题第49页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot常见问题1、技术问题（1）电泳（2）转膜2、抗体问题（特异性、浓度）3、蛋白质丰度4、荧光淬灭（蛋白量过大）第50页,共126页，星期六，2024年，5月1、背景过深2、抗体特异性3、洗膜时间Westernblot常见问题第51页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot常见问题1、加样量2、ECL试剂3、曝光时间第52页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot常见问题1、蛋白质降解2、蛋白质分子量内参第53页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot常见问题4#：加样量过多第54页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot常见问题

免疫组化和WesternBlot可以用同一种抗体吗？

解答：免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。如果抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。第55页,共126页，星期六，2024年，5月在做WesternBlot时，PBDF膜用甲醇浸泡的目的？

解答：PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合，做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。Westernblot常见问题第56页,共126页，星期六，2024年，5月不能很好地将大分子量蛋白转移到膜上，转移效率低怎么样解决？

解答：可以考虑：转移缓冲液中加入20%甲醇（是指终浓度）(优化的转移缓冲液，可以参考《蛋白质技术手册》)，因为甲醇可降低蛋白质洗脱效率，但可增加蛋白质和PVDF膜的结合能力，甲醇可以防止凝胶变形，甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间；转移缓冲液加入终浓度0.1%SDS，也是为了增加转移效率；用优质的转移膜，或使用小孔径的NC膜（0.2微米）；使用戊二醛交联；低浓度胶，如低至6％。太大时还可以考虑用琼脂糖胶；提高转移电压／电流；增加转移时间。Westernblot常见问题第57页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白分子量大小分别为21kd、28kd，用的是湿转，请问多大电流，多长时间比较合适？

解答：分子量比较小，最好是用干转，湿转效率太高，易转过了。干转的话，用2.5A/cm2，30min就应该够了。湿转，按照bio-rad的说明，用100mA，也得要半个多小时吧。Westernblot常见问题第58页,共126页，星期六，2024年，5月怎样才能把胶跑的非常漂亮，泳道和band都能很直?

影响跑胶跑的质量，有以下几个因素：1、电压，小的电压会使胶的分子筛效应得到充分发挥。电压越小，条带越漂亮，浓缩胶80v，分离胶100v就能跑得很好。2、胶的均匀度，胶越均匀，条带越窄，分离越均匀。倒胶之前，一定要充分混匀，玻璃板一定要干净，双蒸水隔离时，一定要比较轻地加上去，避免稀释下层的分离胶。Westernblot常见问题第59页,共126页，星期六，2024年，5月Westernblot结果如何分析目的蛋白110kd第60页,共126页，星期六，2024年，5月研究蛋白质相互作用的技术平台第61页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质相互作用的网络图谱第62页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质相互作用的重要意义２００种蛋白质及２０００种组合结构进行解析后，发现其中三分之一的蛋白质相互组合会导致疾病，容易导致疾病的蛋白质和其它蛋白质结合以后也将变得十分活跃，致使发病和病情恶化绝大多数疾病都是由１０万种以上的特定蛋白质相互作用所致蛋白质－蛋白质相互作用和识别在诸如生物催化、转运、信号传导、免疫、细胞调控等多种生命过程起着重要的作用。第63页,共126页，星期六，2024年，5月

可能参与蛋白质-蛋白质间相互作用的结构域

第64页,共126页，星期六，2024年，5月一、酵母双杂交系统

酵母激活因子GAL4：N端：147个氨基酸组成的DNA结合域(DNAbindingdomain,BD)，C端：113个氨基酸组成的转录激活域(transcriptionactivationdomain,AD)。GAL4分子的DNA结合域可以和上游激活序列(upstreamactivatingsequence，UAS)结合，而转录激活域则能激活UAS下游的基因进行转录。

组成部分：（1）与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白（bait）；（2）与AD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称靶蛋白（prey）；（3）带由一个或多个报告基因的宿主菌株。

第65页,共126页，星期六，2024年，5月YeastTwoHybrid原理BDXCOOHADcDNANH2

COOH共转化+BDX?ADGal4Gal4PromoterReporterTrp-Leu-cDNAlibraryNH2Gal4Gal4第66页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交系统的优点采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达，并且避免蛋白质纯化过程检测在活细胞内进行，体现真核细胞内真实情况可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用可采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库易于转化、便于回收扩增质粒具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合第67页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交系统的应用检测已知蛋白质之间的相互作用确定蛋白质作用功能区域位点确定未知蛋白质之间的相互作用确定基因治疗中多肽类药物的作用机理第68页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交系统的局限性检测定位于细胞核内的蛋白质间相互作用“假阳性”：某些蛋白本身具有激活转录功能融合蛋白会影响蛋白的真实结构和功能“假阴性”：不利于核外蛋白研究第69页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交的实验流程

