液相色谱仪使用及维护方法 液相色谱如何做好保养

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使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。液相色谱柱使用注意：A．卡套柱的

液相色谱仪使用时要特别的注意：

使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。

液相色谱柱使用注意：

A．卡套柱的安装（加预柱）

1．将卡套架套入柱芯

2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯

3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片

4．将"子弹头"预柱放入卡套片内

5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧

6．然后依同样的次序连接好柱子的另一端

B．平衡色谱柱

反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请确定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；假如您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。

硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。假如该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡

如何平衡色谱柱？

平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度假如较低，则需要较长的时间来平衡）

色谱柱的再生

进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议可以不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

注意：

在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应当在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。假如简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗特别有效。

色谱柱的维护:

1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有确定的溶解度）

2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围

3．避开流动相构成及极性的猛烈变化

4．流动相使用前必需经脱气和过滤处理

5．假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在试验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中

6．压力上升是需要更换预柱的信号

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液相色谱仪分类有多种

1、按分别目的可分：试验室液相色谱仪和工业液相色谱仪。

2、按固定相物理状态可分：液液色谱仪和液固色谱仪。

3、按色谱柱形状可分：填充柱液相色谱仪和平板液相色谱仪。

4、按分别原理可分：吸附液相色谱仪、调配液相色谱仪、离子交换液相色谱仪和凝胶液相色谱仪。

5、按分别模型可分：线性液相色谱仪和非线性液相色谱仪。

6、按分别动力学过程可分：迎头液相色谱仪、顶替液相色谱仪和洗脱液相色谱仪。

7、按操作压力可分：低压液相色谱仪、中压液相色谱仪和高压液相色谱仪。

8、按结构可分：台式液相色谱仪和落地式液相色谱仪。

9、按分别规模可分：微型液相色谱仪、小型液相色谱仪和大型液相色谱仪。

10、按功能可分：分析型液相色谱仪和制备型液相色谱仪。

YL9100液相色谱仪

11、按用途可分：生物色谱仪、制药色谱仪、化工色谱仪、食品色谱仪、医用色谱仪、血液色谱仪、血清色谱仪、血浆色谱仪、蛋白色谱仪、蛋白质色谱仪、多肽色谱仪、氨基酸色谱仪、酶色谱仪、核酸色谱仪、RNA色谱仪、DNA色谱仪、细胞色谱仪、菌体色谱仪、抗生素色谱仪、维生素色谱仪、啤酒色谱仪、饮料色谱仪、果汁色谱仪、乳品色谱仪、淀粉色谱仪、发酵液色谱仪、酵母色谱仪、催化剂色谱仪、试剂色谱仪、植物油色谱仪、动物油色谱仪、矿物油色谱仪、石油色谱仪、原油色谱仪、油类色谱仪、矿用色谱仪、污水色谱仪、废水色谱仪、水质色谱仪、土壤色谱仪、农药色谱仪、试验色谱仪和专用色谱仪等。

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导读：液相色谱仪是一种常用的专业检验检测仪器，在使用过程中难免会碰到一些故障，这需要相应的方法来解决。液相色谱的常见故障及解决方法

液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的调配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

1、HPLC灵敏度不够的紧要原因及解决方法是什么？

①样品量不足，解决方法为加添样品量

②样品未从柱子中流出。可依据样品的化学性质更改流动相或柱子

③样品与检测器不匹配。依据样品化学性质调整波长或改换检测器

④检测器衰减太多。调整衰减即可。

⑤检测器时间常数太大。解决方法为降低时间参数

⑥检测器池窗污染。解决方法为清洗池窗。

⑦检测池中有气泡。解决方法为排气。

⑧记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。

⑨流动相流量不合适。调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。解决方法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

2、液相色谱中峰显现拖尾或显现双峰的原因是什么？

①筛板堵塞或柱失效，解决方法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

②存在干扰峰，解决方法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子

③可能柱超载，削减进样量。

3、为何显现峰展宽？

①样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于*峰的15%

②在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散

③数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点

④检测器时间常数过大设定时间常数为感喜好*峰半宽的10%

⑤流动相粘度过高加添柱温,接受低粘度流动相

⑥检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器

⑦保留时间过长等度洗脱时加添强溶剂含量,也可用梯度洗脱

⑧柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至zui小

⑨样品过载进小浓度小体积样品

4、如何简单判定比例阀是否内漏？

设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流速5mL/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，察看这些通路（B、C、D）内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。

5、做HPLC分析时，柱压不稳定，如何解决？

①泵内有空气，解决的方法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；

②比例阀失效，更换比例阀即可；

③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；

④溶剂中的气泡，解决的方法是对溶剂脱气，必要时更改脱气方法；

⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；

⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

6、购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？

柱压过高是HPLC柱用户zui常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：

①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；

③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，假如柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。

④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避开柱压过高的问题。

7、色谱柱中的流动相见排干吗？

不少做色谱分别试验的人碰到过这样的情形：不慎未适时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中全部流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，假如泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充分了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。由于泵只能输送液体，而不能输送空气。

相比之下，另一个更可能发生的情况是忘掉盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干枯的情况不太简单发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉全部溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不愿定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如，经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应当能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个