纳米技术 含人造纳米材料纺织品抗菌性能的评估 征求意见稿

1纳米技术含人造纳米材料纺织品抗菌性能的评估本文件规定了含人造（金属/金属氧化物）纳米材料纺织品（TCMNMs）的抗菌性能的评估方法。本文件中的纺织品包括生产或加工过程中使用人造纳米材料的织物、纱线和纤维。此外，本文件还规定了测定纺织品被洗涤和/或接触人造汗液后释放的纳米材料的实验流程。本文件仅涵盖TCMNMs的抗菌、抗真菌和防臭性能的评估方法。本文件不涵盖具有治疗应用的纺织品，也不涉及与TCMNMs相关的环境、健康和安全（EHS）问题。同时，本文件未考虑由于老化、干燥损和磨损导致从TCMNM中释放的纳米材料的情况，尽管上述过程也被认为是释放纳米材料的重要原因。2规范性引用文件以下参考文件对于本文件的应用是必不可少的，对于注明日期的参考文献，只适用引用的版本；对于未注明日期的参考文献，适用引用文件的最新版本（包括任何修改）。ISO105-E04,纺织品色牢度试验第四部分：耐汗渍色牢度（Textiles—Testsforcolourfastness—PartE04:Colourfastnesstoperspiration）注：GB/T3922—2013纺织品色牢度试验耐汗渍色牢度（ISO105-E04:2013，MOD）ISO6330,纺织品试验用家庭洗涤和干燥程序（Textiles-Domesticwashinganddryingproceduresfortextiletesting）注：GB/T8629-2017纺织品试验用家庭洗涤和干燥程序（ISO6330:2012，MOD）ISO20743:2021,Textiles-DeterminationofantibacterialactivityoftextileproductsISO13629-1,纺织品抗真菌性能的测定第1部分：荧光法（Textiles--Determinationofantifungalactivityoftextileproducts-Part1:Luminescencemethod）注：GB/T39104.1-2020纺织品抗真菌性能的测定第1部分：荧光法（ISO13629-1:2012，MOD）ISO/TS80004-1纳米科技术语第1部分：核心术语（Nanotechnologies—Vocabulary—Part1:Coreterms）注：GB/T30544.1—2014纳米科技术语第1部分：核心术语（ISO/TS80004-1:2010，IDT）2EN16711-1,Textiles-Determinationofmetalcontent-Part1:Determinationofmetalsusingmicrowavedigestion3术语和定义ISO/TS80004-1和以下给出的术语和定义适用。3.1纳米材料nanomaterial任一外部维度、内部或表面结构处于纳米尺度的材料。注1：本通用术语包括纳米物体和纳米结构材料。[来源:ISO/TS80004-1:2015，2.4，修订版——条目的注释2已被删除。]3.2纺织物textile机织织物、针织织物等，由具有一定粘性的纤维和纱线交联而成，通常应用于服装或家注1：纺织品通常包括某些类型的无纺布。[来源:ISO16373-3:2014，2.41]3.3抗菌活性antimicrobialactivity杀死/破坏/灭活微生物、防止其增殖和/或阻止其致病作用的能力。[来源:ISO18369-1:2017，抗细菌活性antibacterialactivity抗菌整理剂的活性，该活性用于抑制或减缓细菌生长、减少细菌数量或杀死细菌。[来源:ISO20743:2021，3.4]3.53抗真菌性antifungalactivity抑制或减缓真菌生长的性能，用对照样和试样中ATP(3.6)的对数所表示的增长值之差来表征。[来源：GB/T39104.1-2020，3.6]3.6三磷酸腺苷ATP活真菌中存在的一种多功能核苷酸。[来源：GB/T39104.1-2020，3.5]3.7洗涤程序washingprocedure洗衣机中预先设定的洗涤循环，包括给水、洗涤、反复漂洗、脱水、给水，并最终以脱水结束。[来源：GB/T8629-2017，3.7]4符号和缩略语以下缩略语适用于本文件。