细菌对抗菌药物的敏感试验(实验)

抗菌药物敏感性试验成都医学院临床微生物学教研室*实验目的1.掌握纸片扩散法(K-B

法)原理、操作方法、结果的判读及其临床意义。2.掌握纸片扩散法的质量控制。实

验内容纸片琼脂扩散法(K-B

法)实验器材1.菌种：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922(幼龄菌，1.5×108/ml)2.培养基：水解酪蛋白琼脂

(MH琼脂)平板，1个/人3.抗菌纸片：青霉素(PEN)、

红霉素(ERY)、庆大霉素(GEN)4.其它：无菌生理盐水、无菌棉签、镊子、接种环、刻度尺(自带)、0.5麦氏比浊管(相当于1.5×10⁸CFU/ml)抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感性，

并与该药对测试菌的最

低抑菌浓度

(MIC)

呈负

相关，即抑菌圈越大，MIC

越小。1.原理2

.

方法待检菌液无

签MH琼脂表面

贴含药纸片5min室温35℃

观察

16～18h

结果操作注意事项：菌液应在15分钟内接种完毕接种后，平板放置时间不要超过5min注意纸片距离3.结果解释测量抑菌圈直径，参照CLSI

的标准解释结果。4.影响纸片法药敏结果的因素①培养基质量成分、pH、深度、硬度和表面

湿度等。②药敏纸片的质量

含药量和保存方式。③接种菌量④操作质量接种后贴药片的时间；培养温度

和时间；抑菌圈测量工具的精度5.质量控制采用标准菌株与测试菌在同一条件下做药敏试验。

标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内。如果超出该范围，

则不应发出报告，及时检查原因，予以纠正。ATCC25923金黄色葡萄球菌ATCC25922

大肠埃希菌ATCC27853

铜绿假单胞菌ATCC29212

或33186

粪肠球菌抗菌药物↵纸

片

含

药

量抑菌环直径(mm)↵相对应MIC值(μ

g/ml)↵R↵I+S↵R+S↵青霉素10单位≤28+-4≥29+β

-

内

酰

胺

酶≤0.12+苯唑西林1μ

ge≤10+11-12+≥13+≥4+≤2万古霉素30μg+-+-4154-+≤4+庆大霉素10μge≤12+13-14+15+≥8+≤4+红霉素↵15μg+≤13+14-22+≥23+≥8+≤0.5+环丙沙星5μge≤15+16-20+4

≥21+≥4+≤1+克林毒素2μg↵≤1415-20+≥21↵≥40≤0.54甲氧苄啶磺胺

甲噁唑↵1.2523.75μge≤10+11-15+16+8/152+≤238+金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断44抗菌药物纸片含药量(μg)抑菌环直径(mm)相对应MIC值(μgm1)↵ReIeSReSe氨苄西林↵100≤13414-16≥17e320≤8e哌拉西林↵100↵≤17↵18-20e=21↵1284英160氨苄西林/舒巴坦20/10↵≤13+14-17e18e32/16+≤8/4头孢唑啉30↵≤14↵15-17e≥18e=320≤8+头孢噻肟↵30≤14+15-22023e64≤8e头孢曲松↵30↵≤13414-20↵≥21↵64↵≤80头孢他啶30e≤14↵15-17e18e32↵≤8e亚胺培南10↵三13414-15016e=160≤4e氨曲南30↵≤15↵16-21e22↵32e≤8e庆大霉素↵100≤12+13-14e≥1508↵≤40阿米卡星30↵≤14↵15