




版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
鱼类病毒性疾病防治学
鱼类病毒性疾病目录草鱼出血病斑点叉尾鮰病毒病鲤痘疮病锦鲤疱疹病毒病淋巴囊肿病真鲷虹彩病毒病7.传染性脾肾坏死病8.流行性造血器官坏死病9.牙鲆弹状病毒病10.鲤春病毒血症11.病毒性神经坏死病12.传染性胰脏坏死病
草鱼是我国主要的淡水养殖品种,其产量占了我国南方水产养殖品种的半壁江山。长期以来,影响草鱼产量和效益的根本原因就是草鱼的“四病”:病毒性出血病、烂鳃病、肠炎病、赤皮病。草鱼出血病
草鱼出血病是一种严重危害草鱼的一种病毒传染病,对草鱼的鱼种生产和养殖可造成重大损失,我国将之列为二类动物疫病。
【病原】
病原为草鱼呼肠孤病毒(GCRV)或草鱼出血病病毒(GCHV)。病毒为20面体的球形颗粒,直径为70~80nm,具双层衣壳,无囊膜。病毒基因组为双股RNA,由11条片段组成。目前已确定的病毒株分为三种类型,在核酸电泳图谱、毒力和抗原性等方面都有一定差别。流行的毒株第一型占22%,第二型75%,第三型3%。【流行特点】1.
流行区域
草鱼出血病是一种流行地区广泛、流行季节长、发病率高、死亡率高、危害性大的病毒性传染病。此病于1972年在我国湖北滠口首次发现,1978年证实由病毒引起。此病主要流行于湖北、湖南、广东、广西、江西、福建、江苏、浙江、安徽、上海、四川、重庆等我国长江中下游以南广大地区,夏季北方部分地区也有该病流行。2.危害对象草鱼出血病主要危害全长2.5cm~15cm的草鱼鱼种,也可感染麦穗鱼,鲢、鳙、鲫、鲤等淡水鱼类,感染后没有临床症状,但可以携带病毒,是疾病的传染源。当年草鱼死亡率一般在30%-50%,最高可达70%-80%。二龄以上草鱼较少发病,但可携带病毒而成为传染源。3.发病季节和温度主要发生于5~9月水温在20~30℃的季节,尤以25~28℃为流行高峰;但当水质恶化,水中有机氮、亚硝酸态氮和有机物含量高,水温变化大,鱼体抵抗力低下,病毒的数量多及毒力强时,在水温12℃及34.5℃时也有发病。4.传播途径对草鱼出血病的流行病学调查表明,该病的主要传播途径是水平传播(通过水或外寄生虫),传染源是己经感染的或带毒的草鱼,也可通过卵进行垂直传播。5.发病过程(1)潜伏期:从病毒侵入鱼体到出现症状以前的一段时间叫潜伏期。在此期间内,鱼的外表无任何症状,活动与摄食均正常。草鱼出血病的潜伏期约3-10天。潜伏期的长短与水温、病毒的毒力和数量、鱼体的抵抗力、水环境等有密切关系。如水温高、病毒的毒力强、侵入鱼体的病毒数量多、鱼体的抵抗力低、水环境差,潜伏期就短;反之,则潜伏期长。(2)前趋期:这期的期限很短,一般为1-2天。这期的特征为病鱼体色发暗变黑、离群独游、摄食减少或停止,这些症状还不是这种病所特有的。(3)充分发展期:时间长短不一,一般为1-2天,此期为疾病的高潮期,病鱼表现充血、出血等典型症状而死。6.继发感染草鱼出血病病毒的鱼体靶器官是肾,它导致鱼的免疫力下降。发病时正值高温季节,水温一般在25℃~28℃,此时的细菌繁殖也特别快,极易并发继发感染(特别是“老三病”),使细菌容易侵入血液和内脏组织中大量繁殖,造成鱼体严重损伤和出现全身性败血症而大量死亡。这也是GCRV引起草鱼高死亡率的原因之一。【症状与病理】按其症状表现和病理变化的差异,大致可分为三个类型,可同时出现,也可交替出现。1.红肌肉型
主要症状为肌肉明显出血,全身肌肉呈鲜红色,鳃丝因严重出血而苍白,多见于5-10cm的小草鱼种。2.红体表型
主要症状为体表、鳍基、鳃盖严重出血,头顶、口腔、眼眶等处有出血点,多见于10cm以上的大草鱼种。
3.肠炎型
主要症状为肠道严重充血,肠道全部或局部呈鲜红色,内脏点状出血,体表亦可见到出血点,在各种规格的草鱼种中均可见到。肝出血,红肠,积水4.病理变化
血液中红细胞数、血红蛋白量及白细胞数均非常显著地低于健康鱼,单核细胞百分率则非常显著地高于健康鱼;肝脏病变表现为肝血窦胀大,肝细胞空泡变性、颗粒变性;脾脏充血和出血,有大量红细胞浸润,造血组织有核固缩、碎裂及溶解等现象;肾中的毛细血管破裂出血,肾曲小管上皮细胞颗粒变性、胞浆中有嗜酸性包涵体;肠固有层和粘膜下层红细胞浸润、肠上皮剥落于肠腔;骨胳肌纤维肿胀,大量红细胞浸润,局部肿胀呈泡状【诊断】1.初步诊断
水温22~30℃,尤其是25~28℃时,草鱼鱼苗大量死亡,而其他同塘鱼类并无死亡,病鱼出现红鳍、红鳃盖、红肠子、红肌肉等的症状中的一种或多种,应作为草鱼出血病疑似病例2.实验室确诊用草鱼肾细胞系(CIK)或草鱼卵巢细胞系(CO)对疑似病样进行病毒分离,再用凝集试验、酶联免疫吸附试验或PCR鉴定。3.鉴别诊断注意草鱼出血病和细菌性肠炎病的区别。活检时出血病的肠壁弹性较好,肠壁内黏液较少,严重时肠腔内有大量细菌细胞及成片脱落的上皮细胞;而肠炎的肠壁弹性较差,肠腔内黏液较多,严重时肠腔内有大量黏液和坏死脱落的上皮细胞,红细胞较少。患病草鱼虽肠道充血,但仍具有弹性和光泽患细菌性肠炎的肠道虽然也出血,但无光泽、无弹性,且呈腐败、糜烂状【防控措施】1.免疫防治