构建诱饵质粒（X-BD)

将质粒转化酵母菌

检测X-BD蛋白在酵母中的表达

通过酵母生长曲线检测X-BD是否有毒性

进行自激活测试第70页,共126页，星期六，2024年，5月

将文库质粒共转化入X-BD-酵母筛选阳性克隆子（四缺，x-gal显色反应）共转化再次确认相互作用将阳性克隆子在二缺平板上划线3次提取酵母质粒，转化E.coli，提取质粒

PCR或双酶切去除含有相同长度cDNA的克隆子

DNA测序

NCBI数据库搜索

第71页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交基本过程第72页,共126页，星期六，2024年，5月举例酵母双杂交前准备工作双酶切验证21kb5kb3.5kb2kb1.5kbM1

M:marker1:pGBKT7-BD-X构建诱饵质粒诱饵蛋白的表达X-BDGal4-BD检测诱饵蛋白是否有毒性1

2

3Westernblot1.Yeast2.BD-yeast3.X-BD-yeast酵母生长曲线1.未转化酵母2.BD-酵母3.X-BD-酵母第73页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交结果X-BD+Y-ADGal4-BD+Gal4-ADGal4-BD+MPDIPO13+Gal4-ADSD/-Trp/-Leu-Trp/-Leu/-His/-Ade+3-AT（20mM）举例SD/-Trp/-Leu-Trp/-Leu/-His/-Ade+3-AT（20mM）Gal4-BD+Gal4-ADGal4-BD+Y-ADX-BD+Gal4-AD第74页,共126页，星期六，2024年，5月

X-β-半乳糖苷酶蓝白斑显色分析举例X-BD+Y-ADX-BD+gal4-ADGal4-BD+Y-ADgal4-BD+gal4-AD第75页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交测序结果酵母双杂交得到的阳性克隆子质粒经过DNA测序，由NCBI数据库的BLAST检索cDNA编码的蛋白质举例第76页,共126页，星期六，2024年，5月测序结果查询过程cDNA序列NCBIBLASTNucleotidemegablastsearchformatresults第77页,共126页，星期六，2024年，5月Blast举例第78页,共126页，星期六，2024年，5月Results举例第79页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双杂交系统的类型研究蛋白质和DNA相互作用的实验体系

单向酵母双杂交系统第80页,共126页，星期六，2024年，5月酵母双向杂交系统第81页,共126页，星期六，2024年，5月-His-Ura这个改造的酵母菌株在缺乏尿嘧啶的选择性培养基上只有当“诱饵”和“猎物”相互作用激活URA3基因的表达才能生长。在含有5-FOA的完全培养基上“诱饵”和“猎物”的相互作用则抑制细胞的生长。反向双杂交系统第82页,共126页，星期六，2024年，5月酵母三杂交系统a.第1、2个融合蛋白必须通过与成分3的结合，间接起到激活报道基因转录的作用，不能直接激活报告基因的转录；b.成分3具有分别与第1、2个融合蛋白结合的区域第83页,共126页，星期六，2024年，5月核外双杂交技术

SosRecruitmentSysstem，SRS

36℃36℃membrane第84页,共126页，星期六，2024年，5月哺乳动物双杂交系统X-半乳糖苷酶,萤火虫和海肾荧光素酶第85页,共126页，星期六，2024年，5月研究蛋白质相互作用的其他方法第86页,共126页，星期六，2024年，5月二、细胞内蛋白质共定位绿色荧光罗丹明染色重叠相差第87页,共126页，星期六，2024年，5月三、谷胱苷肽-S-转移酶沉淀试验

