医院检验科临床微生物标本的采集、储存和转运、微生物标本的采集送检规范 课件教程

微生物标本的采集、储存和转运医院检验科目录

临床须重视微生物标本采集及送检

微生物标本采集送检基本原则

几种主要微生物标本的采集送检规范卫计委强调提高临床微生物标本送检率《2013年抗菌药物临床应用专项整治活动方案》明确规定了住院患者抗菌药物使用前微生物检验样本送检率:接受抗菌药物治疗者接受限制使用级抗菌药物治疗者接受特殊使用级抗菌药物治疗者/yzygj/s3585u/201305/823b9d131ff4416ab7b41b2c4e1f0e83.shtml不低于30%不低于50%不低于80%送检率1标本采集3标本接收处理5标本检测分析6检验数据处理8分析前检验申请患者准备2标本运送4分析中标本质控评价7分析后检验结果审核9检验结果报告10临床微生物检验的具体步骤及分期检验报告解读11临床科室检 验 科分析前标本的质量直接影响检验结果

合格的标本是获得准确检验结果的先决条件。不当的标本可导致检验结果的假阴性、假阳性结果。分析前68.2%分析中

13.3%

研究显示，影响检验结果准确性的因素中分析前标本质量好坏约占70%。分析后18.5%

重视微生物检验标本的采集及运送Intermsoftheeffectivenessofthelaboratory,nothingismoreimportantthantheappropriateselection,collection,andhandlingofaspecimenformicrobiologic

diagnosis.──PatrickR.

Murray正确的采集、运送、保存及处理微生物检验标本，对于保证临床微生物检验工作质量至关重要。为了准确检出病原菌，避免漏检及误诊，临床医护人员及实验室工作人员应掌握微生物检验标本采集、运送、保存及处理的一般原则。MurrayPR,,etal.ManualofClinicalMicrobiology,9thEdition.

2007.陈东科，孙长贵

著.实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P129.微生物检验的基本原则及时采集微生物标本作病原学检查在抗菌药物使用前采集标本采样时严格执行无菌操作采样后立即送检标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂送检标本应注明来源和检验目的检验申请单即临床病史美国微生物学会临床微生物标本送检指南

第2版

2013P7检验申请1应重视检验申请单的填写检验申请单填写须规范微生物检验申请单应包含以下信息：

患者信息：姓名、年龄、门诊号/住院号（床号）、临床诊断

申请人信息：申请科室、申请医生

(姓名、工号）

标本信息：标本种类、采集部位、采集时间（日期、时间）、抗菌药物应用情况

申请信息：申请项目（一般涂片检查、特殊涂片检查、培养及鉴定、药敏检测--定性

or

定量等）、特殊要求或标注（紧急处理、疑似或明确含有非常危险病原体等）、特殊检测（PCR、rRND检测等）美国微生物学会临床微生物标本送检指南

第2版

2013P7检验申请1

逐一核对：采样前，必须根据检验申请单中的患者姓名、住院号及临床诊断等信息，来核对所需采样的患者；对采样患者、采样部位、检验申请单、标本容器等，均须逐一确认无误。

患者准备：一般要求患者处于安静状态、避免剧烈运动；最好停服干扰检测的药物或刺激性食物。患者准备201尽 早 采 集03无 菌 操 作04适 量 标 本05适 当 方 法06安 全 采 集02合 适 部 位标本采集3

最好是病程早期、急性期

尽量在抗生素使用之前采集

对已用抗生素又不能停药者，可在下次用药前采集，并注明使用的抗生素标本采集31-

尽早采集标本采集重在时效性陈东科，孙长贵

著.