草鱼出血病目前无有效的药物用于治疗,最有效的控制措施是注射疫苗。由中国水产科学研究院珠江水产研究所研发的草鱼出血病活疫苗(GCHV—892株,冻干细胞疫苗)获得农业部颁发的一类新兽药证书(证书号:(2010)新兽药证字51号),目前由广东温氏大华农动物科技有限公司生产和销售。这是国内外首个获批的草鱼出血病活疫苗,标志着我国水产疫苗研发与应用进入了实质性的产业化阶段。2.其它预防措施对草鱼苗种场、良种场实施防疫条件审核、苗种生产许可管理制度;加强水源消毒,对繁殖用的鱼卵和亲鱼、引进的鱼苗及相应设施等进行严格消毒可切断传染源,减少病毒感染的几率;发现患病鱼必须销毁,并对养殖水体、工具、运输工具及周围的场地进行消毒;采用碘液或碘伏与面粉混合后投喂,对预防和控制疾病有一定作用。第二节斑点叉尾鮰病毒病
斑点叉尾鮰病毒病是斑点叉尾鮰的一种急性传染病,以肾小管和肾间组织的广泛性坏死为主要病理特征,幼鱼病情呈急性暴发性,死亡率高,可造成严重的经济损失。2008年《中华人民共和国农业部公告》第1125号将其列为二类动物疫病。【病原】
鮰疱疹病毒1型(Ictalurid
herpervirus
1),又称斑点叉尾鮰病毒(CCV),属疱疹病毒目、异样动物疱疹病毒科、鮰疱疹病毒属成员。病毒颗粒有囊膜,呈二十面体,双股DNA,直径175~200nm。【流行特点】
斑点又尾鮰病毒病(CCVD)最早于1968年在美国发生,当时主要在北美流行,目前已成为危害世界各国鮰养殖的最主要传染病之一。我国自1984年首次从美国引进斑点叉尾鮰并开展繁育与养殖以来,斑点叉尾鮰的养殖面积和规模逐渐扩大,近几年已有学者在养殖的斑点叉尾鮰鱼苗中分离到CCV,怀疑部分地区曾受到过这种疾病的危害。CCV对宿主有很强的选择性。目前报道,自然暴发病仅仅是斑点叉尾的鱼苗和鱼种;人工注射病毒可以使白叉尾、长鳍叉尾、斑点叉尾与长鳍叉尾杂交种患病,口喂及浸浴则不患病。不同品系的鮰鱼对CCV有不同的易感性,同时鱼龄与临床感染密切相关,刚孵化鱼苗死亡率达100%,八月龄鮰鱼则很少感染CCV。CCV暴发流行与水温、养殖方式有着密切的关系,CCVD的流行水温是20~30℃,在此温度范围内水温越高,发病速度越快,发病率和死亡率越高,当水温在25~30℃时,病程比较短,一般为3~7d,死亡率可达90%以上。本病20℃时潜伏期10天,25~30℃时3天,15℃以下不发病。人工感染后,肾脏在24小时分离到病毒,肝脏及肠则需在70小时分离到病毒,脑在96小时才分离到病毒。高密度养殖、运输、水污染等胁迫因素及细菌感染均可诱发或引起疾病流行和大量死亡。CCV可垂直传播和水平传播。垂直传播是CCV普遍的传播方式,但传播机制不详。水平传播可直接传播或通过媒介传播,其中水是主要的非生物传播媒介,其他生物媒介或污染物也可传播CCV。CCVD流行后,存活鱼可成为隐性无症状带毒鱼;带毒鱼可能通过尿排毒,然后CCV通过皮肤、嗅觉器官、肠道或者鳃感染健康鱼。【症状与病理】CCV感染后宿主可表现为临床症状或和隐性带毒不同类型。病鱼临床表现为食欲下降,离群独游,反应迟钝,病鱼中有些鱼尾向下、头浮在水面,有些出现痉挛式旋转游动(尤其在惊动时),然后沉入水中死亡。病鱼鳍基部(尤其是腹鳍基部)、腹部和尾柄处出血,腹部膨大,眼球单侧或双侧性外突,肛门红肿、外突,表皮发黑、鳃苍白;鳃苍白,有些出血。解剖后可见肌肉出血,腹腔内有黄色或淡红色液体,内脏通常贫血,消化道内无食物,肠道内有淡黄色黏液,脾脏通常肿大变黑,后肾严重损伤。CCVD流行暴发流行后的残存鱼往往隐性带毒者,一般无临床症状。CCV能够侵害斑点叉尾鮰的主要器官,引起肾脏、肝脏、脾脏、分泌组织、胃道、胰腺和骨骼肌聚集或扩散坏死。病毒感染后,鱼体病毒含量最高的器官是肾和脾。组织病理学检查可见肾间造血组织及肾单位弥漫性坏死,同时伴有出血和水肿;肝灶性坏死,偶尔在肝细胞内可见嗜酸性胞浆包涵体;胃肠道黏膜层上皮细胞变性、坏死。【诊断】
