药物分析复习总结

第二章药品质量控制与药物分析方法验证SOP（标准操作规程）QC（质量控制）GLP（药物非临床研究质量管理规范）（Laboratory）GCP（药物临床试验质量管理规范）（Clinical）GMP（药物生产质量管理规范）（Manufacture）系统误差（具有固定的正或负偏差）(方法误差；试剂误差；仪器误差；操作误差)偶然误差（不可定误差）RSD即变异系数（相对标准偏差）容量分析相对误差（RE）通常在0.2%以下；仪器分析法RE通常为2%~5%称量的误差应小于1%药典中API未规定含量百分数上限时，即不超过101.0%消除系统误差方法：回收试验、校准仪器、对照实验、空白试验（回收试验：考察分析方法能够对样品中被测物给予全量相应的能力验 +证试验95%的置信区间用1.96σ值进行计算方法学验证参数：专属性；准确度（回收率）；精密度（RSD）；定量限；检测限；定量限；线性与范围称量时要多称一位，比如要称2.0g，则应称取1.95g~2.05g，而不是1.5g~2.5g精密称量指称取重量应准确至所取质量的千分之一热水指70~80度的水不管鉴别、杂质测定（定量、限度）、含量测定，都需要进行的方法学验证为“专属性”和“耐用性”常用化学试剂质量等级：化学纯、分析纯、试剂纯、优质纯分析方法验证的主要效能指标：准确度；精密度（重复性，中间精密度，重现性）；专属性；耐用性；线性和范围；检测限和定量限；测量不确定度的含义：是表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相联系的参数。药典附录包括“制剂通则”“通用检测方法”“指导原则”杂志检查一般为限度检查第三章样品的前处理和药物提取技术一、生物样品的采集（血浆、血清、全血；尿液；组织样品）血浆：加抗凝剂后，2500~3000r/min离心5~10分钟血清：静止凝固后，2500~3000r/min离心5~10分钟二、生物样品的预处理（目的；影响因素；有机破坏，除蛋白质，结合物的水解，化学衍生化，游离药物分析的样品前处理方法）目的：使药物从结合物中释放；防止杂质干扰；满足专属性；防止仪器污染影响因素：药物理化性质；浓度范围；测定目的；生物样品类型；预处理和分析技术预处理技术：有机破坏湿法破坏：硝酸-高氯酸（对含氮杂环药物的破坏不够完全）干法破坏：马福炉灰化法；低温等离子灰化法；氧瓶燃烧法（常用于卤素）除蛋白质加入与水相混溶的有机溶剂脱水加入中性盐盐析加入强酸生成不溶性盐加入重金属盐类沉淀剂加热结合物水解：水解法；酶解法；溶剂解法化学衍生化游离药物分析的样品前处理方法（常用于血液处理中）平衡透析法；超滤法还有超离心法和凝胶过滤法等乳酸盐：加溴水浴氧化（溴褪色），生成乙醛，再加亚硝基铁氰化钾，静置后界面处产生暗绿色的环枸橼酸盐：加高锰酸钾氧化（紫色退去），加硫酸汞（或溴），均产生白色沉淀（法二：加吡啶-醋酐，溶液变黄色到红色或紫红色的溶液）酒石酸盐：加硝酸银氧化（银被还原），产生银镜（法二：生成配合物，在乙酸溶液中，加入硫酸亚铁和过氧化氢，再加NaOH碱化，生成紫色配合物）巴比妥类：丙二酰脲反应托烷生物碱类：Vitaili反应三、光谱鉴别法紫外：方法：光谱特征参数：核定λmax；核定的λmax，λmin；核定λmax，λmin，及肩峰；核定一定浓度的λmax及吸光度（A）比较吸光度比值与对照品比较专属性较差，常与其他方法配合红外：（专属性最强）标准谱图对照法对照品对比法四、色谱鉴别法TLC（薄层色谱）系统适用性参数：检测灵敏度，比移值，分离效能与对照品比较Rf值；与相似结构物质比较Rf值不同HPLC系统适用性参数有：理论板数，分离度、重复性、拖尾因子与对照品比较保留时间（内标法时，对照品与内标的保留时间比值一致）GC用于挥发性药物含量测定五、晶型分析熔点测定法；热分析法；X衍射等六、鉴别的方法学验证（可见第二章，注意区分鉴别、杂质鉴定、含量分析的方法学验证）专属性、耐用性、检测限（而不是定量限！！！）