实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P129.注意避免“背景干扰”

无菌标本：注意局部及周围皮肤的消毒，严格进行无菌操作

与外界相通的腔道：标本采集32-合适部

位避开腔道口取标本，以免皮肤表面正常菌群的污染，造成混淆和误诊。

正常菌群寄生部位：采集时应特别小心；应明确检查的目的菌在进行分离培养时，采用特殊选择性培养基

血标本采集：应避免输液的影响。陈东科，孙长贵

著.实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P129.采集标本时应尽量减少或避免感染部位附近皮肤或粘膜常居菌群污染和防止外源性细菌污染标本。

在采集血液、脑脊液、胸腔积液、关节液等无菌标本时，应注意对局部及周围皮肤的消毒，严格进行无菌操作；

对于采集与外界相通的腔道标本时，如窦道标本，应从窦道底部取活组织检查，而非从窦道口取标本，以免受皮肤表面正常菌群的污染，造成混淆和误诊；

采集的标本均应盛于无菌容器内送检。盛装标本的容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或使用一次性无菌容器，不能用消毒剂或酸类处理。标本中也不得添加防腐剂，一面降低病原菌的分离率标本采集33-

无菌操作陈东科，孙长贵

著.

实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P129.标本采集34-

适量标本

标本采集应足量。标本量过少，可能会导致假阴性结果。血液标本：通常成人采血量每瓶

8-10ml，儿童每瓶

1-5ml；脑脊液、骨髓、脓肿、穿刺液、引流液、痰液等标本：≥1ml尿液标本：≥3ml粪标本：1-3g

或

1-3ml

结核标本采集量要求特殊：痰、肺泡灌洗液或支气管冲洗液：>5ml；清晨中段尿：5-10ml；粪标本：>1g；穿刺液（胸水、腹水、关节液等）：5-10ml。

标本应具有代表性，同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。陈东科，孙长贵

著.实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P130.周庭银，倪语星

著.临床微生物检验标准化操作.

第2版.

2010.

P52=57.

根据目的菌的特性用不同的方法采集：厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌，以及L型菌采用的方法不同。用于厌氧菌培养的临床标本，应尽量用注射器采集抽吸物，一般不要用拭子采集标本（除非是在床边采样并立即接种）采集到的厌氧标本应室温保存，不能冷藏或冷冻。

有些细菌引起的感染，应注意在同时间采集不同部位标本。如伤寒患者，发病第1周应采集血液，第2周应采集粪便和尿液。否则影响细菌的检出率。

以拭子采集的标本，如咽拭、肛拭或伤口拭子，易受正常菌群污染，不可置于肉汤培养基内送检。陈东科，孙长贵

著.

实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P130.标本采集35-

合适方法采集标本时不仅要防止皮肤和黏膜正常菌群对标本的污染。同时也要注意安全，防止传播和自身感染。

医护人员的安全防护：标本采集的所有步骤都必须戴手套、穿工作服，必要时应穿隔离服、戴防护口罩、防护眼镜；

标本防漏：采集到的原始标本应采用防漏可密封的无菌管或杯盛装，外加防漏可密封的塑料袋，塑料袋上需注明标本的相关信息。

标本采集所用的带针头的注射器不可随意丢弃，其内容物应移至无菌管内或用保护性装置移去针头，再重新盖上盖置于密封、防漏的塑料袋内送检。

已有泄漏的标本容器不能至实验室或随意处理。如果要继续进行处理，必须通知医生关于容器泄漏的情况、解释如继续操作可能对结果带来偏差，并要求重新送检。如果重新送了标本，则对泄漏的标本应进行高压灭菌后丢弃；若无法重新送检标本，使用原来标本进行检验，则必须在生物安全柜内操作。陈东科，孙长贵

著.

实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P130.徐建国等译.

临床微生物学手册

（上册）.

科学出版社

2005.

P48.标本采集36-

安

全

采

集1-

标本运送的时间要求标本运送4

一般原则：标本采集后应立即送检，最好在2h内送至实验室，否则会影响病原菌的检出。一般性细菌培养标本延迟送检时，应置于4℃冰箱保存，且不得超过24h。临床标本最佳的运送时间取决于采集的量少量液体（<1ml）或组织（<1cm3）应在15-30’内送至实验室，以免蒸发、干燥及暴露于周围环境。较多量的标本置于运送培养基中可放12-24h。厌氧培养标本原则上应在床边接种。如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，一般不超过24h。陈东科，孙长贵

著.实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P130.徐建国等译.