根据症状及流行情况进行初步诊断;用虹鳟性腺细胞株分离病毒,观察细胞病变,可做出进一步诊断;最后确诊需采用血清中和试验或/和PCR技术检测,具体办法参见《GB/T15805.4-2008鱼类检疫方法第4部分:斑点叉尾鮰病毒(CCV)》。(1)初步诊断:根据疾病流行的最佳水温25℃~30℃、病鱼的临床症状初步诊断。病鱼眼球突出,鳃苍白,有些出血;皮肤和鳍有出血现象;晚期腹部膨胀,肛门突出。解剖发现胃扩张,内有黏液,肌肉、肾、肝、脾等处可见出血。(2)样品采集:按GB/T18088-2000的规定采样。对有临床症状的鱼,如是体长小于等于4cm的鱼苗取整条鱼,体长4cm-6cm的鱼苗取内脏(包括肾);体长大于6cm的鱼则取脑、肝、肾、脾。而对无症状的鱼要取肾、脾、鳃和脑组织,成熟雌鱼还需取卵巢液,鱼卵则取卵壳。(3)实验室确诊:对可疑样品先用敏感细胞进行病毒培养分离,在细胞出现CPE后用中和试验、免疫荧光、ELISA或PCR中的一种鉴定CCV。①将病鱼组织匀浆上清液接种到斑点叉尾鮰卵巢细胞株(CCO)或BB细胞系,为避免假阴性现象,应采用不同稀释度(1∶10和1∶100……)接种细胞;经25℃~30℃,18小时的培养,病毒在接种细胞内形成核内包涵体、合胞体及细胞崩解等细胞病变(CPE)。在细胞出现CPE后用中和试验和/或PCR技术鉴定CCV。如果样品经过接种细胞和盲传后仍不出现CPE,则判为阴性。②经细胞培养出现CPE,并经中和试验或者PCR试验为阳性者,若出现临床症状,可判为患有斑点叉尾鮰病毒病;若无临床症状,则判为CCV携带者。③若细胞培养出现CPE,仅中和试验为可疑,PCR试验为阴性,则判为可疑。【防治】
该病目前尚无有效的治疗方法,故要加强日常的预防管理,远离一切可能的带毒污染物是阻止CCVD暴发的有效措施。国外现有CCV减毒疫苗,可使鮰鱼苗获得97%的免疫保护力,但国内还无可用的疫苗进行预防。(1)预防措施:①对苗种场、良种场实施防疫条件审核、苗种生产许可管理制度;加强疫病监测与检疫,掌握流行病学情况。②加强综合预防措施,严格执行检疫制度,池埂消毒,对网具、运输工具等用高浓度消毒液浸泡消毒,防止病毒扩散。③渔场中应设置隔离带将鱼卵孵化区和刚孵化鱼苗饲养区分开,并确认与带毒鱼完全隔离。加强饲养管理,夏季要降低鱼苗的养殖密度,减少环境胁迫。④发病地区,养殖对斑点叉尾鮰疱疹病毒病有抵抗力的长鳍叉尾鮰和斑点叉尾鮰杂交种、白叉尾鮰、长鳍叉尾鮰等。(2)处理:发现患病鱼或疑似患病鱼必须销毁,并对养鱼设施进行彻底消毒。(3)划区管理:根据水域和流域的自然隔离情况划区,并实施划区管理。
鲤痘疮病
【病原】鲤痘病毒。一种疱疹病毒,病毒核心为二十面体,呈六角形,外面包有一层囊膜,整个病毒粒子近似球形。病毒直径为140~160nm,核心直径为80~100nm,为有囊膜的DNA病毒提纯的病毒负染电镜照片,显示成熟的病毒颗粒带有松散的囊膜,直径170~230nm【流行特点】
本病流行于欧洲。鲤对这种病特别敏感。目前,在我国上海、湖北、云南、四川等地均有发生。主要危害鲤、鲫及圆腹雅罗鱼等。本病通过接触传染,也可能通过单殖吸虫、蛭、鲺等传染。流行于冬季及早春低温(10~16℃)时。水质肥的池塘、水库和高密度的网箱养殖流行较为普遍,当水温升高后会逐渐自愈。【症状与病理】
病鱼体表出现俗称“石蜡样增生物”,状似痘疮。这种增生物一般不能被摩擦掉,但增长到一定程度会自然脱落,接着又在原患部再次出现新的增生物。对大鱼危害不大,不会致死。但如增生物占鱼体的大部分,会严重影响鱼的正常发育,对骨骼特别是对脊椎骨的生长发育影响较大,可引起骨质软化。【症状与病理】组织学检查,增生物为上皮细胞及结缔组织增生形成,在有些上皮细胞的核内可见包涵体,染色质边缘化。增生物不侵入真皮,也不转移。电子显微镜下在增生的细胞质内可以见到大量的病毒颗粒。痘疮切片的电镜照片(上:已成熟的病毒颗粒在空泡中向细胞膜移动,正通过空泡向细胞表面释放;下:为局部放大)【诊断】(1)肉眼:根据“石蜡状增生物”等症状及流行情况,作出初步诊断。(2)光镜:病理组织学检查,可见增生物为上皮细胞及结缔组织组织异常增生,有些上皮细胞的核内有包涵体。(3)电镜:确诊须进行电子显微镜观察,见到疱疹病毒或分离培养到疱疹病毒。【防控措施】预防措施:(1)加强综合预防措施,严格执行检疫制度。(2)流行地区改养对本病不敏感的鱼类。(3)升高水温及适当稀养,也有预防效果。(4)将病鱼放入含氧量高的清洁水(流动水更好),体表增生物会自行脱落。【治疗方法】(1)排出原池水3/5,使用生石灰全池泼洒,调pH为9.4~10后加入新水。(2)每立方米水体每天使用10%聚维酮碘溶液0.45~0.75mL,全池泼洒。(3)每千克饲料添加银翘板蓝根3.2~4.8g,或七味板蓝根8~16g,每天投喂2次,连续投喂7d。
锦鲤疱疹病毒病
锦鲤疱疹病毒病(KHVD)是鲤和锦鲤的一种急性、接触性传染病,对北美、欧洲和亚洲的锦鲤、鲤危害均极为严重。
2008年《中华人民共和国农业部公告》第1125号将其列为二类动物疫病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须申报的疾病
【病原】鲤疱疹病毒3型(CyprinidsHerpesvirus-3,CyHV-3),又名锦鲤疱疹病毒(KoiHerpesvirus,KHV)。核衣壳呈对称二十面体结构,直径为100~110nm,双链DNA。成熟的病毒颗粒带有松散的囊膜,直径170~230nm。疱疹病毒结构示意图【流行特点】1.
