中药指纹图谱课件

第五章中药指纹图谱

FingerprintsofChineseMateriaMedica2024/7/2415-中药指纹图谱同一个成药，疗效一致吗？中药材不同品种、产地、加工：不同厂家：不同工艺：不同辅料：2024/7/2425-中药指纹图谱2024/7/2435-中药指纹图谱2024/7/2445-中药指纹图谱含量一致，疗效一致？不同厂家银杏提取物的色谱指纹图谱2024/7/2455-中药指纹图谱Rb1+Re+Rg1:(A)0.94%;(B)0.52%;(C)0.24%;(D)0.03%DAContent:-Rb10.03%;-Re0%;-Rg10%Total:0.03%Content:-Rb10.5%;-Re0.16%;-Rg10.28%Total:0.94%有效成分含量悬殊的人参

GreatdisparityamongindividualGinsengroots5-中药指纹图谱白芷原药材与硫熏后的药材质量比较

SeriouslossofmajorbioactivecomponentsinBaizhibysulfur-fumigationProcess

AngelicaeFormosanaeRadix(白芷)A:Typicalsampleof‘BaiZhi’B:Sulfurfumedsampleof‘Baizhi’(currentpopularpractice)Thesulfur-fumigatedsampleshowedthemajorcoumarincontentshavebeendestroyedseriously(lost60%-80%).ImporatorinIsoimporatorin

11

Oxypeucedanin

1013

cnidilin12791234568

ABAB2024/7/2475-中药指纹图谱SharpcontrastofcrudedrugandslicesfordecoctionofPaeoniaeRadix(白芍)withdifferentcontentsofactiveglycosidesrespectively.有害的饮片加工–硫熏干燥的白芍饮片活性成分大减

Active

ingredientsdeclinedBaishaoslicesfordecoctioncomparedwiththenaturaldriedcrudedrugPaeoniflorin-sulphitepaeoniflorinB-07-3B-07-14B-07-3B-07-142024/7/2485-中药指纹图谱质量相差悬殊的‘连翘’药材

Greatdisparityofingredientsindifferent‘Lianqiao’crudedrugs青翘→老翘→无籽老翘所含有效成分递减ForsythiasideAForsythin123ⅠⅡⅢ青翘ImmatureLianqiao老翘matureLianqiao老翘（无种子）MatureLianqiao（withoutseeds)2024/7/2495-中药指纹图谱2010版药典丹参提取物指纹图谱原儿茶醛迷迭香酸丹酚酸B2024/7/24105-中药指纹图谱中药指纹图谱的含义（掌握）

中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药特征的共有峰的图谱。2024/7/24115-中药指纹图谱中药指纹图谱的特性（掌握）稳定性（重现性）整体性（模糊性）特征性在规定的方法与条件下，不同的操作者和不同的实验室应能重复能反映中药有效部位所含大部分成分的种类，或指标成分的全部能特征地区分中药的真伪与优劣2024/7/24125-中药指纹图谱指纹图谱研究的主要目的对中药质量标准的补充和提高。控制原料、中间体、成品的一致性，控制工艺，减少批间差异。2024/7/24135-中药指纹图谱相同处方，不同工艺，疗效？2024/7/24145-中药指纹图谱指纹图谱中应包含的信息对于中药材和中药饮片：种的共性，用药部位的共性，产地的个性，采收期、炮制方法的个性信息。对于半成品和中药制剂：原药材（甚至辅料）的信息；工艺信息等。药效信息：药效信息。2024/7/24155-中药指纹图谱二、指纹图谱研究手段色谱技术光谱技术UV

IR波谱技术MSNMRX-射线衍射法分子生物学技术TLCHPLC,LC/MSGC,GC/MSHPCE,CE/MS色谱指纹图谱2024/7/24165-中药指纹图谱薄层色谱薄层色谱ThinLayerChromatography(TLC)●可在同板同时分析多达18个样品，时效高●所用的是正相展开剂，其组成变化灵活，可适应多种成分的分离●离线操作，即可直观比较图谱，又可扫描得到轮廓图和处理数据●占机时间短●具有色彩参数，可获得色彩丰富的色谱图像，直观性强；同时辅以功能团显色剂还可提示成分的类别，提高鉴别的专属性。●展距局限在10cm~20cm

，‘柱效’相对较低，对复杂组分不提高分离度则难以提取指纹特征的药材受到限制。●开放系统，对环境温度、相对湿度要求较高5-中药指纹图谱TLC举例：区分不同品种2024/7/24185-中药指纹图谱TLC举例：监控工艺2024/7/24195-中药指纹图谱高效液相色谱反相高效液相色谱(RP-HPLC)ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography●适用范围广●分离性能好●分析速度快●流动相选择范围宽●灵敏度高●色谱柱可多次重复使用●流出组分可以收集●采用多种检测器，可同时获取保留值信息和化合物的光谱、质谱信息

对较为复杂的色谱实验条件要求比较苛刻，由此带来不同实验室之间重现性的难度增大5-中药指纹图谱2024/7/24215-中药指纹图谱IIIIII诃子小诃子大诃子绒毛诃子诃子指纹图谱2024/7/24225-中药指纹图谱GCHPCE气相色谱GasChromatography(GC)●分离效能高●分析速度快●适用于植物的挥发油成分及其它易挥发性成分或可转化为可挥发的成分测定●可提供保留值信息，与质谱联用，还可提供更丰富的化学结构信息