(GST-pulldown）原理GSTXY谷胱甘肽-琼脂糖球珠细胞裂解物

tube4℃下孵育2h

GST融合蛋白GSTXY+第88页,共126页，星期六，2024年，5月GSTpulldown实验流程（1）Glutathione琼脂糖珠预处理。（2）GST融合蛋白挂柱：取适量GST-融合蛋白与10μl已经处理过的beads置于1.5ml离心管中，4℃,摇床孵育过夜。（3）孵育过夜的蛋白质与beads的混合液于4℃,500g离心5min，上清收集，观察融合蛋白是否饱和地挂在beads上，用1ml冰冷的细胞裂解缓冲液洗三次beads。（4）把转染目的基因的细胞（5×106）裂解在0.5ml细胞裂解液里（含蛋白酶抑制剂），最大转速4℃离心20min,收集上清液。（5）将细胞裂解液上清加入beads中，混匀，4℃，摇床3h。（6）3h后，用冰冷的细胞裂解缓冲液洗三次。（7）加15μl2×SDS上样缓冲液，煮沸5min.（8）SDS,WesternBlot或质谱仪分析。（9）对照（GST）同样处理。第89页,共126页，星期六，2024年，5月蛋白质电泳仪第90页,共126页，星期六，2024年，5月GSTpulldown验证两种已知蛋白质的相互作用举例inputGSTY-GFP+++X-GSTY-GFPX-GFP+++GSTinput105kDAnti-GFPAnti-GFPY-GSTX-GFP第91页,共126页，星期六，2024年，5月五、免疫共沉淀原理/Proteomics第92页,共126页，星期六，2024年，5月免疫共沉淀实验流程（1）转染后24-48h可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min,细胞裂解液于4°C，最大转速离心30min后取上清。（2）取少量裂解液以备Westernblot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜。（3）取10μlproteinA琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3次，每次3,000rpm离心3min。（4）将预处理过的10μlproteinA琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与proteinA琼脂糖珠偶连。（5）免疫沉淀反应后，在4°C以3,000rpm速度离心3min，将琼脂糖珠离心至管底。将上清小心吸去，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3－4次。最后加入15μl的2×SDS上样缓冲液，沸水煮5分钟。（6）SDS,Westernblotting或质谱仪分析.第93页,共126页，星期六，2024年，5月免疫共沉淀验证两种已知蛋白质的相互作用Y-GFPY-GFPGFPY-GFP+X-HAIP:HAcontrolIgGIP:HAGFPAnti-GFPAnti-GFPAnti-GFPAnti-HAAnti-HAAnti-HAY-GFPX-HAinputinput举例第94页,共126页，星期六，2024年，5月如何寻找未知的相互作用蛋白质？？？第95页,共126页，星期六，2024年，5月

四、质谱仪分析相互作用蛋白质第96页,共126页，星期六，2024年，5月电喷雾电离质谱（ESI-MS）生物质谱仪：主要用以进行生物大分子质量与结构分析。以八十年代后期出现的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪和电喷雾四极质谱仪为代表。可对分子量高达几十万的生物大分子进行快速（几分钟一个样品）、精确（0.01%）和高灵敏度（10-15mol）的测定。第97页,共126页，星期六，2024年，5月质谱分析流程蛋白质信息数据库检索第98页,共126页，星期六，2024年，5月五、免疫沉淀与质谱仪分析蛋白质相互作用第99页,共126页，星期六，2024年，5月

六、质谱仪分析蛋白质相互作用网络图第100页,共126页，星期六，2024年，5月第101页,共126页，星期六，2024年，5月一.概述蛋白质组及蛋白质组概念的提出蛋白质组学形成的历史蛋白质组研究的主要手段第102页,共126页，星期六，2024年，5月人类基因组计划的完成3-4万个基因，30亿对碱基（解码生命）基因组是唯一的，但蛋白表达是变化的（解码生命）后基因组—蛋白质组的研究是21世纪生命科学的主要任务（WilkinsMRetal1997)1994年Williams提出测定有机体的基因组所表达的全部蛋白1995年Wilkins正式提出Proteome一词由一个细胞或一个组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，而研究蛋白质组功能为蛋白质组学（Proteomics）1、蛋白质组及蛋白质组概念的提出第103页,共126页，星期六，2024年，5月基因组转录组蛋白组ThestudyofproteinsexpressedbygenomesCompletionofthesequencingofthe1stdraftofhumangenomeindicatesthereareapproximately250,000proteinsinthehumangenomeOnly2-5%ofproteinsinhumangenomehavebeenidentified第104页,共126页，星期六，2024年，5月第105页,共126页，星期六，2024年，5月第106页,共126页，星期六，2024年，5月Expressionproteomics(表达蛋白组学)ThestudyofglobalchangesinproteinexpressionProteomicsCell-mapproteomics（细胞图谱蛋白组学）Thesystematicstudyofprotein-proteininteractionsthroughtheisolationofproteincomplexes第107页,共126页，星期六，2024年，5月2、蛋白质组学形成的历史1860FriedrichMiescheridentifiedacidandbasicproteincomponentsincellnucleiwhichwasmistakenlybelievedtocarrythegeneticmaterial

1970KenrickandMargolisIsoelectricfocusingandgradientgelelectrophoresis:atwo-dimensionaltechnique

1972BernsteinetalTheProteinDataBankwithacollectionoftenX-raycrystallographicproteinstructures

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genitalium

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