流行区域
1998年以色列首次报道了锦鲤疱疹病毒病,锦鲤和鲤死亡率高达75%~95%,直到1999年才确认KHV为其真正的病原。自1998年以来,该病在英国、欧洲大陆、美国及以色列等国家和地区暴发流行,印度尼西亚、日本、韩国、我国台湾省等地养殖的锦鲤也因锦鲤疱疹病毒病而大量死亡。2.危害对象无大小限制的锦鲤、鲤和鬼鲤及这些品种的杂交种均对KHV高度敏感。在实验条件下,2.5g~6g的鱼比230g的鱼更为敏感。也可感染麦穗鱼,鲢、鳙、鲫、鲤等淡水鱼类,感染后没有临床症状,但可以携带病毒,是疾病的传染源。鲤科鱼类,包括白鲢、草鱼、鳙未有感染KHV的报道,这些鲤科鱼类无论与鲤在自然条件下混养、亦或与病鱼同居感染、直接接触病毒而不发病3.发病季节和温度最适温度是23~28℃(低于18℃,高于30℃不会引起死亡)。已感染的鱼,水温18~27℃间持续时间越长,疾病暴发的可能性越大,在此水温范围外死亡率明显降低。该病多发于高温季节,具有潜伏期14d,鱼发病并出现症状24~48h后开始死亡,2~4d内死亡率可迅速达80%~100%。4.传播途径主要通过水平传播。暴发后幸存的鱼成为疾病的传播者,可将病毒传染给其他健康的鱼,水是传播病毒的主要非生物载体,无临床症状的养殖和野生鱼也可能是病毒的储存库,病毒粒子通过粪便,尿液,鳃和皮肤粘液排出。能否垂直传播目前尚未确定。5.发病过程(1)潜伏期:从病毒侵入鱼体到出现症状以前的一段时间叫潜伏期。在此期间内,鱼的外表无任何症状,活动与摄食均正常。锦鲤疱疹病毒病的潜伏期约14天。(2)前趋期:这期的期限很短,一般为1-2天。这期的特征为病鱼患病鱼无力、无食欲,呈无方向感的游泳,或在水中呈头下尾上的姿势漂游,甚至停止游泳,这些症状还不是这种病所特有的。(3)充分发展期:时间长短不一,一般为1-2天,此期为疾病的高潮期,皮肤充血,鱼眼凹陷,爆发死亡。类似寄生虫感染和细菌感染。【症状与病理】主要症状为鱼体皮肤上出现苍白的块斑和水泡,鳍条尤其是尾鳍充血,鳃出血并产生大量黏液或出现大小不等的块斑状组织坏死,鳞片有血丝,鱼眼凹陷,出现症状后24~48h死亡。有些鱼表现神经症状,极小的刺激能引起较强烈的反应。【症状与病理】无显著性、特征性组织病理变化。鳃的病变最稳定,初级鳃小片腐蚀,次级鳃小片融合,初级和次级鳃小片的尖部肿胀。脾脏有出血点,镜检发现内部有少量出血点;后肾肿大,镜检有出血点,鲜红色;胆固缩,颜色变深。自然感染时,鳃、肾脏和脾脏含病毒量最丰富。【诊断】我国目前尚无锦鲤疱疹病毒病诊断的国家标准初步诊断
病毒致死特异性特点可有助于该病的诊断。水温在18~30℃之间有大量死亡,水温升高或降低,死亡率下降或停止。死亡极快,从出现发病症状到死亡只要24~48h;死亡率极高,如果疾病暴发10d内死亡率可达80%~100%。即使观察到的是类似细菌或寄生虫病的症状,也应当高度怀疑KHV感染2.实验室确诊目前有效的检测和诊断手段主要有:细胞分离法、PCR、免疫荧光、ELISA等。敏感细胞系培养KHV,其培养适合温度为15~25℃,最适培养温度为20℃。PCR技术是目前较为精确的检测锦鲤疱疹病毒感染的方法。3.鉴别诊断应与普通细菌感染和寄生虫侵袭相区别,特别是与细菌性烂鳃病进行区分。敏感细胞系感染KHV后出现的CPE和PCR检测阳性【防控措施】1.免疫防治目前无有效的药物用于治疗,对病毒性疾病的预防最有效的控制措施是注射灭活或弱(减)毒疫苗,但目前该病尚无商品化的疫苗,因此对该病的防制应采用综合防制措施加以控制和消灭2.预防措施:①加强进出口口岸检疫,防止通过贸易进口和观赏鱼的交流将KHV传入我国。②对苗种场、良种场实施防疫条件审核、苗种生产许可管理制度。③加强疫病监测,掌握流行病学情况。④通过培育或引进抗病品种,提高抗病能力。2.预防措施:⑤加强饲养管理等综合措施,应对水源、繁殖用的鱼卵和亲鱼、引进的鱼苗及相应设施等进行严格消毒,可切断传染源,减少病毒感染的几率。⑥有一些方法可以启动锦鲤对KHV的免疫应答,如将感染鱼饲养于20~28℃一段时期,然后降低或升高温度使病毒失活,类似于疫苗免疫,从而使机体获得免疫力,达到免疫的目的。以色列用筛选出的弱毒株经射线处理后,对健康鱼进行免疫,能起到一定的保护作用。3.处理
发现疑似病例需及时向渔业主管部门上报;患病鱼和死鱼必须销毁,并对水和用具进行彻底消毒。紫外线、90°C以上10min、200mg/L的漂白粉浸泡1h、500mg/L的季铵盐碘浸泡1h。4.划区管理
据水域和流域情况及自然屏障进行划区,并对其实施区域管理淋巴囊肿病【病原】淋巴囊肿病毒(LDV)。属虹彩病毒科,细胞肿大病毒属,为DNA病毒。病毒粒子呈正二十面体,其轮廓呈六角形,有囊膜,囊膜厚50~70nm。大量病毒颗粒堆积,可呈晶格状排列;大小随宿主鱼而异,直径一般为200~260nm。病毒核心为缠绕在一起的双股DNA纤丝团核心,直径约为120~140nm。。虹彩病毒结构示意图【流行特点】该病流行很广主要发生在海水鱼类。全年可见,但在水温10~20℃时为发病高峰期。在低密度和良好养殖条件下,一般不会引起大量死亡。在苗种阶段和1龄鱼种,发病后2个月死亡率达30%以上;2龄以上的鱼很少出现死亡。该病毒传染性不强,通常在一个养殖群体中仅有部分鱼生病。实验证明,淋巴囊肿病毒不能通过血液在鱼体内的各器官之间传播。皮肤檫伤或寄生虫机械损伤的伤口,往往成为病毒侵入的门户。【症状与病理】淋巴囊肿病是一种慢性皮肤瘤,病鱼的皮肤、鳍和尾部等处出现许多菜花样囊肿物,囊肿物多呈白色、淡灰色和灰黄色,有的带有出血灶而显粉红色,较大的囊肿物上有肉眼可见的红色小血管;囊肿大小不一,除发生在鱼体表外,有时在鳃弓或鳃片上也可以观察到。鱼发病时行为和摄食正常,但生长缓慢;病症严重的基本不摄食,部分死亡。部分感染的鱼体表囊肿物脱落,恢复正常,并可在一定时间内具有免疫力。
