肠毒素C含量测定法（ELISA法）_第1页
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文档简介

肠毒素C含量测定法（ELISA法）本法采用酶联免疫法测定金黄色葡萄球菌滤液中肠毒素C含量。1试剂

1.1包被液（pH9.6碳酸盐缓冲液）：称取碳酸钠159mg，碳酸氢钠293mg，加水溶解，定容至100ml。

1.2洗涤液（pH7.4PBS-Tween20）：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）29g，氯化钠80g，磷酸二氢钾2g，Tween-2010ml，加水溶解并稀释至1000ml为浓缩液，临用前10倍稀释。

1.3酶标抗体稀释液（1%牛血清白蛋白、pH7.4）：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）2.9g，氯化钠8g，磷酸二氢钾0.2g，氯化钾0.2g，Tween-200.5ml，加水溶解并稀释至1000ml，临用前，加牛血清白蛋白至终浓度为1%。

1.4底物溶解液：称取柠檬酸0.47g，磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）1.8g，加水溶解至100ml。

1.5底物液：称取邻苯二胺2mg，溶于底物溶解液5ml，加30%过氧化氢3μl，混匀。

1.6终止液：2mol/L硫酸。2标准品溶液的配制

用0.9%氯化钠溶液将肠毒素标准品稀释至20、16、12、8、4、2、1ng/ml。3测定法

用包被液将包被抗体稀释至5μg/ml后，以100μl/孔加至酶标板，4℃放置过夜。用洗涤液洗涤3次。或取包被好的酶标板，用洗涤液洗涤3次。将稀释好的标准品溶液及供试品加入酶标板，以同批次的培养基为阴性对照，每孔100μl，每个稀释度作双孔，37℃放置2小时。用洗涤液洗涤3次。用酶标抗体稀释液将酶标抗体稀释1000倍，以100μl/孔加至酶标板，37℃放置1.5小时。用洗涤液洗涤3次。加入底物溶液，100μl/孔，37℃显色10～15min后，加2mol/L硫酸50μl终止反应3分钟，在492nm波长下测定吸光度。4结果计算

以标准品的肠毒素C含量和对应的吸光度值

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