AAS：原子吸收光谱（Atomicabsorptionspectroscopy）AFM：原子力显微镜（Atomicforcemicroscopy）AES：俄歇电子能谱（Augerelectronspectroscopy）ATP：三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate）BET：比表面积测试法（Brunauer,Emmett,andTeller）ELS：电泳光散射（Electrophoreticlightscattering）FESEM：场发射扫描电子显微镜（Fieldemissionscanningelectronmicroscopy）ICP-AES：电感耦合等离子体原子发射光谱（Inductivelycoupledplasma-atomicemissionspectroscopy）ICP-MS：电感耦合等离子体质谱法（Inductivelycoupledplasma-massspectrometry）MNM：人造纳米材料（Manufacturednanomaterial）4TCMNM：含人造纳米材料的纺织品（Textilescontainingmanufacturednanomaterial）TEM：透射电子显微镜（Transmissionelectronmicroscopy）SAED：选区（电子）衍射（Selectedarea(electron)diffraction）XPS：X射线光电子能谱（X-rayphotoelectronspectroscopy）5TCMNMs中金属或金属氧化物纳米材料的特性5.1简介正如在引言部分所述，TCMNMs中所含纳米材料的物理化学特性会显著影响抗菌性能，因此了解其理化特性非常重要。根据利益相关方的协议和具体应用，应测量并报告表1所列的这些特性。目前有大量的分析技术可用于检测和表征纺织品中的纳米材料。分析技术的选择取决于其表征能力、优势和局限性，此外，还需要考虑仪器的成本和可用性。没有单一的技术可以完成对纺织品中的MNMs的所有检测和表征。5.2金属或金属氧化物纳米材料的理化特性GB/T41204和GB∕T30544.6文件分别规定了可用的测量纳米材料物理化学特性的商业技术以及与表征相关的定义。此外，GB/T42469文件中提供了用作抗菌剂的银纳米粉末或胶体的物理化学特性和测量方法。物理化学特性包括MNMs的形状、大小、表面电荷、化学成分和表面化学，表1列出了TCMNMs的物理化学特性及其测量方法。表1.TCMNM中金属或金属氧化物纳米材料的物理化学特性清单特性/性质测量方法粒径、形状、尺寸分布FESEM,TEM,SEM,AFMELS比表面积BET表面化学XPS,AES化学成分AAS,ICP-AES,ICP-MS物相分析TEM/SAED5如前所述，纺织品中使用的纳米材料要么被整合到主要纤维结构中，要么通过不同的方法被涂覆在纺织品上，另一方面，出于不同的目的，这些纤维和由它们制成的纺织织物可能会被进一步加工，这就导致在某些情况下，用于抗菌性能的纳米材料的表征和检测可能会很复杂。例如，出于不同目的所使用的化学试剂（例如染色、印刷）可能会与纳米材料的元素相似。因此，为了从前者中识别后者，应谨慎地选择一组适当的测量技术，因为对于这种情况，通常没有单一的技术可以解决所有问题。在这方面，ASTME3025-16[15]探讨了一些理化特性的测量方法及含银纳米材料纺织品[24]在检测时所面临的挑战。5.3表征方法附录A和附录B中简要描述了TCMNMs的表征方法。对于化学成分分析，样品应按照附录B.3所述的酸消解或微波辅助酸消解法对其进行消解。消解的目的是为了完全分解TCMNMs的固体基质，将纳米材料转移到溶液中，以便进行后续的测定步骤。消解方法的选择取决于仪器的可用性以及有关各方之间的协议。6金属或金属氧化物纳米材料释放量的测定6.1通则测量纺织品在接触人体汗液和洗涤过程中释放的纳米材料，分别如6.2和6.3所述。6.2人体汗液的制备6.2.1简介使用人工汗液来模拟人体汗液，由于汗液因人而异，因此不存在普适性的制备方法。一般来说，新鲜的人体汗液是弱酸性的，然而，微生物会导致pH值变为弱碱性（pH7.5至pH8.5）。因此，GB/T3922文件中规定应分别使用人工碱性汗液（pH8）和人工酸性汗液（pH5.5）这两种溶液作为天然汗液源，人工碱性汗液和酸性汗液的制备也应按照GB/T3922进行。6.2.2测定方法6利用公式（1）来对纺织品中释放的纳米材料进行测定，主要是通过测量它们接触人造汗液前后的浓度差来确定。式中：X是从纺织品样品中释放的纳米材料的量；A0是纺织品接触人造汗液之前，样品溶液中纳米材料的量(μg/1）；A1是纺织品接触人造汗液之后，样品溶液中纳米材料的量(μg/1以百分比表示）。A0和A1应按照附录B.3所述对样品进行酸消解或微波辅助酸消解后进行测量。应该注意到，测得的释放量也可能是由于化学品或纳米颗粒作为染料的潜在使用而造成的。