【症状与病理】鱼表皮下结缔组织中的成纤维细胞被病毒侵染,致使细胞增生、变圆、膨大和聚集,形成淋巴囊肿细胞淋巴囊肿细胞在切片组织中互相挤压呈不规则形,细胞核呈空泡状,核膜明显,细胞核内没有病毒颗粒;细胞质内可见大量的包涵体和病毒粒子。左:淋巴囊肿压片后的巨大细胞,其中部分细胞已经破裂右:淋巴囊肿切片中的巨大细胞。细箭头示一些正常大小的细胞;三角形箭头示细胞质内的网状包涵体【诊断】通过肉眼观察外观症状,可进行初诊。确诊可用BF-2、LBF-1等细胞株分离培养病毒,通过电镜观察到病毒粒子。另外,可用LDV的ELISA检测方法,或LDV的免疫荧光检测方法。【防治】1.预防措施(1)引进亲本、苗种应严格检疫,发现携带病原者彻底销毁。(2)严格控制养殖密度,防止高密度养殖。(3)优化水环境,加大换水。(4)避免经常性地倒池、更换网箱,养殖操作谨慎,防止鱼体表受损。(5)提高养殖鱼体抗病力。(6)养殖池塘(或网箱)发现病鱼,及时捡除并进行隔离养殖排出的水用浓度为10mg/L的漂白粉消毒2.治疗方法
(1)将病鱼囊肿割除(囊肿量少时),并用浓度为每立方水300ml福尔马林浸浴30-60min,再饲养在清洁的池中,精心管理。(2)投喂抗生素药饵,每千克饵料拌氟哌酸50-100mg或土霉素1-2g,连续投喂5-10d,可防止细菌性继发性细菌感染。(3)将过氧化氢溶液(30%浓度)稀释至3%,以此为母液,配成50mg/L的浓度,浸洗20min,然后将鱼放入25℃水温饲养一段时间后,淋巴囊肿会自行脱落。真鲷虹彩病毒病【病原】真鲷虹彩病毒(RSIV)。属虹彩病毒科,细胞肿大病毒属。病毒粒子为正二十面体,大小200~260nm,DNA病毒【流行特点】该病1990年最先发现于日本养殖的真鲷,主要危害幼鱼,发病后死亡率高达37.9%。1周龄以上的鱼,发病较轻,死亡率4.1%左右。发病期在7~10月份,水温22.6~25.5℃为发病最高峰期。水温降至18℃以下可自然停止发病。RSIV亦侵染条石鲷、五条鰤和花鲈。真鲷虹彩病毒病的主要传播方式是水平传播,病毒的流行病学调查也证明垂直传播途径客观存在。【症状与病理】病鱼体色变黑,昏睡、严重贫血。体表和鳍出血,鳃上有瘀斑,外观呈灰白色。本病的特征是在显微镜下病鱼的脾、心、肾、肝和鳃组织的切片中有能被Giemsa染色的异常肥大的细胞,直径15~20μm,电镜观察这些细胞中有许多病毒粒子。该病毒病是一种全身性、系统性感染,病毒对鱼体上皮组织和内皮组织亲嗜性较强,对脾脏、肾脏等鱼类造血器官和组织的破坏尤为严重,从而导致病鱼贫血、器官衰竭而死亡。
【诊断】根据病鱼体表、鳃的外观症状和脾脏肥大可做出初步诊断取病鱼脾脏、肝脏、心脏、肾脏或鳃组织,切片,Giemsa染色,在光镜下观察到被Giemsa浓染的异常肥大的细胞;另可采用电镜作脾脏组织超薄切片,观察到病毒粒子;PCR技术已应用于对RSIVD的诊断,并且发现与免疫学诊断比较,PCR的灵敏性、准确性更高。也可用敏感细胞系及免疫荧光等病毒经典检测方法。【防治】参考之前的病毒病。对该病以预防为主,加强饲养管理。目前,日本已经研制出真鲷虹彩病毒的商用化疫苗。
传染性脾肾坏死病传染性脾肾坏死病俗名鳜暴发性传染病,是以脾肾坏死为主要病理特征的一种病毒性疾病,可引起淡水养殖鳜暴发性死亡,严重危害我国鳜养殖业发展。2008年《中华人民共和国农业部公告》第1125号将其列为二类动物疫病;与其病原类似的真鲷虹彩病毒病被OIE列为必须申报的疾病。【病原】传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)。虹彩病毒科,肿大病毒属。完整病毒颗粒直径约135nm±10nm,具包膜,切面为六角形、二十面体。病毒基因组为双链DNA。【流行特点】传染性脾肾坏死病主要流行于我国南方淡水养殖的翘嘴鳜中。人工感染研究揭示,ISKNV在鳜体内可长期潜伏,流行高峰期鳜在10d内死亡率高达90%左右。最适流行温度为28~30℃,20℃以下,ISKNV人工感染鳜鱼,鳜鱼不会发病,呈隐性感染状态;气候突变和气温升高、水环境恶化是诱发该病大规模流行的重要因素ISKNV水平感染途径有二种,一种是经体表感染,一种是经口感染主要传播方式是水平传播,病毒的流行病学调查也证明垂直传播途径客观存在【症状与病理】病鳜嘴张大,呼吸加快加深,失去平衡,不能消化吞食饲料鱼;部分病鱼鱼体变黑,有时有抽筋样颤动。病鳜解剖,见脾脏肾脏肿大、溃烂、充血。200g以下的鳜解剖,常见有腹水。大部分鱼鳃贫血,呈苍白色,而有时伴有寄生虫寄生或细菌感染呈现出血、腐烂等现象;受感染的细胞肿大,主要感染脾和肾,导致脾脏和肾脏肿大坏死,出现空洞,并有大量白细胞浸润;在脾脏和头肾-组织的细胞质内可观测到大量的病毒颗粒。其他受感染的组织细胞虽然有少量病毒感染,但病变不明显。感染ISKNV的细胞肿大【诊断】
我国目前尚无该病诊断的国家标准,可参考水产行业标准SC/T7211-2011《传染性脾肾坏死病毒检测方法》进行诊断。(1)根据症状及流行情况进行初步诊断。(2)病理切片检查可作出进一步检查。(3)实验室确诊
【防治】