临床微生物学手册

（上册）.

科学出版社

2005.

P48.2-

标本运送的保存要求标本运送4

若疑似标本中有对周围环境敏感的微生物，包括淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌（低温易死亡），应立即运送和处理。通常血液、脑脊液、生殖道、眼或内耳标本不要冷藏保存。

从一个实验室运至另一个实验室的临床标本及感染性物质，不论距离如何，均应严格注意标本的包装，且应注明注意事项。在运送标本及感染物过程中，应采取安全防护措施。用于转运的交通工具上应有生物安全标志。陈东科，孙长贵

著.

实用临床微生物学检验与图谱.人民卫生出版社

2011.

P130-1.徐建国等译.

临床微生物学手册

（上册）.

科学出版社

2005.

P48.-50保存或介质类型标本4℃保存标本25℃保存非防腐活检组织、支气管灌洗液、I.V.（静脉穿刺管）、脑脊液（病毒检验）、肺活检、心包液、痰、尿（全程）脑脊液（细菌检验）、滑膜液厌氧运送培养基腹水、羊水、厌氧培养抽吸物、胆汁、盲肠标本、深部损伤物、神队放线菌的宫内节育器（IUD）、肺吸取物、胎盘（剖宫产取得）、窦道吸取物、组织（手术）、经气管吸取物、尿（耻骨弓上穿刺）直接培养基培养角膜刮片、血培养物、针对博德特菌属用的RL平板（Regan-Lowe培养基）或BG平板（博-金培养基）、针对淋病奈瑟菌的JEMBEC平板、玻璃体液需氧运送培养基烧伤活检组织、弯曲菌属、外耳取材、志贺菌属、弧菌属、耶尔森菌属骨髓、上呼吸道标本、宫颈分泌物、关节液、结膜拭子、内耳取材、生殖器标本、鼻咽标本、博德特菌属、奈瑟菌属、沙门菌属、帮杆菌属3-

标本运送的保存条件标本运送4徐建国等译.临床微生物学手册

（上册）.

科学出版社

2005.

P51.常见微生物标本拒收原因及处理方式周庭银，倪语星

著.

临床微生物检验标准化操作.

第2版.2010.

P60.拒绝原因处理方式无标签非损伤方法获得的标本（如、痰、粪便等标本），重新送检损伤方法获得的标本（如血、脑脊液或组织等），与取样医生协商后，在处理标本，并在申请单上注明问题所在，记录所采取的措施送检延迟（超过规定时间）提示送检者拒收原因，并要求重新送检。患者申请单上注明“标本送检延迟”容器不合适或标本泄漏通知送检者，并要求重新送检。患者申请单上注明问题所在及所采取的措施标本运送条件不合适（如厌氧条件送检的标本却用需氧条件送检）与送检者联系，注明检测要求，指出不符合之处，并要求重新送检同一天内同一检测条件的重复标本（血除外）通知送检者，指出重复标本，在申请单上注明问题所在标本污染重新采样标本量不够重新采样标本采集细则