仪器分析为主、化学分析为辅仪器分析首选IR、HPLC，其次是TLC、GC、DSC（其中IR尤为广泛，原料药与制剂多采用IR，制剂往往是萃取分离后的IR法）第五章杂质分析一、药物中的杂质和杂质限量化学试剂的纯度与药物的纯度不能互相替代杂质来源：生产过程中引入；贮藏过程中药物理化性质变化杂质分类：一般杂质、特殊杂质杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量（杂质最大允许量占供试品总量的百分比）对于杂质的控制，一般进行限量检查，必要时对杂质进行定量测定限量检查法即不要求测定其准确含量，只需检查杂质是否超过限量（具体方法包括对照法，灵敏度法，比较法）对照法：被检杂质标准溶液与供试品比较，看供试品是否超过标准品灵敏度法：加入一定量的试剂，不得有阳性结果比较法：测定特定待检杂质的特征参数（如吸光度）与规定限量比较，不得更大二、药物中杂质的检查方法化学法产生沉淀：比浊法产生颜色：比色法产生气体：气体检查法光谱法紫外红外：主要用于药物中无效或低效晶型的检查（不同晶型属于不同药物）原子吸收光谱法色谱法TLC：杂质对照品法；供试品溶液自身稀释对照法；杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用（多种杂质，有对照品用对照品，没对照品自身稀释）；母体药物对照法HPLC：外标法；自身稀释对照法（又分加校正因子的和不加校正因子的，加校正因子的有杂质对照，但已经计算出校正因子，所以实际操作时不需要再用对照品，而不加校正因子的纯粹只是因为没有杂质对照品）；面积归一化法（粗略考察杂质含量，在各杂质均有较强吸收波长作为检测波长）GC：在HPLC四个方法基础上，还有一个“标准溶液加入法”（加入定量标准溶液，看变化，也可以加入不同量画图反推）毛细管电泳法热分析法热重分析TGA：质量随温度增加变化（结晶水）差热分析DTA：试样与参比随温度增加，本身温度的变化情况（试样会脱水吸热）（吸热峰向下）差示扫描量热法DSC：试样与参比随温度变化，保持相同温度外界所需提供能量差异（可以保持与参比温度相同，比DTA更好的控制变量）药物与杂质的低共融行为是DSC测定纯度的基础，杂质的存在使药物的熔点下降，并使熔融曲线变宽，可通过方程计算出杂质含量中国药典对恒重的定义是：连续两次干燥或炽灼的重量差小于0.3mg。示例氯化物：生成AgCl，纳氏比色法，限量：10ug/ml硫酸盐：生成BaSO4，纳氏比色法，限量：100ug/ml铁盐：与SCN-反应溶液变红色，纳氏比色法，限量：10ug/ml重金属：基本原理：生成硫化物，与重金属沉淀，限量：10ug/ml具体分为：硫代乙酰胺法（易溶于水）；炽灼后的硫代乙酰胺法（难溶于水）；硫化钠法（溶于碱水）硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢与重金属生成混悬液砷盐：基本原理：锌与酸反应生成氢气，砷盐与氢气反应产生砷化氢，限量：1ug/ml古蔡法：砷化氢与溴化汞试纸反应（注意点：加入KI和氯化亚锡，可将五价砷还原为三价砷，加快反应；此外KI和氯化亚锡还可以抑制碲化氢生成；第三，氯化亚锡可与锌作用，表面形成原电池，使氢气均匀连续产生；第四：反应时，醋酸铅棉花是为了吸收多余的H2S，防止干扰实验；第五，环状有机药物在反应前要先有机破坏；第六，含锑药物可改用“白田道夫法”）Ag（DDC）法：砷化氢与Ag（DDC）反应生成红色胶态银酸碱滴定法残留溶剂检查：GC法色谱柱可采用“直接进样法”与“顶空进样法”（等温与升温；等温用于有机溶剂少且极性相差不大；升温用于有机溶剂多且极性相差较大）（检测器常用FID火焰离子化检测器，含卤素药物用ECE检测器）理论塔板数应大于5000/柱，分离度大于1.5，内标法：待测物比内标峰面积比的RSD不超过5%，外标法：待测物峰面积RSD不超过10%.