![肠毒素C含量测定法(ELISA法)_第1页](http://file4.renrendoc.com/view2/M03/35/04/wKhkFma8e5eAegecAAGtBzY75js795.jpg)
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文档简介
肠毒素C含量测定法(ELISA法)本法采用酶联免疫法测定金黄色葡萄球菌滤液中肠毒素C含量。1试剂
1.1包被液(pH9.6碳酸盐缓冲液):称取碳酸钠159mg,碳酸氢钠293mg,加水溶解,定容至100ml。
1.2洗涤液(pH7.4PBS-Tween20):称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29g,氯化钠80g,磷酸二氢钾2g,Tween-2010ml,加水溶解并稀释至1000ml为浓缩液,临用前10倍稀释。
1.3酶标抗体稀释液(1%牛血清白蛋白、pH7.4):称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)2.9g,氯化钠8g,磷酸二氢钾0.2g,氯化钾0.2g,Tween-200.5ml,加水溶解并稀释至1000ml,临用前,加牛血清白蛋白至终浓度为1%。
1.4底物溶解液:称取柠檬酸0.47g,磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)1.8g,加水溶解至100ml。
1.5底物液:称取邻苯二胺2mg,溶于底物溶解液5ml,加30%过氧化氢3μl,混匀。
1.6终止液:2mol/L硫酸。2标准品溶液的配制
用0.9%氯化钠溶液将肠毒素标准品稀释至20、16、12、8、4、2、1ng/ml。3测定法
用包被液将包被抗体稀释至5μg/ml后,以100μl/孔加至酶标板,4℃放置过夜。用洗涤液洗涤3次。或取包被好的酶标板,用洗涤液洗涤3次。将稀释好的标准品溶液及供试品加入酶标板,以同批次的培养基为阴性对照,每孔100μl,每个稀释度作双孔,37℃放置2小时。用洗涤液洗涤3次。用酶标抗体稀释液将酶标抗体稀释1000倍,以100μl/孔加至酶标板,37℃放置1.5小时。用洗涤液洗涤3次。加入底物溶液,100μl/孔,37℃显色10~15min后,加2mol/L硫酸50μl终止反应3分钟,在492nm波长下测定吸光度。4结果计算
以标准品的肠毒素C含量和对应的吸光度值
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