细菌性肺炎标本

血流感染标本

泌尿系感染标本

脓液标本标本采集--细菌性肺炎

痰液不是诊断细菌性肺炎的最佳标本，血培养、支气管肺泡灌洗、气管吸取物能够提供更可信的病原菌信息-《临床微生物标本送检指南》IDSA/ATS指南CAP

门诊治疗者:-可不行细菌学检查

住院患者-应在使用抗菌素之前采取标本-痰涂片意义大HAP

血培养

胸腔积液培养

保护性毛刷

气管吸取物

支气管肺泡灌洗液

细菌学诊断应用气管内吸取物、支气管肺泡灌洗液、保护性毛刷标本定量培养的方法来进行病原学诊断

超过阈值浓度的细菌生长为定义HAP

低于阈值浓度的细菌生长认为属于定植或污染保护性毛刷

将细胞学检查用刷装置插入镜子开口，并推进

至目视到欲采样部位时，将刷子推出护套，获得气道分泌物

将刷子抽回护套，取出整个毛刷装置

毛刷获得的标本在空气中很快会干燥导致细菌死亡，从而影响检出率

将刷子头剪下，放置于1ml液体运送培养基（如生理盐水和无菌肉汤）

定量培养：103CFU/ml，灵敏度和特异度分别为66±19%和90±15%支气管肺泡灌洗

为将细胞冲洗出气管镜不能到达的小气道

操作-注入灭菌生理盐水20ml-负压吸引收回灌洗液（50-80mmHg）-根据需要重复上述操作最多5次（100ml），获得标本40-70ml（一般回收率为40%-70%）*儿科患者只能灌入1~2ml/kg。通常儿童回收量不超过10ml支气管肺泡灌洗

灌洗液放入无菌管中，将标本送至实验室

涂片观察标本质量：-<1%的细胞为鳞状上皮细胞，可接受的标本->1%的细胞为鳞状上皮细胞，不可接受的标本

定量培养：104CFU/ml，敏感度平均73±18%，特异度82±19%。气管吸取物

中度污染标本

可通过气管切开或气管内插管采集标本，但导管插入时必须经过正常菌群聚集区域，从而增加了解释培养结果的难度。

定量培养：106CFU/ml，灵敏度达76±9%，特异度75±28%29呼吸道标本的病原学诊断价值检验方法定量培养半定量培养灵敏度(%)特异度(%)气管吸取物106≥3+76±975±28BAL10473±1882±19PSB10366±1990±15肺炎患者：采集血培养

HAP:<25%;CAP:5-16%

血培养与痰培养得到相同菌(无其他部位感染相同菌株)，可确定为肺部感染菌

血培养阳性，但不能通过其他原因解释，如腹腔感染、导管等，有可能为肺部感染菌31

显微镜检查：取脓性部分涂片，作革兰染色.

低倍视野下看涂片,

记录5个视野下平均细胞数，每低倍镜视野中鳞状上皮细胞<10，白细胞>25，为合格下呼吸道标本

对照痰涂片结果，涂片中所见细菌的量及吞噬细胞内是否有细菌等，如发现酵母样菌孢子、菌丝或放线菌、奴卡菌等，应予相应报告和继续检查。痰涂片判断标本合格性以及病原菌不合格痰标本痰标本的正确采集（1）给患者正确的指导：

以晨痰为佳，采集标本前1-2小时不可进食

采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷清洁口腔和牙齿

-尽可能在用抗菌药物之前采集标本

-用力咳出呼吸道深部的痰

-痰液直接吐入无菌容器中痰标本的正确采集（2）

标本量应大于2ml（脓痰除外）

标本应立即送往实验室，尽快进行涂片和接种

如预计将延迟1-2小时，冷藏标本，以抑制杂菌过度生长，但会导致苛养菌培养阳性率下降

24小时内送1份标本即可

应拒收被口腔污染的标本革兰染色质量评价唾 液判断深部痰标本的指征下呼吸道感染病原学检测结果确定有参考意义无意义血或胸液培养到病原菌；合格痰标本培养优势痰培养有上呼吸道正常菌群的细菌（如草绿色链球HAP:血、呼吸道分泌物培养菌中度以上生长菌、表皮葡萄球菌、非致一致病原菌（≥3+

）病奈瑟菌、类白喉杆菌等）经纤维支气管镜或人工气道合格痰标本细菌少量生长，

但与涂片镜检结果一致（肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌）；吸引的标本培养的病原菌浓痰培养为多种病原菌少量度≥106CFU/ml（半定量培养（>3）生长；2+