在这种情况下须注意，由于可用于此类应用的MNMs有限，仅考虑具有抗菌特性的纳米材料的释放。此外，生产商或制造商必须声明在纺织品中使用的MNMs类型。6.3洗涤程序本方法中，使用常规的家庭洗涤程序，在多次洗涤循环后测量在TCMNMs中纳米材料的释放量。考虑到本文件涵盖的纺织品种类繁多，应根据纺织品制造商提供的说明，从GB/T8629中选择规定的洗涤、干燥的具体程序以及洗涤剂类型。类似地，可以利用公式（1）来计算洗涤过程中纳米材料的释放量。当然，在这里A0和A1分别是指纺织品样品洗涤前后纳米材料的量，A0和A1也应使用附录B中所述对样品进行酸消解或微波辅助酸消解法后进行测量。7TCMNMs抗菌活性的测定7.1通则TCMNMs样品的抗菌活性的测定，包括抗菌、抗真菌和防臭活性，应在样品洗涤前后以及接触人体汗液前后进行。7.2抗菌活性7应按照ISO20743:2021文件中的标准方法，使用革兰氏阳性金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性细菌肺炎克雷伯菌（AATCC4352）测定TCMNMs的抗菌活性，附录C.l给出了该方法的简要说明。注1：经适当验证后可使用其他细菌。注2：参考世界微生物数据中心(WDCM)：/search.htm[30]7.3抗真菌活性TCMNMs样品的抗真菌活性应根据GB/T39104.1文件测定，该测试方法通过测量酶促反应产生的发光强度（ATP法）来确定抗真菌活性，附录C.2给出了该方法的简要说明。所用的参考真菌应选自下列真菌：黑曲霉；须毛癣菌。注1：经适当验证后可使用其他真菌。注2：参考世界微生物数据中心(WDCM)：/search.htm[30]7.4防臭活性腋腺分泌的汗液是无味的。人体腋臭的主要由在腋窝皮肤上的细菌菌群产生的，菌群以革兰氏阳性棒状杆菌属为主[26]。抗菌TCMNMs可以通过减少腋窝皮肤上棒状杆菌的数量来减少臭味。如果制造商声称产品具有防臭性能，则应根据ISO20743文件确定纺织品样品的这一特性，并使用诸如干燥棒状杆菌等任一棒状杆菌菌株进行测试。附录C.3给出更详细的描述。8测试报告制造商或供应商应报告相关的基本信息和TCMNMs基本特性的测量结果，测试报告应包含以下内容：a）报告的参考文件（例如GB/ZXXXX:XXXX）；8的类型、实验室名称和地址；c）所用纳米材料特性测量的详细信息，按照相关利益方协议，提供如尺寸、尺寸分布、zeta电势、比表面积、物相分析、化学成分和表面化学等信息；d）抗菌特性测试的详细信息，如测试细菌的名称、菌株编号、接种方法、接种浓度、定量测量方法和抗菌活性值（A），以及依据ISO20743所采取的测量方法；e）抗真菌特性测试的的详细信息，如参考真菌的类型、真菌菌株的信息、孢子浓度、接种方法；生长值F和抗真菌活性值（A以及依据GB/T39104.1所采取的测量方法若制造商声明TCMNMs具备抗真菌性能）f）防臭特性测试程序的详细说明，如测试细菌的名称、菌株编号、接种方法、接种浓度、定量测量方法和抗菌活性值（A）、以及依据ISO20743所采取的测量方法若制造商声明TCMNMs具备防臭性能）g）消解方法的详细说明，如消解的类型、所用的酸和试剂、以及消解时间；h）洗涤过程的详细说明，如机器类型和洗涤程序、干燥程序、洗涤剂类型、所用洗涤循环次数，以及依据GB/T8629所采取的测量方法；i）TCMNMs接触碱性人工汗液（pH8）和酸性人工汗液（pH5.5）前后的抗菌活性和所含纳米材料的量，以及接触人工汗液后，基于测试结果计算得到的纳米材料释放量（%j）TCMNMs洗涤前后的抗菌活性和所含纳米材料的量，以及洗涤后，基于测试结果计算得到的纳米材料释放量（%）；k）测试方法的偏差；l）检测到的任何异常特征；m）测试日期。表2给出了一个可用的报告模板的示例。9表2报告模板示例实验室实验室地址基本信息产品名称产品用途批号货号制造方法纺织物成分（%聚酯纤维，%棉）纤维直径纳米材料的物理化学特性及表征方法（可选，依据相关利益方协议）尺寸、形状和尺寸分布表征方法表征方法比表面积表征方法物相分析表征方法化学成分表征方法表面化学表征方法抗菌特性测试试验细菌的名称菌株编号接种方法接种浓度定量测量方法抗菌活性值（A）依据ISO20743所采取的测量方法测试日期抗真菌特性测试参考真菌的类型孢子浓度真菌菌株的信息接种方法生长值F抗真菌活性值（A）依据GB/T39104.1所采取的测量方法测试日期防臭特性测试试验细菌的名称菌株编号接种方法接种浓度定量测量方法抗菌活性值（A）依据ISO20743所采取的测量方法测试日期消解方法说明消解方式□酸消解□微波辅助酸消解法所用的酸和其它试剂消解时间洗涤程序机