GBT 29397-2012 香蕉枯萎病菌4号小种检疫检测与鉴定

ICS65.020.01GB/T29397—2012香蕉枯萎病菌4号小种检疫检测与鉴定f.sp.Cubense(E.F.Smith)Snyder&HansenRace4IGB/T29397—2012本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。1香蕉枯萎病菌4号小种检疫检测与鉴定本标准规定了香蕉枯萎病菌4号小种[Fusariumoxysporumf.sp.Cubense(E.F.Smith)Snyder&HansenRace4]的现场检验和实验室检测鉴定以香蕉枯萎病菌4号小种的为害症状、病原菌形态、致病保存的方法。本标准适用于香蕉(包括香蕉、大蕉、粉蕉等香蕉枯萎病菌4号小种易感品种)生长期间的香蕉枯萎病菌4号小种的检测。根据香蕉枯萎病菌4号小种的为害症状，取病健部交界组织分离培养病原菌，根据病原菌形态、致病性测定结果、疑似病菌在Komada改良培养基上的菌落性状进行判定。10%磷酸等。4.1现场调查香蕉种植地及香蕉试管苗二级苗生产和销售场地。4.1.2调查方法对香蕉枯萎病菌4号小种的寄主植物进行踏查，观察其生长状况；向香蕉种植者和管理人员询问，确定疑似香蕉枯萎病菌4号小种为害的田块，对疑似田块进行现场检验。4.1.3症状识别2GB/T29397—2012症状表现参见附录A。采样前需对取样现场及病害症状拍照。疑似病株的取样应选取症状典型、中等发病程度的植株，取样部位包括蕉头病健部交界组织取病健部交界组织，切成小块(2mm×3mm),将小块组织先放于70%乙醇溶液中浸5s、再转入0.1%升汞溶液中浸泡1min～2min进行消毒处理，然后用灭菌水漂洗3次；将消毒处理和漂洗后的小可产生大量小型分生孢子，培养10d~15d可产生少量大型分生孢子，培养30d后有厚垣孢子形成。结果符合附录A形态描述的，可继续按5.2的方法进行病原菌致病性测定。采用伤根浸菌接种法。将4～5叶期健康组培香蕉苗(巴西蕉或广东香蕉2号)自沙床中拔出，然后用缓慢流出的自来水冲洗根部以去除附在其根上的沙子，再分别浸在配制好的各分离菌株孢子悬浮液中(孢子浓度不低于1×10⁵个/mL),以清水做对照，30min后移栽到盛有灭菌细沙的营养杯，置于温室(25℃~32℃),15d～20d后观察结果。罹病蕉苗如表现出附录A的症状。对病株进行组织分离，应得到与原接种菌相同培养性状和形态特征的病原菌。按照柯赫氏法则，可初步确定该病原菌为尖孢镰刀菌古巴专化型4号小种。5.3.1Komada改良培养基的配制0.3g;用10%磷酸调pH值到3.8±0.2)混合，倒平板。5.3.2Komada改良培养基上菌落特征将经5.1测定的疑似病菌的单孢分离菌株接于Komada改良培养基平板上，25℃、40W普通日光灯相距约30cm照射下培养10d后观察菌落性状，4号小种的菌落边缘为裂齿状，而1号小种及其他的3GB/T29397—20126结果判定根据病原菌的形态学、致病性测定，及疑似病菌在Komada改良培养基上菌落边缘出现齿状的特征，按照柯赫氏法则可确定该病原菌为尖孢镰刀菌古巴专化型4号小种。鉴定人，并将菌株移至40%甘油管保存在-80℃冰箱；或将菌株培养在试管斜面上，长满后存于4℃冰箱。A.1分类TaiwanLatundan(AAB)、PisangLilin(AA)、棱香蕉和野蕉(BB),尤其能侵染较抗病的香牙蕉A.2为害症状A.2.1外部症状A.3病原菌形态(引自NelsonP.E,etal,1983)锤形，具3～5个隔膜，顶端细胞呈尖刀状或钩状，脚细胞明显，壁薄，(22μm～36μm)×(4μm～5μm);小孢子生于瓶梗状的产孢细胞上，圆形或椭圆形至肾形，具0～1个隔膜，壁薄，GB/T29397—20126GB/T29397—2012(规范性附录)香蕉枯萎病菌4号小种调查取样记录表表B.1香蕉枯萎病菌4号小种调查取样记录表编号：生产/经营者地址及邮编联系/负责人联系电话调查日期抽样地点样品编号植物名称(中文名和学名)品种名称植物生育期调查代表株数或面积植物来源症状描述：发生与防控情况及原因：抽样方法、部位和抽样比例备注：抽样单位(盖章):抽样人(签名):生产/经营者现场负责人注：本表一式两份，抽样单位和受检单位各一份。GB/T29397—2012(规范性附录)植物有害生物样本鉴