三、降解物与杂质的分离与鉴定杂志结构鉴定常用：杂质对照品法；分离制备杂质样品法；两者结合法（多种杂质）四、杂质分析方法验证专属性，准确性，线性与范围，灵敏度第六章药物的含量测定一、概述含量测定：能用理化方法测定效价测定：只能用生物学方法（包括生物检定和微生物检定）或酶学方法测定药物效价的对原料药含量测定方法选择强调结果的“精密度”对制剂的含量测定方法偏重于方法的“选择性”（因为存在辅料等杂质）API以百分含量表示，一般换算成干燥品的含量二、容量分析法（滴定分析）优缺点：耐用性好、精密度高；但取样量大，专属性差分类：可分为直接滴定法和间接滴定法（剩余滴定法、置换滴定法）滴定度：1ml滴定液能滴定待测物的质量mg，单位为mg/ml直接滴定法：样品百分数=V*F*T/m剩余滴定法：样品百分数=(V0-V)*F*T/m 滴定液的校正因子F=基准物质实际称量质量/基准物质滴定含量=1000m/(T*V)（试想，称取一定量的基准物质，本来只要15ml就可以滴定完，但是实际花了20ml，所以F小于1）标定高氯酸与氢氧化钠均采用邻苯二甲酸氢钾，标定亚硝酸钠用对氨基苯磺酸酸碱滴定法：（多弱酸性药物）常用强碱强酸滴定弱酸弱碱注意溶剂“中性乙醇”指的是对指示剂显中性！酸性药物使用酚酞为指示剂，NaOH为滴定剂溶剂中可以加入可混溶有机溶剂，增加滴定突跃范围有机酸的碱金属盐常用水-乙醚双相溶剂用盐酸滴定“强酸置换弱酸”非水滴定法（多弱碱性药物）酸性溶剂（如酸酐、冰醋酸）增强有机弱碱的相对碱度用高氯酸滴定；指示剂常用结晶紫（多元弱碱）在滴定不同物质。碱性较强药物（蓝色、蓝绿色），碱性较弱（绿色），碱性很弱（黄色为终点）有机碱常与弱酸盐结合（并非强酸盐，仍呈弱碱性），用高氯酸滴定，“强酸置换弱酸”（滴定弱酸比较少，碱滴定液为碱性比NaOH更强的甲醇钠或甲醇锂。注意防止溶剂和碱滴定液吸收空气中的CO2）温度校正：测定时浓度c1=标定时浓度c0/(1+0.0011(t1-t0))碱性药物的氢卤酸盐（HCl、HBr等）在冰乙酸中呈强酸性（已经不算弱酸弱碱盐了），所以实验前需前用醋酸汞使生成卤化汞除去卤元素硝酸盐可使指示剂褪色，所以采用电位法指示终点磷酸盐和有机酸盐可直接滴定碘量法和溴量法直接滴定法：还原性较强药物（酸性环境下进行以保持稳定）置换滴定法：氧化性较强药物（加过量碘化钾，再用硫代硫酸钠滴定置换出的碘）剩余滴定法：还原性药物，但可能不稳定，反应终点不易判断（加入过量碘，再用硫代硫酸钠反滴定，做空白组，体积相减及碘消耗量）溴量法：加入过量溴（溴化钾和溴酸钾混合物），加入过量KI与多余溴反应。用硫代硫酸钠滴定多余的KI，就得到消耗KI的量，即得到溴多余量，即得溴消耗量。（剩余滴定法+置换滴定法）1molI2反应2mol硫代硫酸钠亚硝酸钠法具有芳伯氨基的药物，采用永停滴定法（滴定剂为可逆电对，被测物物非可逆电对；滴定剂不可逆，被测物可逆；均可逆）亚硝酸钠法属于第一类，终点前无可逆电对，终点时产生可逆电对络合滴定法滴定剂EDTA（的钠盐）络合物形成较慢金属元素用剩余滴定法指示剂也是一种络合剂（不是很稳定），指示剂-金属络合物的平衡常数要足够大，但应小于EDTA-待测金属络合物两个数量级；费歇尔滴定法（测水含量）I2+SO2+H20==2HI+SO3定量反应无水甲醇为溶剂，费歇尔试液为滴定剂（I2,SO2,吡啶和无水甲醇混合物）滴定度约为5（不得小于3，一般要在4以上），滴定前1h标定三、分光光度法A=-lgT=Ecl浓度表述方法有两种：mol/L对应摩尔吸收系数K%(m/v)对应百分吸收系数E1CM（单位为g/100ml）K=(M/10)*E紫外：对照品比较法；吸收系数法（规定波长吸收系数，一般大于100）；计算分光光度法；比色法（加入显色剂）应控制A在0.3~0.7之间适用于制剂含量测定、溶出检测、含量均匀度测定（但不是API含量测定首选）紫外分光光度仪需要定期校正：波长，杂散光，吸光度准确度荧光：测定的是激发光激发的“发射光”！灵敏度高于紫外；大浓度太大会荧光“自熄灭”常用试剂有：铁氰化钾；过氧化氢；荧胺原子吸收光度法：标准曲线法；标准加入法（加入不同量，做线反推，y=0）四、色谱法HPLC法：分配、吸附、离子交换（正相以吸附为主，反相以分配为主）最通用为ODS或C18柱，即十八烷基硅烷键合硅胶。使用pH应在2~8之间。