器类型洗涤方式干燥方式洗涤剂洗涤次数依据GB/T8629所采取的测量方法测试日期TCMNMs接触碱性（pH8）人工汗液前后的抗菌活性和所含纳米材料的量接触前抗菌活性值接触后抗菌活性值抗真菌活性值抗真菌活性值防臭活性值防臭活性值纳米材料的测定量(μg/1）纳米材料的测定量(μg/1）纳米材料的释放量（%）TCMNMs接触酸性（pH5.5）人工汗液前后的抗菌活性和所含纳米材料的量接触前抗菌活性值接触后抗菌活性值抗真菌活性值抗真菌活性值防臭活性值防臭活性值纳米材料的测定量(μg/1）纳米材料的测定量(μg/1）纳米材料的释放量（%）TCMNMs清洗前后的抗菌活性和所含纳米材料的量洗涤前抗菌活性值洗涤后抗菌活性值抗真菌活性值抗真菌活性值防臭活性值防臭活性值纳米材料的测定量(μg/1）纳米材料的测定量(μg/1）纳米材料的释放量（%）附录A（资料性附录）TCMNMs中纳米材料物理特性的表征技术A.1尺寸和尺寸分布的测定FESEM、AFM或TEM图像可用于测量纳米材料的尺寸（参见GB/T37156、GB/T43196和ISO21363）。通过这些技术（即FESEM、TEM和AFM）获得的信息可靠性取决于适当的样品制备。此外，还有一点需要注意，由于仪器的测量灵敏度和每种技术的测试局限性是不一样的，不同实验室测得的MNMs尺寸和尺寸分布可能会略有不同。为了避免这一问题，各实验室应做好设备校准，并使用相同的检测技术。对于AFM样品，应当使用胶带将纺织品中的单根纤维安装到载玻片上，确保纤维笔直且牢固地粘贴在载玻片上。为确保结果的有效性和可重复性，应对纺织物的三个随机选择区域的三支不同的单根纤维进行重复测量[27]。对于非导电纺织物样品，通常需要使用高真空蒸发仪在其表面涂覆一层诸如碳之类的导电材料。由于纳米材料中的金属颗粒与纺织品基底相比具有更高的对比度，在检测时除了使用二次电子模式外，还建议使用背散射电子模式来进行检测。对于TEM测试，为了方便电子束能够穿透，样品应制备为薄片，可以直接在低温条件下（在液氮中）使用超薄切片机和金刚石刀将TCMNMs样品切成薄片（<100nm），或者预先将样品嵌入树脂中，再用超薄切片仪将其切成薄片。在进行低温切片和树脂切片时，需要操作者具备良好的技巧和耐心。在利用上述表征手段观测纳米材料后，可使用ISO13322-1:2014提供的统计方法得出其尺寸分布。A.2Zeta电势的测定Zeta电势是一种测量纳米材料表面电荷的方法。在这种方法中，使用电泳法来测量表面电荷，溶液的pH值应与表面电荷一起报告。Zeta电势不是直接测量的，是由实验测量得到的参数（如电泳迁移率）经适当的理论模型计算获得。ELS等光学方法已广泛用于测定悬浮液或溶液中颗粒或大分子的电泳迁移率。使用光学手段测量电势的具体内容可参见GB/T32671.2。A.3比表面积的测定纳米材料的比表面积应使用基于BET氮吸附法进行测量。BET是一种通过测量吸附气体的量来确定比表面积的标准方法。GBT19587规定了分散或多孔固体总表面积（包括外表面和内表面）的测量程序。（资料性附录）TCMNMs中纳米材料化学特性的表征技术B.1化学成分的测定和MNMs的定量分析如表1所示，AAS、ICP-AES和ICP-MS方法可用于酸消解后测定TCMNMs中MNMs的化学成分并对其中金属成分进行定量分析。GB/T42732给出了ICP-AES和ICP-MS检测出样品的元素类型和含量的方法。对于化学成分分析，样品应按照酸消解或微波辅助酸消解流程来消解样品（见B.3）。B.2表面化学的测定XPS或AES是一种分析表面化学的定量光谱技术，用于预测材料表面（最高10nm）元素的化学式、元素构成、化学状态及电子状态，还可以用于检测样品表面或块体中是否存在杂质。B.3通过酸解或微波辅助酸解制备样品酸消解可以在开放系统（大气环境）或封闭系统（高温）中进行，消解过程使用各种无机酸（如盐酸、硝酸、氢氟酸和硫酸）和其他试剂，如过氧化氢、过硫酸钾和硼酸。开放式酸消解可直接使用加热台或罩式电热器对实验容器进行加热。封闭式酸消解法，使用常规加热设备或微波炉对样品、酸和其它试剂的混合物进行加热。建议使用微波设备进行辅助消解，因为这种方法不仅高效、清洁，而且可以连续监测温度和压力等反应参数，因此该方法具有较好的安全性。表B.1总结了开放式和封闭式酸消解法的技术条件。开放式酸消解应依据EPASW846Method3050进行[28]，该方法基于强酸消解法，可用于几乎所有类型的金属或金属氧化物纳米材料，但不适用于聚烯烃（聚丙烯）样品。利用微波辅助酸消解法来测定金属含量时，应依据EN16711-1文件来制备纺织品样品。