2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体课件高二下学期生物人教版选择性必修3

复习回顾练习．下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（

）A．大多数动物细胞在体外培养时表现为单层贴壁生长B．进行细胞培养时，通常采用培养皿或封闭的培养瓶放置在CO2培养箱中进行培养C．培养骨髓瘤细胞时，为防止接触抑制现象，需进行分瓶培养过程D．传代培养时，细胞都需要用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，再用离心法收集后分瓶培养松盖一种癌细胞悬浮生长类不用练习：如图为iPS细胞的获得及用其培育不同种细胞的示意图（c­Myc、Klf4、Sox2和Oct3/4等基因与细胞的脱分化有关）。回答下列问题：(2)在培养iPS细胞的过程中，需要为培养细胞提供无菌、无毒的环境，为达到此目的对培养液采取的具体操作有

（答两点）。②类似于植物组织培养中的

过程。(3)过程③④为iPS细胞提供的条件不同，分化得到的细胞不同，本质上是

的结果。(4)iPS细胞的应用前景优于胚胎干细胞的原因

。（1）对成纤维细胞进行培养时，常用胰蛋白酶处理使之分散成单个细胞，这说明细胞间的物质为

，

（填“能”或“不能”）用胃蛋白酶处理成纤维细胞，原因是

。脱分化pH为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境中变性失活

灭菌、无菌操作、定期更换培养液和加一定量的抗生素多数动物细胞培养的适宜基因选择性表达无须破坏胚胎，避免免疫排斥反应

新冠疫情迅速扩张初期，利用康复者恢复期血浆治疗重症和危重症患者是一个非常有效的一个重要手段，但这种疗法难以大规模应用。不同浆细胞（B淋巴细胞）血清抗体：产量低、纯度低，特异性差p49筛选单个浆细胞（B淋巴细胞）只产生一种特异性抗体细胞群大量增殖量产哪种细胞是可以无限增殖？癌细胞有什么方法能使细胞同时具备：产生抗体+无限增殖能力？动物细胞融合动物细胞融合与单克隆抗体1.概念：动物细胞融合技术，就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。2.原理：细胞膜具有一定的流动性一、动物细胞融合技术成功标志？细胞核的融合3.诱导方法：物理法：化学法：生物法：灭活病毒诱导法电融合法PEG融合法与植物原生质体融合的方法相同——动物细胞融合特有

P49旁栏：19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？

病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。原理?病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚→细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布→细胞膜打开，细胞发生融合。灭活：用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构课本p51一、1植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较二、单克隆抗体米尔斯坦和柯勒发明，并获得了诺贝尔生理学或医学奖。一个B淋巴细胞（浆细胞）只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖动物细胞融合动物细胞培养单克隆抗体杂交瘤细胞单一的使细胞同时具备：产生抗体+无限增殖能力。复制阅读课本P49-50，了解单克隆抗体的制备过程1.如何获得能产生特定抗体的B淋巴细胞？2.细胞之间一定会发生融合吗？如果发生融合（仅考虑2个细胞之间），有多少种情况？

得到的杂交瘤细胞都能产生特定抗体吗？3.整个过程至少进行几次筛选？筛选的目的分别是什么？能想到筛选的思路吗？4.如何获得单克隆抗体？二、单克隆抗体注射特定的抗原

B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合动物细胞融合一段时间后从脾中提取多种小鼠曾接受多种抗原刺激1.未融合的亲本细胞2.融合的细胞①杂交瘤细胞②B-B细胞③瘤-瘤细胞多种（一）单克隆抗体的制备过程筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞具有同种核的细胞杂交瘤细胞足够数量的能产生所需抗体的特定杂交瘤细胞

第一轮筛选：用特定的选择培养基第二轮筛选：克隆化培养、抗体检测①注射到小鼠腹腔内②体外培养获取单克隆抗体从小鼠腹水中从细胞培养液中动物细胞培养（一）单克隆抗体的制备过程1.未融合的亲本细胞2.融合的细胞①特定的杂交瘤细胞②B-B细胞③瘤-瘤细胞能准确识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合；可以大量制备。p50背第二课时完成p51一、11.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（