）BALF标本≥104

CFU/（+~2+

）3d内多次培养到相同细菌防污染毛刷或防污染BALF标本≥10³CFU/ml

（+）血培养采集时间3060Time

(min)0菌量体温采集血培养样本的最佳时间

尽可能在患者寒战开始时、发热高峰前30-60分钟内采血

一旦怀疑发生严重感染时立即采血

在患者接受抗生素治疗前采血

如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养40Dunneetal.CUMITECHBloodCulturesIII;1997,ASM

Press

静脉血

-动脉血标本无优势，采集静脉血更适宜

中心静脉导管血-更容易被定植的细菌污染，除非为诊断导管相关性血流感染之用，否则绝不要从导管取血进行培养-出生12小时内的新生儿，可从脐导管取血进行培养

每套血培养都要从不同部位穿刺获得

切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血采血量<1to10

CFU/mL1to300

CFU/mL

成人:革兰阴性菌革兰阳性菌

儿童:75%

的儿童100-1000

CFU/mL

每增加1ml采血量，血培养灵敏度增加3

-

5%BettyA.Forbes,DiagnosticMicrobiology,

1998MermelandMaki,Ann.Intern.Med.:119,

1993采血量Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;

45:3546-3548一套二套三套2瓶4瓶6瓶20ml40ml60ml重复送检

绝大部分患者可凭临床症状判定菌血症是否已清除，无需继续送检血培养，例外情况包括：感染性心内膜炎患者金黄色葡萄球菌菌血症患者，如48-72小时后依然存在血培养阳性，则提示可能为复杂性金葡菌菌血症

真菌血症患者，采用抗真菌治疗，应重复血培养评价真菌清除情况。下列细（真）菌常为真正的致病菌（90%）

金黄色葡萄球菌

大肠埃希菌

铜绿假单胞菌

肠杆菌

肺炎链球菌

白色念珠菌下列细菌很少为真正的致病菌（<5%）

棒状杆菌

痤疮丙酸杆菌

芽孢杆菌（上述细菌单次分离不做药敏试验，所以建议重才复查）让我们纠结彷徨的细菌凝固酶阴性葡萄球菌（上述细菌单次分离不做药敏试验，所以建议重才复查）血培养污染

如果消毒不严格，皮肤表面的细菌可能带入培养瓶中，导致血培养假阳性

临床医师判断血培养结果是感染还是污染非常困难，假阳性可能导致额外的抗生素治疗、住院天数的延长和医疗费用的增加血培养标准采集流程

第一步：用皂液和流动水/含酒精快速手消进行手卫生

第二步：用酒精纱布消毒培养瓶塞，充分待干血培养标准采集流程

第三步：穿刺部位皮肤消毒一步法:洗必泰作用30

s（不适用于2个月以内的新生儿）三步法：-70%酒精擦拭静脉穿刺点，待干-1%-2%碘酊30秒或10%碘伏消毒1.5-2分钟，待干-从穿刺点向外画圈消毒,直径>10cm-70%酒精脱碘血培养标准采集流程

第四步：戴手套如需对穿刺部位进行触诊，戴无菌手套如无需对穿刺部位进行触诊，戴非无菌手套血培养标准采集流程

第五步：抽血血量：用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养瓶-血量充足：先注厌氧瓶，后注需氧瓶-血量不足：优先注入需氧瓶，剩余注入厌氧瓶（因真菌、绿脓杆菌、窄食单胞菌多长在需氧瓶内）人群需氧厌氧成人10ml10ml新生儿1-2ml不需儿童3-5不需血培养标准采集流程

第六步：混匀血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固（不要大力摇晃）血培养标准采集流程

第七步：从另一部位穿刺采集第二套血培养，方法同前血培养标准采集流程第八步：血培养瓶尽快送实验室，任何延迟上机将会延迟或阻止检测细菌的生长血培养瓶保留在室温，被接种后不得