目前,该病的疫苗仍处于试验阶段,可行的预防方法是避免接触病毒和半封闭式养殖管理、保持水质稳定。因此严格检疫,保证水源、引入鱼卵和鱼不带病毒,实行半封闭式池塘养殖管理,及时进行消毒,切断鱼苗来源的垂直传播途径和通过水体的水平传播途径。平时加强饲养管理,健康养殖,保持水质优良,提高鱼体抗病力;还可注射多联灭活疫苗(尚处于试验阶段),进行综合预防。采用较温和的中草药预防和治疗,不乱用药物,在发病季节及时预防细菌、寄生虫感染,保持水质优良、稳定等。(2)处理:发现病鱼经确诊后必须全群销毁,同时对水源和用具进行无害化处理。(3)划区管理:根据水域和流域的自然隔离情况划区,并实施划区管理。流行性造血器官坏死病流行性造血器官坏死病是一种鱼类全身性传染病,自然宿主仅见于赤鲈和虹鳟,主要流行于欧洲和澳大利亚。2008年《中华人民共和国农业部公告》第1125号将其列为二类动物疫病;世界动物卫生组织(OIE)在AquaticAnimalHealthCodeandManualofDiagnosticTestsforAquaticAnimals(2011)中将其列为必须申报的疾病。【病原】流行性造血器官坏死病毒(EHNV),属虹彩病毒科蛙病毒属成员。【流行特点】
流行性造血器官坏死病(EHN)目前仅流行于澳大利亚部分地区,赤鲈(俗名河鲈)和虹鳟是目前仅知的两种流行性造血器官坏死病毒(EHNV)的自然感染宿主;各个年龄段的赤鲈和虹鳟均易感,但鱼苗和稚鱼的症状较成鱼明显。通过浸泡感染试验,澳大利亚河鲈、银鲈、食蚊鱼和山南乳鱼等其他刺鳍鱼类也易感。金鱼和鲤等可抵抗EHNV的感染。而欧洲鮰病毒(ECV)和欧洲鲇病毒(ESV)主要引起欧洲鮰和欧洲鲇的发病死亡,在欧洲有很高的发病率和死亡率。人工感染表明ECV和ESV能感染虹鳟,但不会引发虹鳟发病和死亡。EHNV对赤鲈的致死和流行与水温、水质恶化情况有直接关系。一般在水温12~18℃时潜伏期为10~28d,19~21℃时为10~11d,天然水体中的河鲈在水温低于12℃时一般不会发病。对虹鳟危害相对较小,只有少量群体易感,自然感染水温为11~20℃,潜伏期3~10d,人工感染在8~21℃均可发生。养殖鱼密度太高或水质太差均可促进疾病暴发。根据虹鳟群发病栖息地,可再次感染野生河鲈的情况,认为病鱼、带毒鱼及污染水体为EHNV的传染源。虹鳟、赤鲈EHN能在互相隔离的河网、库区及其上游广泛发生,表明其传播途径除水外,还可经活鱼运输和钓鱼饵料传播。一旦传播,就会引起疾病的流行。目前在卵巢中尚未检测到病毒,表明病毒通过垂直传播的可能性较小。【症状与病理】
无特征性临床症状,仅见鱼大量死亡。濒死鱼运动失衡、鳃盖张开、头部四周充血,有的病鱼体色发暗,皮肤、鳍条和鳃损伤坏死,解剖后有时可见肝表面有直径1~3mm的小白点。多见于饲养密度过高、水质恶化等饲养管理不善的渔场。EHNV靶器官和组织为肝、肾、脾和其他薄壁组织,主要侵害肝细胞、造血细胞和内皮细胞等。组织病理学观察,可见肝、脾和肾造血组织呈急性局灶性、多灶性或局部大量凝结性或液化性坏死,肝和肾坏死灶边缘可见少量嗜碱性质内包涵体。坏死性病变也可见于心、胰腺、胃肠道、鳃和伪鳃。【诊断】
我国目前尚无该病诊断的国家标准,可参考OIEManualofDiagnosticTestsforAquaticAnimals的EHN有关章节或检验检疫行业标准SN/T2121—2008《流行性造血器官坏死病检疫技术规范》进行诊断。
OIE推荐用细胞培养分离病毒、ELISA方法对EHNV、ESV和ECV进行诊断和调查。SN/T2121—2008规定了流行性造血器官坏死病的病原分离、酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应检测方法。(1)初步诊断:该病无特征性的临床症状,难以根据流行病学、临床症状和病理变化作出初步诊断,通常需要采用实验室检测来作出诊断。(2)样品采集:有临床症状的鱼,体长小于3cm的鱼苗取整条鱼后,去头和尾;体长3~6cm的鱼苗取内脏(包括肾);体长大于6cm的鱼则取肝、肾和脾。(3)实验室诊断:EHNV在蓝鳃鱼幼鱼细胞系(BF-2)、大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE-214)或鲤上皮乳头瘤细胞系(EPC)等许多鱼细胞系中生长良好,尤以BF-2培养最佳。待出现细胞病变后,再用ELISA或PCR方法检测。如果鱼有临床症状,并且从病鱼中分离到病毒并用PCR或者ELISA鉴定为EHNV;或者用ELISA检测病鱼的组织中有EHNV抗原,则确诊为患流行性造血器官坏死病;如果没有临床症状,从样品中分离到病毒并用PCR或者ELISA鉴定为EHNV,则确认为病毒携带者。(4)鉴别诊断。EHNV和ECV、ESV的生物学特性接近,可根据地理分布初步区分,目前EHNV仅分布于澳大利亚,ECV和ESV仅流行于欧洲;EHNV主要衣壳蛋白(约为51kd)比ESV、ECV衣壳蛋白(约为49kD)稍大,可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行区分;PCR扩增后,产物测序可区分EHNV、ESV和ECV。本病还应与传染性造血器官坏死病(IHN)进行区分,本病的病原属虹彩病毒科蛙病毒属,IHNV属弹状病毒科粒外弹状病毒属。
大量死亡的赤鲈腹部肿胀,右下图示病鱼鳃出血病鱼肝上有直径1-3mm大小的白点【防治】该病目前尚无有效疫苗预防。(1)预防措施:
①