流动相常为“甲醇-水”“乙腈-水”“四氢呋喃-水”（有机相比例不小于5%）洗脱能力：四氢呋喃>乙腈>甲醇>水pH调节常用：磷酸盐缓冲液、冰醋酸、醋酸盐缓冲液检测器：紫外、二极管阵列（DAD）、蒸发光散射检测器适用性试验：理论板数：N=16(t/W)2或N=5.54(t/W1/2)分离度:R=2(t-t)/(W+W)或R=2(t-t)/1.70(W1/2+W1/2)重复性：连续5次进样RSD不得大于2%拖尾因子：T=W0.05h/2d1W0.05h为5%峰高时宽；d1峰顶点到峰前沿位置距离其它相关数据：k容量因子（质量比），K分配系数（浓度比）GC法：常用载气为氮气（氦气、氢气）检测器：FID（火焰离子化，碳氢化合物）ECD（电子捕获检测器，卤素）气化室温度一般高于沸点，并高于柱温30~50%直接进样或顶空进样（常用柱：HP-1非极性柱；HP-20M极性柱）五、药物含量测定方法验证专属性、线性与范围、精密度、准确度（回收率）方法回收率通常要求达到95%~105%，对测定方法操作复杂的或待测成分含量较低的可放宽到90~110%。操作方法是含辅料的标准物质溶液，与不含辅料的标准物质溶液，测定值进行比较第七章药物制剂分析一、药物分析的特点当辅料不干扰药物的鉴别时，可以直接采用原料药的鉴别方法鉴别药物制剂药物制剂检查包括杂质检查和剂型检查。杂质检查通常不需要重复原料药的杂质检查项目剂型检查目的是确保药物的安全性、有效性和稳定性。二、药物制剂的溶出度试验生物利用度是指制剂中药物被吸收进入血液的速率和程度。是最根本最可靠的指标。但工作量太大，常用溶出度代替（药物溶出速率小于等于吸收速率时，溶出是限速步骤，因此可在溶出与生物利用度之间建立一定相关性）溶出速率=K’S(CSAT-C)=K’SCSAT(CSat为饱和浓度)表面积越大、饱和溶解度越大，溶出越快无水物比有水物有更大的溶解度不同晶型溶出速率不同篮法、浆法、小杯法满足漏槽条件：溶出介质体积不低于药物饱和溶液体积的三倍易氧化的药物，溶出介质更应严格脱气（煮沸法、超声脱气、减压脱气、氦气脱气）取样，一般固体制剂采用一点法T认识的三、药物制剂的含量均匀度检查指小剂量或单剂量的固体制剂、半固体制剂和非均相液体制剂的每片（个）含量符合标示量的程度。目前采用计量型和二次抽样法四、药物制剂分析片剂：外观、硬度、耐磨性；重量差异，小于0.3g（正负7.5%），大于0.3g（正负5%）；崩解时限；溶出度辅料影响：糖类具有还原性，因此氧化还原滴定时不能用强氧化剂。如应用硫酸铈滴定硫酸亚铁而不是API用的高锰酸钾镁离子可形成配合物。需加入掩蔽剂（如酒石酸）；硬脂酸根有较强碱性（乙酸等非水条件中）可被高氯酸滴定。所以可加入草酸作掩蔽剂。胶囊：外观；装量差异，小于0.3g（正负10%），大于0.3g（正负7.5%）；注射剂：装量，装量差异（粉末）；渗透压摩尔浓度=每千克溶剂中溶解溶质克数/相对分子量*n(电荷数)*1000；可见异物（粒径大于50um，灯检法）；不溶性微粒（光阻法和显微计数法，大于10um和大于25um）；无菌；热源或细胞内毒素（鲎试剂法）；辅料：抗氧剂（加掩蔽剂，如甲醛、丙酮），溶剂油本品相当于标示量的百分含量=m/(V*标示量)*100%乳膏：含量测定时溶解基质后测定。五、辅料与药物的相同性分析物理作用：吸附、复合、包埋。相容性分析多采用辅料与药物比例为1:1的物理混合样品常用方法：DSC，HPLC，IR，X衍射第八章药品质量标准制定和药物稳定性研究一、概述我国药品标准体系制定药品质量标准原则（安全有效、技术先进、经济合理）药品质量标准的制定过程主要含量多订为标示量的95%~105%（主药含量较多的片剂）二、药品质量标准主要内容原料药质量标准研究制剂治疗标准研究标准物质（标准品、对照品、对照药材、对照提取物、参照品）药品质量标准起草说明三、药物稳定性研究降解反应药物稳定性研究的原则和有效期预测固体药物制剂稳定性的特定法规对药物稳定性试验的要求药物稳定性考察可采用加速试验法，37～40℃；相对湿度75％（3个月即可表示保质期2年）有效期：一定储存条件下能保持质量的期限；使用期：某特定品种的药物应按规定条件贮存，并在一定时间内使用，过期须经复检，合格方可继续使用贮存期：药品在规定贮存条件下不致变质的期限，过期复检合格，可继续贮存一段时间我国统一使用有效期生物学稳定性一般指药物制剂由于受微生物的污染，而使产品变质、腐