表B.1开放式和封闭式酸消解法的技术条件技术条件开放式酸消解法封闭式酸消解法最低温度受酸沸点的限制300°C至360°C酸消耗量高低消解效果效果不佳高样品损耗挥发性损耗无污染风险是否消解时间2小时至15小时20分钟至60分钟（微波）2小时至5小时（常规加热）（资料性附录）抗菌、抗真菌和防臭活性的测定方法C.1抗菌活性的测定ISO20645开发了纺织品抗菌活性的定性测试方法，而ISO20743则提出了几种实用的定量方法。测试方法由细菌接种和细菌定量测量两个主要步骤组成。三种不同的细菌接种方法如下所述：a)吸收法——将试验细菌悬液直接接种到标本上；b)转移法——将试验细菌置于琼脂板上并转移到标本上；c)印刷法——将试验细菌置于过滤板上然后印刷在标本上。ISO20743中还规定两种用于细菌定量测量的方法：菌落平板计数法和ATP发光法。因此，通过不同的接种方法和定量测量方法，共有六种方法可以对细菌进行定量测量，测量方法的选择取决于制造商和消费者协商确定之间的协议。抗菌结果表示为受试样品和未处理对照样品中细菌数量的对数值之差。表C.1给出了TCMNMs抗菌性能的有效性。表C.1TCMNMs抗菌性能的有效性抗菌性能的有效性抗菌活性值Aa显著的极好的A≥3A为受试样品和未处理对照样品中细菌数量的对数值之差。C.2抗真菌活性的测定基于对纺织品抗真菌活性的定量方法上的不同，GB/T39104系列文件由两部分组成，GB/T39104.1将ATP发光法指定为定量方法，GB/T39104.2将平皿计数法指定为定量方法。用户可从以下方法中选择最合适的评价方法，然后再从两种定量方法中任选一种进行量化：a)吸收法——将测试真菌悬浮液直接接种到标本上；b)转移法——将测试真菌放置在琼脂板上然后转印到标本上。用参考真菌的孢子悬浮液接种受试样品和对照样品，并在25°C下孵育42小时，通过与对照样本的比较，可定量测定真菌的生长情况或抗真菌活性。TCMNMs的抗真菌效果可通过表C.2中给出的判断标准来确定。表C.2TCMNMs抗真菌性能的效果样品用抗真菌活性值表示抗真菌疗效判断标准Aaa说明TCMNM样品与对照样品无效2>Aa≥1较小效果3>Aa≥2中等效果Aa≥3全效aAa是为受试样品和未经处理的对照样品中ATP数量的对数值之差，取三组样品的平均值。注：推荐的判断标准不能保证绝对没有真菌存在，仅表示与对照样品相比，测试样品上的真菌生长较慢或没有生长。C.3防臭能力的测定目前有多种方法可以抑制汗味，其中之一便是使用抗菌纺织品，它可以抑制引起异味的细菌的繁殖和生长。腋窝是一个由密集的细菌群聚居的皮肤区域，其物种组成主要以葡萄球菌和棒状杆菌两个属为主。棒状杆菌的密集数量与强烈腋臭的形成存在着很强的关联性，而主要由葡萄球菌定殖的腋窝仅散发少量气味[29]。因此，纺织品的防臭能力应依据文件ISO20743所使用的棒状杆菌来确定，因为它与腋窝区域臭味的产生有很大关联。参考文献[1]ISO9277Determinationofthespecificsurfaceareaofsolidsbygasadsorption-BETmethod[2]ISO/TS12805Nanotechnologies-Materialsspecifications-Guidanceonspecifyingnanoobjects[3]ISO13099-1:2012Colloidalsystems-Methodsforzeta-potentialdetermination-Part1:Electroacousticandelectrokineticphenomena[4]ISO13099-2Colloidalsystems-Methodsforzeta-potentialdetermination-Part2:Opticalmethods[5]ISO13322-1:2014Particlesizeanalysis-Imageanalysismethods-Part1:Staticimageanalysismethods[6]ISO13629-2Textiles-Determinationofantifungalactivityoftextileproducts-Part2:Platecountmethod[7]ISO16373-3:2014Textiles-Dyestuffs-Part3:Methodfordeterminationofcertaincarcinogenicdyestuffs(methodusingtriethylamine/methanol)[8]ISO/TR18196Nanotechnologies-Measurementtechniquematrixforthecharacterizationofnano-objects[9]ISO/TS19590Nanotechnologies-Sizedistributionandconcentrationofinorganicnanoparticlesinaqueousmediaviasingleparticleinductivelycoupledplasmamassspectrometry[10]ISO19749Nanotechnologies-Measurementsofparticlesizeandshapedistributionsbyscanningelectronmicroscopy[11]ISO20645Textilefabrics-Determinationofantibacterialactivity-Agardiffusionplatetest[12]ISO/TS20660NanotechnologiescharacteristicsandmeasurementmethodsAntibacterialsilvernanoparticles-Specification[13]ISO21363Nanotechnologies-Measurementsofparticlesizeandshapedistributionsbytransmissionelectronmicroscopy[14]ISO/TS80004-6Nanotechnologies-Vocabulary-Part6:Nano-objectcharacterization[15]ASTME3025-16StandardGuideforTieredApproachtoDetectionandCharacterizationofSilverNanomaterialsinTextiles[16]EN16711-2:2015Textiles-Determinationofmetalcontent.Determinationofmetalsextractedbyacidicartificialperspirationsolution[17]https://nanodb.dk[18]KEANAScott,VICENÇPomar-Portillo,SOCORROVázquez-Campos,“NanomaterialsinTextiles.”MetrologyandStandardizationofNanotechnology:ProtocolsandIndustrialInnovations.ED.ElisabethMansfield,ED.DebraL.Kaiser,ED.DaisukeFujita,ED.MarcelVandeVoorde.Weinheim.Wiley-VCHVerlagGmbH&Co.KGaA,2017,P559-569ISBN:978-3-527-80005-6.ePDF[19]VARIERK.M.,GUDEPPUM.,CHINNASAMYA.,THANGARAIANS.,BALASUBRAMANIAN.,LIY.GAJENDRANB.,2019).Nanoparticles:antimicrobialapplicationsanditsprospects.InAdvancednanostructuredmaterialsforenvironmentalremediation(pp.321-355).Springer,Cham[20]AGNIHOTRIShekhar,DHIMANNavneetKaur,Developmentofnano-antimicrobialbiomaterialsforbiomedicalapplications."Advancesinbiomaterialsforbiomedicalapplications.Springer,Singapore,2017.479-545[21]KVíTEKL.,PANACEKA.,PRUCEKR.,SOUKUPOVAJ.,VANICKOVAM.,KOLARM.,ZBORILR.2011).,Antibacterialactivityandtoxicityofsilver-nanosilverversusionicsilver.InJournalofPhysics:ConferenceSeries(Vol.304,No.1,p.012029).I0PPublishing[22]SOTIRIOUGeorgiosA.,PRATSINISSotirisE.,Antibacterialactivityofnanosilverionsa