分辨率高，得到的色谱组份非常复杂，尤其是含挥发油药材，单萜类成分组成很不稳定，样品间差异可能很大，处理数据和判别相似度时一定程度的取舍毛细管电泳CapillaryElectrophoresis●分离效能高●分析速度快●高分辨率●可与紫外、荧光、电化学、质谱、拉曼光谱等联用，可提供更丰富的化学结构信息5-中药指纹图谱肉桂油的气相色谱指纹图谱2024/7/24245-中药指纹图谱2024/7/24255-中药指纹图谱2024/7/24265-中药指纹图谱独活GC指纹图谱羌活GC指纹图谱2024/7/24275-中药指纹图谱HPCE指纹图谱2024/7/24285-中药指纹图谱高效液相色谱红外光谱(IR)InfraredSpectra●几乎所有的物质都有特征的红外光谱。●虽然植物中药提取物还是一个混合物，但是由于不同物质的红外光谱具有加合性，因此，植物中药提取物的红外光谱能反映出所有成分的综合信息因而具有全息光谱的特点。操作简便（不需要复杂的提取仪器）、快速、准确、经济、溶剂低毒、重复性高、实用性强。5-中药指纹图谱红外光谱图中国药典规定：小蓟在开花时采。根据1384cm-1处吸收峰的有无，可以鉴别其采集时间是否正确。小蓟丁酮提取物的红外指纹图谱2024/7/24305-中药指纹图谱三、指纹图谱构建程序中药指纹图谱供试品溶液10批以上中药图谱信息固定产地、采收期和加工炮制的中药中药未知检品预处理不同产地、采收期和加工炮制的中药评价标准药效学试验代表性均一性选择测试条件方法建立考察测定图谱参数图谱分析相关性图谱评价图谱测试、相似度评价方法检验2024/7/24315-中药指纹图谱一、样品收集最关键的步骤真实性代表性10批以上原药材：不同产地、不同采收季节等2024/7/24325-中药指纹图谱Referencefingerprint2024/7/24335-中药指纹图谱二、供试品溶液制备原则1.确保中药中的主要化学成分或有效成分在图谱中得以体现2.所含成分的理化性质和检测方法2024/7/24345-中药指纹图谱二、供试品溶液制备1.原药材、饮片供试品溶液的制备尽可能与生产工艺的提取溶剂接近或一致定量操作进行2024/7/24355-中药指纹图谱二、供试品溶液制备2.半成品/中间体供试品溶液的制备参考制剂和产品制备工艺2024/7/24365-中药指纹图谱二、供试品溶液制备2.中药制剂供试品溶液的制备直接使用、稀释或溶剂提取的方式2024/7/24375-中药指纹图谱三、对照品（参照物）溶液制备1.参照物的选择道地药材/饮片半成品制剂主要活性成分或指标成分内标物

2.合适溶剂

2024/7/24385-中药指纹图谱四、指纹图谱实验研究原则：专属性、整体性、重现性试验方法试验条件2024/7/24395-中药指纹图谱♦

液相色谱

●

色谱柱：比较试验加以选择2024/7/24405-中药指纹图谱流动相1流动相2流动相3流动相：至少用三种不同组成比较2024/7/24415-中药指纹图谱适宜的柱温和检测波长15202530352032102362543652024/7/24425-中药指纹图谱五、方法学验证1.稳定性试验供试品溶液的稳定性2024/7/24435-中药指纹图谱表3川芎指纹图谱稳定性试验相似度计算结果（n=5）S1S2S3S4S5对照指纹图谱S11.0000.9970.9950.9950.9970.998S20.9971.0000.9980.9970.9960.999S30.9950.9981.0000.9980.9910.999S40.9950.9970.9981.0000.9900.999S50.9970.9960.9910.9901.0000.994对照指纹图谱0.9980.9990.9990.9990.9941.0002024/7/24445-中药指纹图谱五、方法学验证3.重复性试验实验方法的重复性n=5

峰面积比值RSD不大于3％保留时间：平均相对保留时间±1min±±2024/7/24455-中药指纹图谱注意事项HPLC和GC指纹图谱：记录时间一般为1小时；TLC指纹图谱：须提供从原点至溶剂前沿的图谱；光谱方法制定指纹图谱：必须按各种光谱的相应规定提供全谱。对于化学成分类型复杂品种，必要时可建立多张指纹图谱。2024/7/24465-中药指纹图谱四、指纹图谱分析步骤标定共有指纹峰，确定参照峰非共有峰总面积不得大于总峰面积的10％计算各共有峰的相对保留时间、峰面积比给出标准（对照）指纹图谱及数据2024/7/24475-中药指纹图谱五、指纹图谱的评价要求“准确的辨认”而不是“精密的测量”；比较供试品与对照品的色谱指纹图谱要求“相似”而不是“相同”。评价色谱比较的结果，是根据其模糊属性，着眼于宏观的规律性的特征分析，即着重辨认完整色谱的“图貌”，而不是求索细枝末节。2024/7/24485-中药指纹图谱

指纹图谱相似度评价直观分析比较：看一看量化数据比较：算一算（重叠率，相似率等）计算机辅助相似度评价与标准指纹图谱相比2024/7/24495-中药指纹图谱重叠率和相似