对苗种场、良种场实施防疫条件审核、苗种生产许可管理制度;②
加强疫病监测与检疫,掌握流行病学情况;③
培育或引进抗病品种,提高抗病能力,并加强饲养管理。④
采用PCR技术检测隐性带病毒亲鱼,剔除带毒怀卵雌鱼,切断病毒垂直传播的途径。(2)处理:发现疑似患病鱼必须马上隔离,尽快上报,并立即送样品到专门实验室确诊。一旦疫情确认,病鱼或疑似病鱼必须销毁,并对养鱼设施进行彻底消毒。(3)划区管理:根据水域和流域的自然隔离情况划区,实施划区管理。牙鲆弹状病毒病【病原】弹状病毒科中的牙鲆弹状病毒((HirameRhabdovirus,HRV)。属于单股负链RNA病毒目,弹状病毒科,粒外弹状病毒属(Mononegavirales,Rhabdoviridae,Novirhabdovirus)
病毒基因组为单股负链的RNA,长约11000bp,主要包含5个基因病毒粒子呈子弹形,大小为80nm×(160~180)nm。弹状病毒结构示意图及基因组信息示意图【流行特点】此病首先在日本发现,主要危害牙鲆,从幼鱼到成鱼均可被感染。发病季节为冬季和早春,水温10℃时为发病高峰期,死亡率可高达60%。水温15℃以上时,疾病有自然停止的倾向。在香鱼和许氏平鲉中也分离到此病毒。人工感染真鲷、黑鲷稚鱼有强烈的致病性,对虹鳟也具致病性。【症状与病理】患病的牙鲆体色变黑,动作缓慢,静止水底或漫游于水面体表和鳍基部充血或出血,腹部膨胀,内有腹水;生殖腺淤血;肌肉出血;肾脏造血组织坏死。【症状与病理】细胞核固缩、破碎、崩解和消失,肾小管上皮崩解、坏死,黑色素大量沉积;脾脏内实质细胞坏死;肠管黏膜固有层、黏膜下肌肉层充血、肿胀,胃黏膜上皮、黏膜下肌肉层显著出血;肝脏毛细血管扩张、充血,肝脏实质细胞变性、坏死。
【诊断】通过肉眼观察外观症状,可进行初诊。
确诊可用RTG-2细胞株分离培养病毒,通过电镜观察到病毒粒子。PCR鉴定,ELISA鉴定
HRV接种RTG-2细胞CPE及电镜切片【防治】1.预防措施:(1)引进亲本、苗种应严格检疫,发现携带病原者彻底销毁。(2)养殖池塘(或网箱)发现病鱼,要及时捡出并进行隔离养殖,排出的水用浓度10mg/L的漂白粉消毒。(3)工厂化养殖用水经紫外线或臭氧消毒,也可用含氯消毒剂或二氧化氯消毒。2.治疗方法提高养殖水温至15℃以上,可以有效地防止本病的发生。鲤春病毒血症鲤春病毒血症(SVC),又称鲤鳔炎症、急性传染性腹水、鲤传染性腹水症等。由鲤春病毒血症病毒引起鲤鱼科鱼类的一种急性、出血性传染病。该病主要在欧洲的鲤鱼养殖中广泛传播,造成了巨大的经济损失。
2011年被世界动物卫生组织(OIE)列为必须申报的疾病。我国2008年将之列为一类动物疫病。【病原】
病原为鲤春病毒血症病毒(spring
viraemia
of
carp
virus,
SVCV),属弹状病毒科鲤春病毒属成员(Rhabdoviridae,
Sprivivirus)。是一种单链RNA病毒,病毒颗粒呈棒状或子弹状,大小为90~180nm×60~90nm,有囊膜。【流行特点】
鲤春病毒血症(SVC)最早流行于东欧和中欧,严重危害欧洲水产养殖业。随着鱼类贸易和引种,该病已传播到美洲
1998年英国环境、渔业和水产养殖科学研究中心从来自中国北京的金鱼和锦鲤中分离出SVCV,2003年深圳出入境检验检疫局在天津的两个养殖场的观赏鱼中也分离到了SVCV。【流行特点】
SVCV感染谱广泛,主要感染鲤和锦鲤,可引起鲤和锦鲤大批发病和死亡,还可感染鲤、锦鲤、鳙、鲢、鲫、丁鱥和欧鲶等各种鲤科鱼类,可使虹鳟、草鱼、狗鱼人工感染发病。各个年龄段的鱼均可患病,但鱼龄越小越易感。SVCV感染后的潜伏期与水温及鱼体本身状况有关,水温越适宜、鱼体健康状况越差越容易感染。【流行特点】
此病在春季水温7℃以上时开始发生,水温15℃~17℃左右时最为流行。在春季水温低于15℃时,鲤越冬由于长期的低水温免疫力降低,容易大面积流行、暴发鲤春病毒病,当水温超过22℃就不再发病,鲤春病毒血症由此得名。【流行特点】
在外界环境中,SVCV在低温下非常稳定,-20℃下保藏1个月,或-30℃或-74℃下保藏6个月毒力不减。传染源为病鱼、死鱼和病毒携带鱼。感染途径主要以水体为媒介,水温10~15℃时潜伏期约为20天。期间为呈现持续性的病毒血症时期,无症状的带毒鱼体能持续数周通过粪、尿将病毒排出体外。外伤也是重要的传播因素,可通过鱼类寄生虫传播到健康鲤鱼鱼体上。理论存在垂直传播。【症状与病理】感染SVCV的鱼类常常聚集在池塘的进水口附近,呼吸缓慢、行动迟缓、食欲降低,这是SVC暴发的早期信号。病毒在鱼体内毛细血管内皮细胞、造血组织和肾细胞内大量增殖。感染鱼类突出特点:失去平衡,眼球突出,腹部肿大,腹水自动流出,肌肉出血,内脏出血有血点。该病还经常伴随着细菌和寄生虫的并发感染,其中以气单胞菌(Aeromonasspp.)的感染最为显著。【症状与病理】
SVCV感染鲤幼鱼后的组织病理学:
肝脏出现水肿、实质组织显示多个病灶坏死及充血
胰脏中通常可以观察到炎症和多个坏死病灶
腹膜、肠道、脾脏、心包膜有明显炎症,鳔出血明显
切片可见肾小管堵塞,出现空泡和透明化
左图:健康鲤鱼右图:患病鲤鱼,可见腹部明显肿大
【诊断】鲤春病毒血症的诊断可根据发病水温、病鱼外表特征与临床症状做出初步判断。
疫病的确诊参照《GB/T15805.5-2008鱼类检疫方法第5部分:鲤春病毒血症病毒(SVCV)》。该标准规定了细胞分离病毒后,用逆转录-聚合酶链式反应(PT-PCR)技术诊断SVC病毒的方法。【鉴别诊断】