）

A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性

B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合

C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞

D.前者主要为了获得细胞产品，后者主要为了获得杂种植株C（1）第一次筛选的目的__________________________（2）如何筛选____________________________（3）筛选原理____________________________________________________________________________________筛选获得杂交瘤细胞用特定的选择培养基进行筛选在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长复习：单克隆抗体的制备过程立即提取B细胞？特点？（5）第二次筛选的目的________________________________________________________（6）如何筛选____________________________________________________________________________________（7）选择抗体检测呈___性的杂交瘤细胞（8）抗体检测原理__________________________________获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下，进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）阳抗原和抗体能特异性结合(分子水平的鉴定）（9）如何获取大量所需杂交瘤细胞________________________________________________________（10）如何获取单克隆抗体①体外培养____________________________②小鼠腹腔内培养____________________________（11）单克隆抗体的优点______________________________________________________________在体外条件下大规模培养（接种于培养液中）或注射到小鼠腹腔内增殖从细胞培养液中获取从小鼠腹水中获取能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备（背）【拓展】第一代鼠源抗体（利用小鼠杂交瘤细胞生成的抗体）能够被人体免疫系统识别，引起人抗鼠抗体反应，使得单抗药物疗效减弱，并且引起严重的不良反应，因此第一代单抗药物的临床应用受到极大的限制。（二）单克隆抗体的应用（二）单克隆抗体的应用1、诊断试剂2、运载药物1、用作诊断试剂原理：抗原与抗体能特异性结合优势：特异性强、灵敏度高、可大量制备（标准化生产）新冠病毒抗原检测试剂盒（二）单克隆抗体的应用诊断疾病、鉴别病原体女性怀孕后会分泌一种糖蛋白,-人绒毛膜促性腺激素(HCG)，尿液中会检出HCG的存在。用抗HCG单克隆抗体制备的试纸可以测试女性是否怀孕。(抗原-抗体杂交法)肿瘤、心血管畸形的定位诊断同位素标记的单克隆抗体荧光标记的单克隆抗体成像在特定组织2、用于运载药物（二）单克隆抗体的应用抗体：靶向运输作用药物：杀伤靶细胞（治疗效应）讨论1抗体和药物各具有什么作用？单克隆抗体+药物=“生物导弹”讨论3：ADC在临床上有哪些优势？协同发挥抗体特异性识别的作用+细胞毒素的杀伤作用→靶点清楚、毒副作用小主要用于癌症治疗讨论2除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可作为ADC偶联的药物？①用放射性同位素标记的单克隆抗体进行靶向放疗②用作用于细胞信号转导通路的药物，阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长。结合同位素的单抗利用单抗将放射性核素导入肿瘤细胞,对肿瘤细胞进行特异性的杀灭作用,同时最大限度地降低放射性核素对机体的损伤作用,从而大大增强了杀伤肿瘤细胞的效率3、用于治疗疾病（二）单克隆抗体的应用课后习题2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（）A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合,经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞D.将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体A补充练习：新冠病毒可以采用试纸进行抗原检测。抗原检测一般采用双抗体夹心法，其原理如图所示。结合垫处含有足量的、可移动的、与胶体金（显红色）结合的抗体1（能识别待测抗原某一部位），T处固定有抗体2（能识别待测抗原另一部位），C处固定有抗体3（抗-抗体1），能与抗体1结合。当抗体2或抗体3与对应的物质结合后，能将其截留。若待测样本中含新冠病毒，则显色结果为T线和C线处均显红色，判断为阳性。思考：显色结果为

，判断为阴性？只有C线处显红色评小本P171D、P194C晚练6A、8、9B、10（3）、11（3）补充：根据资料设计一种实验方案，筛选杂交瘤细胞资料：①体外培养的动物细胞在增殖过程中需进行DNA的复制。B淋巴细胞的DNA合成有两条途径：D途径和S途径，其中D途径可被氨基喋呤（A）阻断。D途径可以在普通培养液中进行。S途径需在普通培养液中加入次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶核苷（T）两种成分才能进行。实验所用的骨髓瘤细胞缺少S途径所需的酶，只能通过D途径合成DNA②无增殖能力的细胞在培养液中仅存活5-7天B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞DNADNADNAD途径、S途径D途径D途径、S途径无增殖能力无限增殖无限增殖补充：根据资料设计一种实验方案，筛选出杂交瘤细胞BBB瘤瘤瘤杂交瘤细胞如何在含有多种细胞的培养液中筛选出杂交瘤细胞？B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞DNADNADNAD途径、S途径D途径D途径、S途径无增殖能力无限增殖无限增殖在培养液中加入氨基喋呤（A）、次黄嘌呤（H）、胸腺嘧啶核苷（T）培养基（HAT）选择132资料5：将杂交瘤细胞悬液稀释后滴入多孔板