在自然情况下,SVC通常与细菌性病原并发感染或者继发感染。
单独SVC感染通常无体表开放性病灶,如病鱼体表出现明显的开放性病灶表明有细菌混合感染。【防治】
目前,该病唯一可行的预防方法是避免接触病毒。该病疫苗仅处于实验阶段。
严格检疫,保证水源、引入鱼卵和鱼不带病毒,养鱼设施消毒等是切实可行的防治措施。对苗种场、良种场实施防疫条件审核、苗种生产许可管理制度。
加强疫病监测与检疫、掌握流行病学情况。以及通过培育或引进抗病品种、切断传染源以及加强饲养管理等综合措施控制本病。【预防措施】①对苗种场、良种场实施防疫条件审核、苗种生产许可管理制度。②加强疫病监测与检疫、掌握流行病学情况。③培育或引进抗病品种、切断传染源以及加强饲养管理。④保证水源、引入鱼卵和鱼不带病毒,养鱼设施消毒等是切实可行的防治措施。⑤如果在流行病学监测过程中发现有无症状的携带SVC病毒鱼,应当立即进行隔离,禁止运输和贸易,并密切观察监控【防治措施】(2)处理:发现疑似患病鱼必须马上隔离,尽快上报,并立即送样品到专门实验室确诊。一旦疫情确认,应当销毁整个鱼群,并对养殖水体、工具、运输工具及周围的场地进行彻底消毒。(3)划区管理:根据水域和流域的自然隔离情况划区,并实施划区管理。
病毒性神经坏死病鱼类病毒性神经坏死病,又称为病毒性脑病和视网膜病(VER),以病鱼的脑部和视网膜存在明显空泡化为主要病理特征,是一种严重危害海水鱼类鱼苗的一种病毒性传染病。2008年《中华人民共和国农业部公告》第1125号将其列为二类动物疫病。【病原】
病毒性神经坏死病病毒(nervousnecrosisvirus,NNV)属于野田村病毒科、乙型野田村病毒属(Nodaviridae,Betanodavirus)成员。单链正股RNA病毒。病毒粒子球形,二十面体,无囊膜,直径25~34nm,类晶格状或单个或成团状排列在细胞质内。【流行特点】
病毒性神经坏死病(VNN)是海水鱼类最常见、危害最严重的传染病之一,流行于美洲和非洲以外几乎所有养殖地区。1985年,日本、东南亚、澳大利亚等地区多种海水鱼类种苗培育中暴发了一种鱼病,鱼苗死亡率高达90%以上。1990年日本学者在患病鱼脑部发现病毒粒子,并首次将此病命名为病毒性神经坏死症。我国台湾地区从1997年报道VNN,大陆地区从2001年开始发现并报道此病,主要流行在石鲷、鰺、石斑鱼、红鳍东方魨等的仔鱼和幼鱼上,也有部分种类的成鱼会被感染【流行特点】
我国台湾地区1997年报道VNN,大陆地区从2001年开始发现并报道此病。目前已发现该病至少可在11科22种鱼中流行,常发生在尖吻鲈、赤点石斑、棕点石斑、巨石斑、红鳍东方鲀、条斑星鲽、牙鲆和大菱鲆等海水鱼鱼苗中。对病毒的敏感性与鱼龄有关,发病季节各个地方不同,如台湾地区一般在每年的4~9月养殖水温相对高的时候,特别是6~8月的夏季最容易暴发此病,低温季节一般不发病。【流行特点】
已知的NNV感染途径主要有两种:一为来自亲鱼的垂直传播。感染病毒亲鱼的鱼卵中可检测到NNV。一种感染途径是通过养殖水体中的病毒引起的水平传播垂直传播为主要感染方式。目前我国许多海水鱼养殖场多采用多品种、多规格鱼类混养方式,常常可见整个海区相继发生同样临床症状的传染病,即是病毒水平传播的结果。【症状与病理】
鱼类病毒性神经坏死病的最常见的临床症状表现为行为不协调、呈螺旋状游泳、或急促游动等典型的神经症状。病鱼食欲下降或厌食,眼睛和体色表现异常,鳔肿胀导致腹部膨大,发病严重的鱼苗伴随着极高的死亡率。解剖后鳔异常肿大导致的腹部肿大【症状与病理】脑神经组织和视网膜是NNV的主要靶器官,组织病理学变化主要表现在脑和视网膜细胞空泡化。最典型的组织坏死病变是脑灰质细胞胞浆内出现空泡。组织损伤还表现为受感染细胞核固缩,细胞失水,嗜碱性;神经细胞核固缩、裂解,神经纤维突颗粒状,单核细胞渗漏;大脑血管损伤,管壁出现嗜酸性物质;脑细胞质中还出现嗜碱性的包涵体。【诊断】
对于病毒性神经坏死病的诊断,我国目前已有国家标准《GB/T27531-2011病毒性脑病和视网膜病病原逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法》,也可参照检验检疫行业标准《SN/T2625-2010病毒性脑病和视网膜病检疫规范》进行。(1)
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 劳动合同标准格式范文
- 简易自愿离婚合同模板
- 菜鸟驿站快递柜租赁合同
- 餐饮企业战略合作区域代理合同样本
- 老旧农村房屋转让合同范本
- 自行车安全培训课件
- 木工机械的现代控制技术考核试卷
- 木质游艺器材制作工艺考核试卷
- 批发行业的品牌形象塑造考核试卷
- 合成材料在汽车制造领域的应用研究考核试卷
- 娱乐场所安全承诺声明
- 2025届广东省广州市番禺区数学高一下期末检测试题含解析
- 2024年镇江市高等专科学校单招职业适应性测试题库完美版
- 珠海市高级技工学校校企合作管理办法修订
- GB 31825-2024制浆造纸单位产品能源消耗限额
- 消防设施操作员报名工作证明(操作员)
- MOOC 量子信息原理与应用-南京大学 中国大学慕课答案
- 医保基金监管培训课件
- 参地益肾口服液作用机制研究
- 供应商开发流程及质量要求
- 2024年技术监督质检职业技能考试-电力技术监督上岗员(中国华能)笔试历年真题荟萃含答案
评论
0/150
提交评论